梅山猪耳成纤维细胞体外培养及其克隆

为获得适合于克隆梅山猪的供体细胞,本试验对梅山猪耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征和核型分析等进行了研究。通过组织块培养法获得梅山猪皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3⁴次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并以此作为供体细胞,获得1头健康梅山克隆猪。     

不同血清浓度对金华猪耳缘组织成纤维细胞体外生长的影响研究

试验研究了不同血清浓度对金华猪耳缘组织成纤维细胞体外生长的影响,初步确定体外培养的适宜血清浓度。采用组织块贴壁培养法在不同血清浓度的培养基中进行条件培养(体积分数为5%、10%、15%),观察细胞形态,采用MTT法进行细胞增殖试验。结果表明,含10%、15%血清培养液相对于含5%血清培养液条件下,细胞从组织块迁移出来的时间较短,培养成纤维细胞生长、增殖迅速,细胞活力较强,MTT值明显增高(P0.05),而10%血清与15%血清比较,则差异不显著(P0.05)。     

青海大通马耳缘组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究

为了建立青海大通马耳缘组织成纤维细胞系,使青海大通马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存,试验采集青海大通马耳缘组织用组织块法制备原代细胞,通过差速消化法和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明:大通马耳缘组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖浓度为4.27×105/mL,倍增时间为31.02 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2n=64,二倍体率为80%,占主体;红色荧光蛋白质粒在该细胞中能进行复制和表达。     

马身猪耳缘组织成纤维细胞的体外培养与鉴定

为研究马身猪体细胞的生物学特性,试验以3日龄马身猪耳缘组织为材料,采用组织块贴壁法建立马身猪耳缘组织成纤维细胞系,并对体外获得的细胞系进行生物学特性检测。结果表明,获得的马身猪耳缘组织成纤维细胞系符合成纤维细胞的基本特征,细胞贴壁生长,呈典型的梭形、星形和多边形,细胞汇合成单层的时间为10~13 d,生长曲线呈S型,中期染色体二倍体（2n=38）占主体,约占细胞总数的84%,符合细胞建系的要求;脂质体（Lipofectamine^TM 2000）转染绿色荧光蛋白质粒（pEGFP-C1）的转染效率为25%。马身猪耳缘组织成纤维细胞系的成功建立为地方猪种遗传资源的保护开辟了新的方法。     

绵羊耳成纤维细胞的体外培养

用组织块法和冷消化法对绵羊耳成纤维细胞在含血清培养液(RPMI—1640)中进行原代和传代培养，探讨动物体细胞培养模式，并对正常细胞形态进行观察。结果表明组织块法和冷消化法培养可获得比较均一、稳定的细胞群，细胞呈典型的成纤维形态，并成功进行传代培养，建立了绵羊耳成纤维细胞系。     

牛胎儿皮肤成纤维细胞体外培养及其特性研究

该试验研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化方法及其生长特征.牛胎儿皮肤细胞贴壁传代2～4次.可成功获得均一稳定的成纤维细胞群体.取传至4代的牛胎儿皮肤成纤维细胞进行细胞计数,并绘制其生长曲线.     

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。     

成鼠耳皮成纤维细胞的体外培养

该研究为获取转基因研究所需的大量供体细胞，进行了以成鼠耳皮组织为材料的成纤维细胞的培养工作。实验改进了胰蛋白酶消化的程序，成功地分离和培养了成鼠耳皮成纤维细胞。细胞形态正常且生长迅速。     

藏野驴皮肤成纤维细胞分离培养及生物学特性分析

为了研究藏野驴成纤维细胞分离培养方法及生物学特性,以7岁龄藏野驴耳部皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行细胞原代培养,采用胰酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,通过细胞形态观察、生长曲线测定、细胞周期和免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果显示,成纤维细胞生长曲线呈“S”形,细胞生长状态良好,细胞特异性标记免疫荧光染色显示FSP-1呈阳性表达。结果表明,成功建立了藏野驴成体耳部皮肤成纤维细胞体外分离、培养和鉴定方法,为藏野驴种质资源保护、细胞水平及分子水平的研究奠定了基础。     

马皮肤成纤维细胞的分离与体外培养

研究用小组织块直接培养法和酶消化法成功地分离了马皮肤成纤维细胞,并对其进行了体外培养,同时筛选出消化马皮肤组织块的适宜酶及酶浓度,获得了马皮肤成纤维细胞的生长曲线,并发现至少在传至第12代时有81.3%的染色体还保持正常的倍数(2n=64)。     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎，用2种不同的消化液消化后，将所得的牦牛胎儿成纤维细胞（yakembryonicfibroblasts，YEF）培养于不同血清含量的RPM11640培养液中，并接种于2种不同材质的培养瓶表面，对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清（FBS）添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明，含150mL／LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长，可传代27次以上；经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2．5g／L胰蛋白酶消化，所得的YEF的细胞活率差异不显著（P〉0．05），其原代细胞在含100mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著（P〈0．01）；不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

奶牛耳成纤维细胞的分离培养及培养条件的研究

本试验研究了奶牛耳成纤维细胞的体外培养,培养液、消化液、胰岛素和血清饥饿对细胞的影响。采用组织块贴壁法培养。了奶牛耳成纤维细胞,采用0．25％胰酶差别消化获得了纯化的奶牛耳成纤维细胞。用三种不同的培养液即DMEM（低糖）、DMEM（高糖）、DMEM／F12,对细胞进行培养,结果细胞群体倍增时间均在2．3-2．5d,DMEM（高糖）的培养效果稍好。用三种不同的消化液（0．25％胰蛋白酶,0.02％EDTA,0．25％胰蛋白酶＋0．02％EDTA）对传代钿跑进行消化．结果表明0．25％胰蛋白酶＋0D2％EDTA所用时间短,消化后培养细胞贴壁率高。在培养液中添加姨岛素能促进细胞的生长。对指数生长期的细胞进行血清饥饿后,细胞仍保持着较高的活力。     

天祝白牦牛5种组织成纤维细胞的制备及培养特性研究

为建立天祝白牦牛肌肉、胚胎、肾脏、耳、肝脏等5种组织成纤维细胞体外制备、分离、培养成纤维细胞的方法,采用组织块法和酶消化法制备这5种组织成纤维细胞。结果显示:用组织块法成功制备了耳组织成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快。用消化法成功制备5种组织成纤维细胞,复苏后较冻存前细胞存活率有所下降,但均保持在90%以上,复苏后细胞的存活率:胚胎>耳>肌肉>肾脏>肝脏。5种组织成纤维细胞在离体培养条件下的生长曲线均呈"S"型,生长速度:肌肉>胚胎>肾脏>耳>肝脏。结果表明:用消化法成功地从天祝白牦牛5种组织中体外制备、分离和培养了成纤维细胞,用组织块法成功地体外制备了耳组织成纤维细胞。     

马皮肤成纤维细胞的体外培养与冷冻保存

本研究利用小组织块直接培养法得到了成年马皮肤成纤维细胞的原代培养物,再用酶消化法处理,能够纯化马皮肤成纤维细胞。成纤维细胞的冷冻保存,首先采用手工冷冻法,选用含有不同浓度保护剂如：二甲基亚砜（DMSO）、乙二醇（EG）、甘油（GC））和新生牛血清（NCS）的12种冷冻液对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存;其次用2种冷冻方法对马皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,以24 h贴壁率评价冻存效果。结果表明,10% DMSO和20% NCS的DMEM冻存液,对马皮肤成纤维细胞的冻存效果好(24 h贴壁率84.98%)。从冷冻方法来看,程序冷冻法(86.32%）优于手工冷冻法（79.98%)(P<0.05)。     

陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养

本研究建立陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养体系,采用组织块培养法可以获得陆川猪耳部成纤维细胞。用0.25%胰蛋白酶＋0.02%EDTA消化液消化细胞、用含有10%FBS的DMEM对细胞进行培养,能很好的支持陆川猪耳部成纤维细胞的生长。传3代后,观察到培养的细胞形态逐渐均一,为典型的成纤维细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形...     

不同培养体系对胎牛成纤维细胞体外培养的影响

研究不同培养体系对胎牛成纤维细胞体外培养的影响及用牛血清白蛋白代替血清培养胎牛成纤维细胞的可行性。利用M199、DMEM、α-MEM、DMEM/F124种培养体系通过组织块贴壁培养对成纤维细胞体外培养液进行筛选,以α-MEM组细胞生长状况较好。分别用含2、4、6、8、10mg/mL BSA的α-MEM培养液对胎牛成纤维细胞进行原代及传代培养,5种浓度的BSA对原代培养时细胞开始游离出组织块的时间影响不明显,均在培养后的48h有成纤维细胞和上皮细胞混合游离出,但在传代培养时,胎牛成纤维细胞在8mg/mL BSA浓度的α-MEM中贴壁率较高。结果表明:培养胎牛成纤维细胞时,可用BSA代替血清,较适宜的培养体系为含8mg/mL BSA的α-MEM培养液。     

石歧杂鸡胚胎成纤维细胞的体外培养

用组织决法对石歧杂鸡胚胎成纤维细胞进行原代和传代培养，探讨禽类胚胎成纤维细胞适宜的培养模式。成功获得较均一的稳定的细胞群体，并成功地对细胞进行了冷冻保存和复苏。对于进行大规模的动物细胞培养具有重要的指导意义。     

牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存

利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。     

牛胎儿成纤维细胞分离与体外培养

本研究以 4 5d牛胎儿为材料 ,使用 0 .2 5 %胰酶 + 0 .0 4 %EDTA消化液 ,分离得到牛胎儿成纤维细胞 ,体外培养传代至第 2 8代。本实验描绘出牛胎儿成纤维细胞生长曲线 ,并发现α MEM是一种适合牛胎儿成纤维细胞生长的培养基。分离得到的牛胎儿成纤维细胞传至第 1 8代时核型仍然正常 ,冷冻、解冻后细胞可继续传代     

早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞分离培养与鉴定

为了建立早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞体外分离培养体系,采用植块法和酶消化法制备这两种组织成纤维细胞。结果显示,用植块法制备了耳缘成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快;用酶消化法制备了胚胎和耳缘两种组织成纤维细胞,复苏后细胞的存活率:胚胎(96.8%)＞耳(94.7%)。2种组织成纤维细胞生长曲线均呈"S"型,胚胎组织(倍增时间29.7 h)生长速度快于耳组织(倍增时间31.2 h)。用免疫组织化学染色鉴定证实,分离培养的成纤维细胞中间丝被染成棕黄色,波形蛋白呈阳性反应。