脾脏METTL3、METTL14基因对鸡空肠弯曲菌感染的表达调控

m⁶A甲基化修饰(N6-Methyladenosine Modifications)是常见的RNA修饰之一,可以改变多种生理过程,且与免疫功能的调节密切相关。METTL3和METTL14是甲基转移酶的2个重要组成部分。为探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)感染对鸡METTL3、METTL14基因表达的影响,本实验将120只3日龄空肠弯曲菌阴性SPF鸡随机分为2组,对照组60只接种PBS,实验组60只接种空肠弯曲菌菌液。分别在接种后4、8、12、16、20、24 h采集实验组、对照组脾脏组织样品并提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测不同时间点METTL3、METTL14基因在实验组、对照组中的表达水平。结果显示,接种后4、8、20 h,实验组METTL3、METTL14基因的表达量均高于对照组,接种后12、16、24 h,实验组METTL3、METTL14基因的表达量均低于对照组。本研究初步揭示了METTL3、METTL14基因在空肠弯曲菌感染中发挥的表达调控作用,这种调控作用可能具有时间特异性,该...     

可变剪接在肌肉发育中的作用研究进展

可变剪接发生在DNA转录为前体mRNA后,通过该过程可以使单个基因产生多个mRNA异构体和蛋白质亚型,增加了转录后加工过程中基因的信息多样性和蛋白质丰度。剪接体、剪接因子和其他RNA结合蛋白催化识别剪接位点和可变剪接外显子,参与调节可变剪接,从进化的角度来看,可变剪接在一定程度上为生物进化提供了驱动力。可变剪接作为组织特异性调节剂,参与肌肉发育的整个过程。在成肌细胞分化过程中,多聚嘧啶序列结合蛋白（polypyrimidine tract-binding protein,PTB）和RNA结合蛋白4（RNA-binding motif protein 4,RBM4）分别与原肌球蛋白的内含子多嘧啶序列和富含CU的内含子结合,共同调节α-原肌球蛋白的肌肉细胞特异性外显子选择的活性。RBM4可通过下调PTB表达并颉颃PTB在外显子选择中的活性来协同作用于肌细胞增殖分化的特异性剪接;肌球蛋白Ⅰ亚型通过可变剪接产生4种不同长度杠杆臂的蛋白质,影响肌肉的张力与拉伸激活;可变剪接可能是产生肌肉类型特异性的重要机制,选择性剪接产生具有不同催化动力学的肌球蛋白重链同工型,催化动力学差异地调节收缩性,从而影响肌纤维类型和肌肉功能。作者通过阐述可变剪接事件在肌肉发育及肌纤维形成过程中的主要作用,揭示可变剪接对肌肉发育的作用,以期为后续研究肌肉的发育调控机理提供参考依据。     

去势对不同日龄乌蒙凤鸡肌肉品质影响的研究

为研究去势对乌蒙凤鸡肌肉品质的影响,本试验选取体重约500 g的45日龄乌蒙凤鸡300只,公母各半,公母组均随机平均分成对照组与试验组,试验组使用手术法摘除睾丸或卵巢,对照组进行假手术。分别于180、240日龄和300日龄屠宰测定肌肉物理性质,每组各日龄随机筛选公、母鸡各3只测定其他肌肉品质相关指标。结果表明：去势对乌蒙凤鸡肉品质物理指标均无显著影响;去势增加公、母鸡肌苷酸及游离氨基酸含量（P<0.01）,对公、母鸡肌内脂肪含量无显著影响,去势仅导致180日龄试验组公鸡粗蛋白降低及粗脂肪含量升高（P<0.05）;去势降低公鸡肌纤维直径与面积（P<0.01）,提高公鸡肌纤维密度（P<0.01）,去势对母鸡肌纤维特性的影响与公鸡一致,母鸡随日龄增长,去势的影响逐步降低（P<0.05）,说明去势可有效改善乌蒙凤鸡肌肉品质。     

硫胺素在鸡肌肉中的沉积规律研究

为研究鸡肌肉组织中硫胺素的沉积规律,以如皋鸡和文昌鸡为素材,分不同家系、周龄、组织进行取样,采用高效液相色谱法检测样品中的硫胺素含量。结果显示,不同品种、家系、周龄及组织间硫胺素含量均存在显著或极显著差异（P<0.05或P<0.01）。此外,硫胺素含量的遗传力为0.494,与体重的遗传相关为-0.404。以上结果初步表明,硫胺素在机体的沉积受遗传因素影响,且表现为一定的时间和组织变化规律,可以通过选择进行提高。     

饲粮的不同蛋白质水平对12周龄麒麟鸡肌肉品质和肌肉营养成分的影响

试验旨在研究饲粮的不同蛋白质水平对麒麟鸡肌肉品质和肌肉营养成分的影响。试验选取1日龄体重相近的健康麒麟鸡200只,随机分为5组,每组4个重复,每个重复10只鸡。各组分别饲喂蛋白质水平为15%、17%、19%、21%、23%的试验饲粮,能量水平均为12.40 MJ/kg,试验期为12周,通过屠宰实验、肌肉养分和组织结构分析,确定基于麒麟鸡肌肉品质的适宜饲粮蛋白质水平。结果表明:随着饲粮蛋白水平的提高,肌肉粗蛋白和粗脂肪含量逐渐提高;胸肌剪切力、pH值、失水率无显著影响,滴水损失显著降低(P0.05);腿肌剪切力、pH值无显著变化,腿肌失水率和滴水损失显著降低(P0.05);19%饲粮蛋白水平组可降低胸肌纤维直径(P0.05)和腿肌纤维直径(P0.05)。以麒麟鸡肌肉品质作为评价指标的适宜饲粮蛋白质水平为19%。     

山羊MGAT5基因克隆及其在不同组织和成肌分化过程中的表达研究

为了探究山羊糖基化酶N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(N-acetylglucosaminyl transferase, MGAT) 5基因序列信息及其在不同组织和成肌细胞分化过程中的表达变化,试验以罕山白绒山羊为研究对象,利用PCR技术克隆了山羊MGAT5基因编码序列(coding sequence, CDS),并对其进行了生物信息学分析,同时利用反转录荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)与Western-blot技术检测MGAT5基因在山羊不同组织(心脏、肺脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌)及成肌细胞分化过程中的表达情况。结果表明：山羊MGAT5基因CDS全长为2 220 bp,编码739个氨基酸,与绵羊MGAT5基因亲缘性较高,与小鼠亲缘性较远;MGAT5蛋白的等电点为8.49,为稳定蛋白;MGAT5基因在罕山白绒山羊在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌均有表达,在肾脏中表达量最高,其次为脾脏、肺脏、心脏、肝脏,在背最长肌中表达量最低;MGAT5基因的mRNA和蛋白表达量在山羊成肌细胞分化过程中均呈逐渐降低趋势。说明MGAT5基因的表达...     

IHH过表达对鸡原代软骨细胞增殖和分化的影响

为探究印度刺猬因子(IHH)基因对鸡原代软骨细胞增殖和分化的调控作用,本研究根据IHH基因序列信息,构建真核过表达载体(OV-IHH);采用双酶切和测序进行鉴定,并将其转染鸡原代软骨细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,对软骨细胞进行成骨诱导分化至21 d,采用ALP试剂盒检测细胞ALP活性。结果表明,IHH真核过表达载体构建成功,与对照组和空载体组(OV-NC)相比,过表达组IHH基因的mRNA表达显著增加(P<0.01),过表达效率扩大2 700倍左右。过表达IHH促进细胞周期从G1期到S期的转换,从而促进增殖,抑制细胞凋亡,且ALP活性升高,促进细胞分化。综上,IHH基因显著影响鸡软骨细胞的生长发育,研究结果为进一步解析IHH基因调控鸡匍匐性状的作用机制提供理论依据。     

Ide基因通过AKT调控成肌细胞增殖和分化的研究

旨在了解胰岛素降解酶（insulin-degrading enzyme,Ide）在猪不同组织中的表达情况,及其在C2C12成肌细胞增殖和分化中的作用。本研究利用RT-PCR和Western blotting技术检测了Ide在8月龄雄性小型猪不同组织中的表达;利用siRNA技术干扰Ide表达,检测了Ide在C2C12成肌细胞增殖、凋亡和分化中的作用,试验分为Ide-siRNA处理组和NC-siRNA（negative control）对照组,每组3个重复。结果显示,Ide在猪的不同组织（包括大脑、股四头肌、股二头肌、背最长肌、心、肝、脾、肺、肾和睾丸）中广泛表达,其中,在股四头肌、肾和睾丸中表达量相对更高。Ide-siRNA转染成肌细胞48 h后,Ide表达量极显著下降（P<0.001）。CCK-8检测显示,干扰Ide表达促进了成肌细胞的增殖,细胞周期相关基因表达也显著升高,同时发现干扰Ide表达未引起成肌细胞凋亡。利用2%马血清诱导成肌细胞分化的同时转染Ide-siRNA以干扰其表达,在分化的第2和5天发现,与对照组相比,分化相关基因Myog、Myhc等在干扰组中的表达均显著下降,提示成肌细胞的分化受到了抑制。进一步的研究还发现,在分化的第5天,Akt2和磷酸化的AKT（P-AKT）表达量下降。综上,Ide在猪的不同组织中广泛表达,以肌肉、肾和睾丸中表达量更高。干扰Ide表达促进C2C12成肌细胞的增殖,分化时干扰Ide表达则通过Akt2/P-Akt/Myog途径抑制C2C12成肌细胞的分化。     

鸡KLF3基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响研究

为研究鸡KLF3(Gallus gallus Krüppel-like factor 3,gKLF3)基因的表达规律及其对脂肪细胞分化的影响,利用qRT-PCR检测了其在肉鸡脂肪组织和脂肪细胞中的表达特点,并利用基因过表达技术研究gKLF3基因对脂肪细胞分化的影响。结果显示,gKLF3在2~10周龄肉鸡腹部脂肪组织中持续表达,10周龄高脂肉鸡腹部脂肪组织gKLF3表达量显著高于低脂肉鸡(P0.05);gKLF3在鸡成熟脂肪细胞的表达量低于前脂肪细胞(P0.01);体外培养的鸡前脂肪细胞经油酸诱导分化后,gKLF3基因表达量均有低于对照组的趋势;过表达gKLF3基因有抑制脂肪细胞分化,以及抑制C/EBPα、FAS基因表达(P0.01)的趋势。研究结果表明,gKLF3基因在鸡腹部脂肪组织生长发育过程中发挥重要作用,其可能是通过抑制C/EBPα、FAS基因表达进而抑制脂肪细胞分化实现的。     

过表达FOXL2基因对鸡胚性腺分化的影响

试验旨在研究FOXL2基因对鸡胚性腺分化的影响。本试验分为试验1组、试验2组和空白对照组（鸡胚数量分别为260、100、20枚）,试验组通过胚盘下腔注射的方法分别将pLV-FOXL2慢病毒重组质粒、pLV空质粒注入胚胎期第2天的鸡胚,空白对照组不做处理并与试验组一起孵化至出雏,利用CHD1基因遗传性别鉴定的方法对出雏的雏鸡进行性别检测,分析其性腺解剖学、组织学结构变化,并利用免疫组化的方法检测性腺FOXL2和CYP19A1蛋白表达量。结果显示,试验1组遗传性别为公的23只,遗传性别为母的18只,表型性别为公的21只,表型性别为母的18只,其中有2只表型性别不典型,左侧性腺发生变化,朝卵巢结构转变;试验2组遗传性别为公的9只,遗传性别为母的12只,表型性别与遗传性别一致。阳性PCR检测结果显示,试验1组获得阳性个体10个,阳性率为24.4%（10/41）;试验2组获得阳性个体8个,阳性率为38.1%（8/21）。性腺解剖学结果显示,阳性pLV-FOXL2雄性鸡胚左侧性腺体积明显大于右侧性腺,表现膨松状态;组织切片结果显示,雄性鸡胚性腺具有典型的卵巢皮质层和髓质层结构;阳性pLV-FOXL2雌性鸡胚性腺的发育无明显变化。免疫组化结果显示,FOXL2和CYP19A1蛋白在试验1组左右侧睾丸中的表达量与空白对照组母鸡卵巢中的表达量相似,显著高于试验2组（P<0.05）。以上结果表明,FOXL2基因可能促进鸡雄性性腺的性反转,在鸡性腺分化和发育过程中发挥着重要的作用。     

m6A甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛组织及脂肪细胞中的表达

本研究旨在探究m⁶A RNA甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛(Bos grunniens)不同组织、前体脂肪细胞增殖与分化过程中的表达模式和前体脂肪细胞分化过程mRNA m⁶A的变化水平。采用qRT-PCR检测牦牛皮下脂肪、肌肉、心、肝、脾、肺、肾和皮下脂肪不同时期(18和30月龄)METTL3及WTAP的mRNA表达水平。应用I型胶原酶消化法获取牦牛前体脂肪细胞,油红O染色和脂肪分化标志基因的检测建立牦牛前体脂肪细胞分化模型,以及qRTPCR检测前体脂肪细胞增殖分化阶段METTL3和WTAP的mRNA表达水平。结果表明,肝脏组织中METTL3表达最高(P<0.05),皮下脂肪组织表达量最低(P<0.05);WTAP在皮下脂肪组织中的表达最为丰富,脾脏中的表达量最低(P<0.05)。30月龄皮下脂肪组织中METTL3和WTAP mRNA表达量高于18月龄。前体脂肪细胞诱导分化12 d时,细胞中出现多而密的脂环,脂肪细胞分化特异性标志基因FABP4、C/EBPα和PPARγ第12天的表达量显著高于第0天(P<0.05)。METTL3和WTAP的表达量在细胞增殖阶段(24、48和72 h)呈现“下降-上升”的表达趋势(P<0.05)。在牦牛前体脂肪细胞分化阶段(0、4、8和12 d),METTL3表达量呈现“上升-下降-上升”的趋势,WTAP呈现“上升-下降”的趋势。细胞分化阶段mRNA m⁶A水平呈现逐渐上升的趋势,在分化12 d时细胞内RNA的m⁶A丰度最高(P<0.05)。本研究获得METTL3和WTAP在牦牛不同组织和前体脂肪细胞增殖分化阶段的变化规律及细胞分化过程中mRNA m⁶A水平变化,初步揭示WTAP和METTL3对牦牛脂代谢具有重要的调控作用。     

鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型的建立

本实验建立了鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型,增殖和融合培养液分别为添加5％胎牛血清(FCS)和添加10％FCS+0．5％鸡胚浸出液的DMEM培养液。结果表明:培养的骨骼肌细胞增殖和融合情况良好,可存活1周以上。胰岛素(INS,10-1 000 ng/mL)处理48 h显著促进骨骼肌细胞增殖,而100-1000 ng/mL INS处理96 h可显著促进骨骼肌细胞融合。该模型可用来研究激素、生长因子或营养物质对骨骼肌细胞增殖和分化的影响。     

miR-143在肌细胞中的表达及其影响

本试验旨在研究microRNA-143(miR-143)对小鼠肌细胞增殖和分化的影响。利用Real-time PCR方法对细胞不同分化时期进行检测,并且在小鼠肌细胞C2C12中通过转染miR-143 mimics和Inhibitor对标志基因myogenin(MyoG)进行检测,然后利用免疫荧光和Western blotting方法对组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因表达水平进行检测。结果表明,miR-143与肌细胞的增殖和分化密切相关,过表达miR-143后,肌细胞标志基因MyoG出现下调,敲低后结果相反,且在分化细胞中过表达miR-143,免疫荧光和Western blotting结果显示,标志基因MHC的表达水平下降。因此,miR-143是一个潜在的影响肌肉生长发育的microRNA,为以后肌肉发育和功能的研究提供了一个新的资料。     

文昌鸡GnRHR基因在不同组织中差异表达的研究

采用半定量RT-PCR方法检测文昌鸡处于性腺轴(下丘脑-垂体-性腺)的不同组织中GnRHR基因的表达水平,结果表明:GnRHR基因mRNA表达于鸡的3种组织--下丘脑、垂体和卵巢;GnRHR mRNA在3种组织中的表达量不同:下丘脑和垂体中表达量较高,卵巢中表达量较弱.     

钙蛋白酶基因在鸡不同组织和品种中的表达差异

为了探讨钙蛋白酶(calpain,CAPN)基因在鸡不同组织和品种中的表达差异,本研究采用半定量RT-PCR方法研究了CAPN基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。结果表明:CAPN基因表达于优质鸡的10个不同组织中,肝脏和胸肌中的表达量最高并显著高于其他组织(P<0.05);优质鸡胸肌组织中CAPN基因的表达量显著高于艾维茵肉鸡和宝万斯尼拉蛋鸡品种(P<0.05),优质鸡品种之间以及肉鸡与蛋鸡品种间差异不显著(P>0.05)。结果证明钙蛋白酶是一种在鸡体内普遍存在的蛋白,CAPN基因在鸡不同组织和品种中的表达存在显著差异。     

Expression of Myogenic Regulatory Factors in Myocardium and Skeletal Muscle at Different Fetal Stages

The topic of this research was to investigate the expression pattern of myogenic regulatory factors (MRFs) in the myocardium and skeletal muscle of sheep at different fetal stages,the fetuses of Tan sheep at 60 (E60),70 (E70),80 (E80) and 90 days (E90) of gestation were selected as the research objects,and the myocardium and skeletal muscle were collected.The histogenesis of myocardium and skeletal muscle during fetal development were observed by HE and oil red staining.The expression patterns of MRFs in myocardium and skeletal muscle during fetal development and the expression differences of MRFs between myocardium and skeletal muscle at the same stage were tested by Real-time quantitative PCR.The results of HE staining showed that the microstructure of myocardium and skeletal muscle was very different,myocardial fibers crisscross into a network with high density,which were more mature;the density of skeletal muscle fibers were low with large gaps,the number of fibers from E60 to E90 increased gradually,and the structure fiber bundles was very clear.The results of oil red staining showed that there were no fat droplets stained red in myocardium and skeletal muscle tissues,which means that these two tissues form E60 to E90 did not have fat differentiation.The results of Real-time quantitative PCR showed that the expression of MYOG,Myf5 and Myf6 genes in myocardium decreased continuously from E60 to E90 day,but there was no MYOD gene expression.The expression of MYOD,MYOG and Myf6 genes in skeletal muscle from E60 to E90 increased gradually,among which the level of MYOG gene was the highest,and the expression of Myf5 gene fluctuated periodically.The above results indicated that the skeletal muscle was at the stage of rapid development from E60 to E90,however,the myocardial tissue had been roughly formed,which led to the expression of MRFs in skeletal muscle tissue was much higher than that in myocardial tissue,and MYOG gene played an important role in maintaining the rapid development of skeletal muscle.     

生肌调节因子在绵羊不同胎儿期心肌和骨骼肌中的表达

本试验旨在探究生肌调节因子（myogenic regulatory factors,MRFs）在绵羊不同胎儿发育时期心肌和骨骼肌组织中的表达情况。选取妊娠60（E60）、70（E70）、80（E80）和90 d（E90）4个不同时期的滩羊胎儿作为研究对象,采集骨骼肌和心肌组织,通过HE和油红染色观察心肌和骨骼肌在胎儿发育过程中发生的组织形态学变化;通过实时荧光定量PCR研究绵羊胎儿发育过程中MRFs在心肌和骨骼肌组织中的表达规律以及同一胎儿期MRFs在心肌和骨骼肌中的表达差异。HE染色结果显示,心肌组织和骨骼肌组织的微观结构差异明显,心肌肌纤维密度大,纵横交错成网状,和骨骼肌相比发育的更加成熟;骨骼肌组织肌纤维密度小,间隙大,E60~E90肌纤维数量逐渐增加,肌纤维束结构清晰分明。油红染色结果显示,心肌和骨骼肌组织在4个时期均未出现被染成红色的脂滴,表明E60~E90两个组织均没有分化出脂肪。实时荧光定量PCR结果显示,E60~E90胎儿心肌组织中MYOG、Myf5和Myf6基因表达量持续降低,但是没有MYOD基因表达;E60~E90骨骼肌组织中MYOD、MYOG和Myf6基因表达量持续上升,其中MYOG基因表达水平最高,Myf5基因的表达发生周期性波动。以上结果表明,E60~E90胎儿骨骼肌正处于快速发育阶段,而心肌组织此时已大致成型。因此,骨骼肌组织中MRFs的表达量远远高于心肌组织,且MYOG基因对于维持骨骼肌的快速发育发挥了重要作用。     

蛋鸡骨骼肌卫星细胞分离培养及鉴定

采用组织块分离法从蛋鸡鸡胚腿部肌肉组织中体外培养获取鸡骨骼肌卫星细胞,对培养的细胞进行了传代、冻存和复苏研究,同时从分子表达水平对分离培养的卫星细胞进行了鉴定,建立了一套鸡骨骼肌卫星细胞分离、传代、冻存和复苏的方法。特异基因表达鉴定结果表明,该方法分离得到的细胞能够表达卫星细胞特异的标志基因Pax7,而肌细胞分化基因MyoD、Myogenin未表达,说明获得的肌卫星细胞纯度较高,尚未进行肌细胞的分化。     

松辽黑猪METTL23基因多态性及其与繁殖性状的关联分析

为探究松辽黑猪METTL23基因多态性及其与繁殖性状的关联性,试验选取178头松辽黑猪母猪为研究对象,利用Sanger直接测序法查找METTL23基因外显子1~5的单核苷酸多态性(SNP),使用SPSS 19.0软件分析METTL23基因SNP位点与松辽黑猪繁殖性状(总产仔数、产活仔数、断奶仔猪数、初生重、3周龄重、断奶重、乳头数)的关联性。结果显示,仅在松辽黑猪METTL23基因外显子4发现1个SNP位点,命名为A62G,在A62G位点上检测到3种基因型,分别是AA、AG和GG。GG和G分别为优势基因型和优势等位基因,且A62G位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。该位点的遗传纯合度(Ho)为0.6516,高于遗传杂合度(He,0.3484),说明其在松辽黑猪群体中的变异较小;多态信息含量(PIC)为0.2877,属于中度多态位点(0.25<PIC<0.5),说明该遗传标记能够提供一定量的遗传信息。关联分析结果表明,GG基因型个体总产仔数、产活仔数和断奶仔猪数均显著或极显著高于AA基因型个体(P<0.05;P<0.01),总产仔数还显著高于AG基因型个体(P<0.05);AG基因型个体断奶仔猪数显著高于AA基因型个体(P<0.05);初生重、3周龄重、断奶重、乳头数各基因型间差异均不显著(P>0.05)。综上所述,METTL23基因外显子4存在多态性位点A62G,该位点与松辽黑猪产仔数存在显著关联,可作为松辽黑猪产仔数的遗传标记,用于分子育种。