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1.
黑曲霉Uγ-2胞外菊粉酶的分离纯化 总被引:5,自引:2,他引:5
黑曲霉(Aspergillus niger)Uγ-2 菊粉酶经超滤浓缩,硫酸铵分级盐析,DEAE-纤维素离子交换层析,SephadexG-100凝胶过滤,提纯得到单一组分,经电泳鉴定达到电泳纯。测定比活力为220 5 U mg,提纯倍数为7 71。 相似文献
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蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶的分离提取及纯化鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
从蜗牛肝脏组织制备粗酶液后,经硫酸铵分级分离和两次聚丙烯酰胺凝胶制备电泳,纯化到了蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶。该酶经SDS-PAGE电泳分析显示为单一条带,其表观相对分子量为37KD。本法纯化的蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶,比活力达到992.3U/mg,提纯倍数达8.45倍,回收率为25.12%。 相似文献
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《广西农学报》2015,(6)
为研究开辟香蕉资源综合利用新途径,以香蕉皮及麸皮为主要原料,黑曲霉CICC40493为发酵菌种,采用单因素和正交试验,研究确定固态发酵果胶酶的基础培养基配比。结果显示,果胶酶最适基础培养基为:香蕉皮渣3g、麸皮7g、硫酸铵0.45g、水15m L;影响酶活力的主次顺序为:麸皮和香蕉皮渣配比硫酸铵添加量去离子水添加量,最佳配比的培养基在自然p H值,装瓶量10g干料/250m L三角瓶,接种量1.0m L的条件下,28℃恒温培养72h,获得的果胶酶总活力为10853.54U。试验结果表明利用香蕉皮接种黑曲霉CICC40493固态发酵生产果胶酶是可行的,为开辟香蕉资源综合利用新途径的研究提供数据支持。 相似文献
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新鲜鸭肝经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝过氧化氢酶电泳纯制品,回收率为18.23%,比活达4780.38U/mg,纯化倍数为66.15。最适温度为40℃,最适pH为7.0,该酶在20~40℃,pH5~8内稳定.经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为250KD,亚基分子量为62.5KD。 相似文献
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以黑曲霉固体发酵法产生的粗菊粉酶为试材,采用葡聚糖凝胶层析法和DEAE纤维素52柱层析法对经过硫酸铵沉淀后的粗酶进行了分离纯化,得到接近电泳纯的高纯度菊粉酶.结果表明:以菊粉为底物研究酶活时,DEAE-纤维素52离子交换层析得到较好的分离效果,主要活力峰比活力12.64U·mg-1提纯了6.37倍;以蔗糖为底物时,SephadexG100分离效果好,比活力35.57U·mg-1提纯了3.78倍. 相似文献
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为合理利用橘皮进行工业化提取果胶酶,采用平板分离法进行果胶酶高产菌株的筛选与产酶条件的优化。结果表明:经过初筛和复筛分离得到1株果胶酶的高产菌株,根据形态特征观察初步鉴定其为黑曲霉。其固态发酵最优产酶条件为:橘皮粉0.5g,硫酸铵0.20g,麸皮10g,水10mL,28℃培养3d,在此条件下,该菌株的酶活力可达到1 447.86U·mL-1。 相似文献
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以红薯块根为材料,对红薯中的过氧化物酶进行提取、分离、纯化并测定其性质。结果表明:经40%~80%饱和度的硫酸铵分级分离、Sephadex G-100凝胶过滤、Concanavalin A亲和层析三个步骤,获得纯化的红薯过氧化物酶,酶纯化倍数为26.56倍,回收率0.92%,比活性3841.80 U/mg,SDS-PAGE电泳显示酶分子量为23 kDa。红薯过氧化物酶以愈创木酚为底物时λmax=470 nm,Km=3.031 mmol/L,酶的最适pH值为5.0,最适温度是35℃。酶的热稳定性较高,60℃保温20 min,残存相对活性为72.40%;酶的低温贮存稳定性很高,0~4℃冰箱中贮存20 d后,残存相对活性为97.28%。 相似文献
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短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究 总被引:1,自引:1,他引:1
将短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4液体的发酵液离心去菌体,用硫酸铵盐析得粗酶,透析除盐后进行Sephadex G-75柱层析得到电泳纯碱性蛋白酶,用该法提纯的碱性蛋白酶比活力从粗酶液的155.5 U/mg提高到了954 U/mg,回收率为27.6%.该酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适作用pH为10,且该酶具有较高的热稳定性和耐碱性.经SDS-PAGE测定,其分子质量约为2.5 ku. 相似文献
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短小芽孢杆菌XZG33耐高温酸性β-甘露聚糖酶酶学性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)XZG33发酵液中分离纯化甘露聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。[方法]利用硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose DE52阴离子交换层析和Sephadex G-100分子筛凝胶过滤层析等方法,分离纯化到了均一的蛋白酶,酶纯度提高了39.7倍,回收率20.2%。通过SDS-PAGE电泳和SephadexG-75分子筛凝胶电泳测得酶蛋白分子量是40.0 kDa,为单亚基蛋白。酶最适作用pH值5.0,最适作用温度60℃,在pH值2.0~8.0范围内酶活性及稳定性较高。在80℃以下保温1 h,残余酶活还在80.0%以上。二价金属离子Mg2+、Ca2+、Co2+及Mn2+对酶有明显激活作用。酶对槐豆胶有强的底物水解特异性,而对淀粉、羧甲基纤维素钠以及桦树木聚糖水解活性极低。在最适作用条件下,以槐豆胶为底物测定Km为4.6 mg/ml。[结论]鉴于短小芽孢杆菌XZG33甘露聚糖酶具有以上优良的酶特性,它在食品原料及功能性低聚糖的开发方面有着潜在的应用价值。 相似文献
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采用二次硫酸铵沉淀和离子交换层析透过法分离溶菌酶,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS\|PAGE)检测其纯度,研究鸡蛋清中溶菌酶的分离提取工艺。鸡蛋清原液用Tris\|HCl缓冲液稀释5倍,4℃下静置6 h,经50%硫酸铵沉淀后收集上清,再经80%硫酸铵收集沉淀后溶于pH 90的Tris\|HCl后经Q\|Sepharose FF阴离子交换层析直接在透过液中一步就可分离得到SDS\|PAGE电泳纯的溶菌酶,酶比活由14413 U·mg-1提高到2 235 U·mg-1,酶活提高超过15倍,回收率为1576%。通过硫酸铵两级沉淀后只需收集Q\|Sepharose FF阴离子交换层析的透过液即可分离得到溶菌酶,同时还可一次性制备其他中性和酸性蛋白,简化了工艺,降低了生产成本。 相似文献
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用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶,提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后,得到纯化的多酚氧化酶,纯化们数为10.78,纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳,分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。 相似文献
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乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化 总被引:14,自引:0,他引:14
用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶,提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后,得到纯化的多酚氧化酶,纯化们数为10.78,纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳,分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。 相似文献
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抗猪链球菌戊糖乳杆菌素的纯化及特性研究 总被引:2,自引:2,他引:0
对分离自健康未断奶仔猪粪便的抗猪链球菌的戊糖乳杆菌LPL1—5所产细菌素进行提取、纯化,以及理化和生物学特性研究。戊糖乳杆菌LPL15所产细菌素经饱和度为80%的硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶树脂G-10层析和SPSepharoseFastFlow阳离子树脂交换层析可得到纯化的细菌素,其比活力为1732.16AU/mg,纯度较发酵液提高了26.37倍;Tricine—SDS-PAGE凝胶电泳及活性检测试验结果显示,3313~5856u范围内存在1条活性蛋白带;纯化后细菌素特性分析发现,该细菌素具有良好的热稳定性、酸耐受性及溶解性,并基本确定其等电点为8.7;胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶和蛋白酶K处理可使细菌素完全失活;该细菌素抑菌谱较广,不仅对猪链球菌(Sreptococcussuis)、单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、金黄色葡萄球菌(sfnphylococcus aereu)等革兰氏阳性菌有明显抑制作用,同时对大肠杆菌(Escherichiacoli)及假单胞菌(Pseudomonasspp.)等革兰氏阴性菌也表现出抑菌活性,具有作为食品防腐剂良好的应用前景。 相似文献
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以仙人掌为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀法得到超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)粗酶液。然后用Sephadex(葡聚糖凝胶)G-75层析柱层析对粗酶液进行进一步纯化,最后用邻苯三酚法测定酶活力,并对酶活力主要影响因素(包括pH值、温度、抑制剂)进行了研究。结果显示仙人掌SOD酶比活力为751.56U.mg-1。pH值为7.5~8.5时酶活力最大,稳定性也好。温度维持在25~30℃时酶活力最高。由于过氧化氢和氰化钾均能使仙人掌SOD的酶活力显著下降,因而可以初步判断从仙人掌中提取到的SOD是Cu.Zn-SOD。 相似文献