口服羊软骨Ⅱ型胶原蛋白对小鼠佐剂性关节炎抑制作用的研究

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一类严重危害人类身体健康的常见自身免疫性疾病,以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要特征。由于RA的发病机制过于复杂,其发病机制至今尚未明确。完全弗氏佐剂诱导的佐剂性关节炎(ad-juvantarthritis,AA)是目前最为经典、最为常用的RA     

鸭疫里默氏杆菌疫苗的研究进展

鸭疫里默杆菌病由鸭疫里默氏杆菌(Riemerla anatipesfer,RA)引起的一种严重危害世界各国养鸭业的主要细菌性传染病之一.目前,国内外研制的RA疫苗有灭活疫苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗.本文综述了RA疫苗研究现状,探讨了各种RA疫苗的优缺点,并指出了RA疫苗今后的研究方向.     

DNMT1对RA模型大鼠FLS凋亡的影响

[目的]研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对类风湿性关节炎(RA)模型大鼠关节滑膜成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。[方法]采用Real-time qPCR检测对照大鼠和RA模型大鼠FLS中DNMT1表达,检测DNMT1 siRNA转染对抗凋亡基因Bcl-2表达的影响;采用MTT检测DNMT1 siRNA转染对FLS增殖的影响。[结果]与对照组相比,RA模型大鼠FLS中DNMT1表达显著升高,DNMT1表达抑制后,Bcl-2表达显著降低;MTT检测发现,DNMT1表达抑制后,FLS增殖活力显著减弱。[结论]DNMT1表达抑制可能引发RA模型大鼠FLS凋亡。     

鸭疫里氏杆菌吉林分离株camp基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp重组表达质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)中诱导表达出分子量约为37 ku重组蛋白,westemblot分析结果表明该蛋白能够与血清1、2、10、11和17型RA全菌体阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,结果显示其具有良好的特异性和重复性,与RA超声裂解抗原ELISA方法的符合率达到77.5％.研究结果进一步验证了Camp蛋白具有良好免疫原性,并且为RA多种血清型共同抗原,在RA的检测及亚单位疫苗开发中具有良好的应用价值.     

鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

鸭疫里默氏杆菌(Rjemerella anatipestifer,RA)感染是目前危害养鸭业的一种严重的细菌性传染病.国内外虽然对RA有一些研究,但是在毒力因子、致病机理、保护性抗原等方面的研究尚未充分展开.     

湖北部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对湖北省部分地区鸭疫里氏杆菌(RA)进行分离鉴定.应用胰蛋白大豆琼脂(TSA)培养基的分离培养及染色试验、生化试验、PCR鉴定,得到86株RA.染色观察各地RA分离株的细菌形态一致,符合RA特征;生化试验显示86株RA的生理生化特征相似,基本符合RA特征;应用建立的PCR技术均可从这些菌株扩增到RA的特异性基因片段.通...     

抗鸭疫里氏杆菌OMP单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立

鸭传染性浆膜炎病原为鸭疫里氏杆菌(riemerella anatipestifer,RA).目前世界上报道的RA血清型共有21型,且血清型有变化和增多的趋势,RA各血清型间无交叉免疫保护作用[1-3].许多研究表明:RA的抗原类型为荚膜抗原和菌体抗原,血清型不同,荚膜及菌体表面免疫原蛋白也不相同.苏敬良等通过超速离心法提取了RA其外膜蛋白并研究了其免疫原性,认为44 kD的外膜蛋白是其主     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌荚膜免疫的研究

用盐浸法提取了I型鸭疫里默氏杆菌(RA)的荚膜,并制成油佐剂疫苗.其免疫原性测定结果表明:用荚膜粗提物免疫雏鸭可得到很好的免疫保护效果(9/10).同时进行了RA荚膜油佐剂疫苗与各常规佐剂疫苗的免疫效力比较,免疫保护效果依次为:荚膜油乳剂苗、油乳剂灭活苗、蜂胶灭活苗、铝胶RA灭活苗、无佐剂RA灭活苗.结果显示,鸭疫里默氏杆菌荚膜免疫的研究为进一步研制亚单位疫苗打下基础.     

血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制

为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,本研究将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被测菌株均具有较强的毒力,易感雏鸭致死率100％.对其中3株RA分离株CH3、WJ4和YL4的毒力测定结果表明其半数致死量(LD50)分别为2×108 cfu、3.25×108 cfu和2.37×106 cfu.选取5株RA分离株分别制备灭活油乳剂疫苗,分别于5日龄和18日龄对樱桃谷鸭进行两次免疫后,免疫鸭能够产生高水平的RA特异性抗体,对2 LD50 WJ4或CH3攻毒产生很好的保护效果,其中由CH3、CQ3和YXb12制备的灭活油乳剂疫苗对攻毒的保护率高达100％.     

鸭疫里默氏菌16S rDNA基因的单链构象多态性分析

鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）可导致较高的死亡率和淘汰率,其流行给我国养鸭业造成了巨大的经济损失.对该病的准确诊断依赖于细菌的分离和鉴定.以往鉴定RA时,常检测其培养特性、形态染色反应、生理生化特征、菌体的某些化学组成等表型指标,但RA常缺乏特定的表型特征,迄今还没有建立起选择性的培养基,不同学者检测RA生化反应的结果也不一致.此外,在表型上RA与某些细菌还很相似,因此,仅依据表型却不足以对RA做出准确鉴定,故建立检测RA的分子生物学方法十分必要.     

鸭疫里氏杆菌吉林分离株16S rRNA系统分析及其OmpA基因克隆

为研究鸭疫里氏杆菌(RA) 16S rRNA变异与OmpA基因之间的关系,提取了RA吉林分离株JL-RA1和JL-RA3总DNA,并设计特异性引物扩增两株RA保护性抗原OmpA全基因序列.结果显示,扩增出的16S rRNA序列大小均为1478 bp,OmpA片段序列大小均为1164 bp,与预期结果一致.扩增的16S rRNA与GenBank中已知的RA 16S rRNA序列同源性高达99.0％ ～99.9％,扩增的OmpA序列与GenBank中已知的RA OmpA序列同源性达93.3％ ～ 100％,编码蛋白质的氨基酸序列同源性为96％～100％.     

黄连汤对鸭疫里默氏菌的抑菌作用及对菌体形态的影响

研究中药复方黄连汤水提醇沉浓缩物(Ethanol extracts ofCoptidis rhizomadecoction,EeCrd)对鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)的体外抑菌规律及其对菌体形态的影响。黄连汤经水提醇沉后,减压浓缩,制成含生药176g.L-1的EeCrd原液。用PBS将原液倍比稀释成88、88×2-1、88×2-2……88×2-9g.L-1等11个梯度浓度的药液。用纸片扩散法和液体倍比稀释法研究EeCrd完全抑菌时的最小抑菌浓度和不完全抑菌时的亚抑菌浓度;取88和88×2-3g.L-1EeCrd浓度组药液分别作用17和3、6、17h后的细菌,用透射电镜观察菌体形态的变化。纸片扩散法和液体倍比稀释法测定的EeCrd完全抑制RA时的最小浓度均为88×2-2g.L-1,不完全抑菌时亚抑菌浓度为88×2-3g.L-1;88×2-4g.L-1以上稀释度EeCrd基本无抑菌活性;50μL的88g.L-1浓度组的EeCrd作用RA17h后,RA菌体浓缩,变小,最终死亡;50μL的88×2-3g.L-1浓度组的EeCrd作用RA3、6、17h后,RA菌体长度变长,细胞壁变薄,菌内颜色变浅,皱褶减少,纹理不均匀,菌体干瘪、折叠、弯曲,最终死亡。EeCrd可能通过破坏RA外膜结构来抑制细菌增殖。     

一株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏实验

为了有效防治鸭疫里默氏杆菌病,本研究对送检的疑似病料进行鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatidis,RA) PCR检测,将阳性病料进行细菌分离培养,通过革兰染色、生化实验及PCR验证进行鉴定,并对该分离株进行药敏实验.结果 显示,脑、脾、肝病料RA阳性,分离株鉴定为RA,命名为YCSY1,该分离株对环丙沙星...     

鸭疫里默氏杆菌疫苗的研究概况

鸭疫里默杆菌病由鸭疫里默氏杆菌（Riemerlaanatipes—tifer,RA）引起鸭的主要细菌性传染病之一,药物预防和免疫预防是我国目前控制该病的主要措施,但药敏试验表明RA已对生产上的大多常用药物产生耐药性。近些年来,国内外学者都致力于RA疫苗的研究,目前国内外研制成的RA疫苗有单价和多价灭活菌苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗等。由于RA血清型众多,各血清型间无明显交叉保护力,再加之不同地区间流行的血清型也不一致,商品化的RA疫苗虽具有一定的应用前景,但疫苗缺乏普遍性,具有一定区域局限性,往往造成疫苗免疫效果欠佳,从而影响了疫情的防控。本文综述了RA疫苗研究现状,并探讨RA疫苗今后的研究方向。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及其对SPF鸭的致病性研究

为研究鸭疫里默氏菌(RA)对SPF鸭的致病性,本实验室从不同省份疑似RA感染鸭场分离到4株细菌,经菌落形态观察、染色镜检、生化鉴定确定为RA。药敏试验表明这4个分离株对嗯诺沙星、氧氟沙星和先锋霉素V相对敏感,但对卡那霉素和庆大霉素均耐药。外膜蛋白A(OmpA)基因的克隆测序结果显示,4个RA分离株的ompA基因全长均为1 164 bp,编码387个氨基酸;核苷酸同源性为89%～100%。将5×108cfu的HLG1分离株经颈部皮下接种SPF鸭,病死SPF鸭的心、肝、脾、肺、脑和肾具有典型的病变。RA的分离鉴定技术为SPF鸭群RA的检测和监测以及为培育和净化SPF鸭作为RA的致病机理和疫苗研究中的实验动物模型奠定了基础。     

鸭疫里默氏菌基因分型

在鸭疫里默氏菌 (RA)血清分型的基础上 ,以提取的 RA基因组 DNA为模板 ,进行 Rep- PCR扩增。根据扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图谱 ,将分属于 8个血清型的 4 0株 RA区分为 12个不同的基因型 ,不同血清型 RA的图谱有明显差异 ,相同血清型 RA的图谱也存在差异。这些结果显示 ,RA基因组中重复的基因外的回文结构可用于区别相同血清型的不同分离株 ;Rep- PCR作为一种实用的分子生物学方法 ,在分子流行病学研究中可对 RA分离株进行基因定型     

2007年宁波地区鸭传染性浆膜炎的流行情况调查

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里氏杆菌(RA)引起的一种接触性传染病,主要侵害雏鸭、雏鹅等多种禽类,多发于2～7周龄的雏鸭,呈急性或慢性败血症.鸭疫里氏杆菌血清型众多,已经公开报道的就达25种,不同血清型的RA菌株、同一血清型不同源的RA分离菌株,其致病性存在差异,且不同血清型的菌株之间缺乏免疫交叉保护能力.     

15 型鸭疫里氏杆菌分离株的鉴定

鸭疫里氏杆菌 (Riemerella anatipestifer,RA)是鸭传染性浆膜炎的致病病原 ,国际上已报道 2 1个血清型 [1] ,但有人认为 2 0型参考菌株 6 70 /89不属于 RA[2 ] ,故实际上 RA只有 2 0个血清型。国内已出现 1、2、6、1 0、1 1、1 3、1 4型共 7个血清型 [3 ] 。研究表明 ,RA菌苗具     

间接免疫组化法检测鸭疫里默氏杆菌感染和抗原定位

应用鸭源血清1型鸭疫里默氏杆菌(RA)作为抗原。免疫兔制备兔抗RA的IgG。建立了检测雏鸭感染鸭疫里默氏杆菌的间接免疫酶组织化学法。该法检测大肠杆菌(O1、O8、O79、O138)、鸭沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌(5：A)感染发病死亡雏鸭组织。不出现阳性反应，而检测RA感染发病死亡雏鸭组织出现特异性阳性反应；检测RA人工发病死亡雏鸭。可在心脏、肝脏、肺脏、肾脏、十二指肠、盲肠、直肠、脾脏、法氏囊、胸腺、胰脏、脑和腺胃检测到RA抗原，RA抗原分布于细胞浆、组织间隙和血液；检测RA人工感染病例与RA肝脏分离符合率为100％，检测临床可疑病例的血清1型RA的阳性率(92．96％)比细菌分离率(75.12％)高。该法具有特异、直观和敏感的特点，可用于雏鸭RA人工感染和临床感染的诊断、检测及RA抗原定位和RA致病机理的研究。     

科技动态

血清1型鸭疫里默氏杆菌灭活油乳剂疫苗的研制为研究血清1型鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer,RA)的灭活油乳剂疫苗,中国农业科学院上海兽医研究所丁铲等将10株血清1型RA的临床分离株经腿部肌肉注射7日龄雏鸭进行动物体内复壮,结果表明所有被