猪营养中生物活性脂肪酸的最新认识

与目前人类营养发展的趋势不同,许多猪营养师仍然从传统角度来看待必需脂肪酸在猪营养上的作用,但是时代正在改变。     

蛋鸡日粮不饱和脂肪酸的调控

在日粮中加入富含多不饱和脂肪酸，特别是亚油酸，α－亚麻酸的植物油，提高蛋黄中多不饱和脂肪酸含量，使生产出的鸡蛋不仅含丰富的蛋白质，而且有人体必需的多不饱和脂肪酸，为保健食品的开发和蛋禽生产提供一条新的途径。１日粮不饱和脂肪酸的含量鸡蛋中８５％或７８％EPA（二十碳五烯酸）和DHA（二十碳六烯酸）来自于它们在日粮中相应的含量（Baucells．２０００），鸡蛋脂肪酸的组成很大程度上受日粮影响，通过日粮调控可以增加鸡蛋中多不饱和脂肪酸的含量。鸡蛋中脂肪酸的沉积与饲料脂肪酸的含量相关联，蛋中脂肪酸基本反映日粮脂…     

FADS2基因在奶牛乳腺细胞中的过表达和干扰研究

为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量的影响。针对FADS2基因的CDS序列设计siRNA和过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP,转染奶牛乳腺细胞检测FADS2基因过表达和干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响及细胞中甘油三酯含量的变化。结果显示,试验成功获得过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP和干扰片段,转染细胞后具有良好的过表达和干扰效果。FADS2基因过表达后,1-酰基甘油磷酸酰基转移酶(AGPAT1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、3-磷酸甘油转移酶(GPAM)、脂肪酸延长链5(ELOVL5)、乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)、脂肪酸脱氢酶1(FADS1)、二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因显著下调(P<0.05),脂滴蛋白2(PLIN2)基因极显著上调(P<0.01)。FADS2基因干扰过后可引起AGPAT1、GPAM、ELOVL5、ACAA1、PLIN2和FADS1基因显著上调(P<0.05),脂肪酸合成胰岛素诱导基因1(INSIG1)极显著上调(P<0.01),DGAT1和PPARα基因显著下调(P<0.05)。甘油三酯检测结果显示,FADS2基因过表达和干扰均可降低奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。综上所述,在奶牛乳腺上皮细胞中,FADS2基因能调控脂质合成相关基因的表达,对乳腺脂质合成具有调控作用。     

添加脂肪酸钙对肉羊生产性能和肌肉ω-3系列脂肪酸含量的影响

为了研究在肉羊日粮中添加亚麻油脂肪酸钙和鱼油脂肪酸钙后对羊肉中ω-3系列脂肪酸(ω-3PUFA)含量的影响,试验采用单因素分组设计方法,将健康、体重相近[(30.2±2.2)kg]的无角道赛特(♂)×小尾寒羊(♀)杂交一代公羊15只随机分为3组,每组5只(全部单栏饲养),1组为对照组,饲喂基础日粮;2,3组为试验组,分别在日粮中添加40 g/d亚麻油脂肪酸钙和鱼油脂肪酸钙,进行为期30 d的饲养试验。结果表明:亚麻油脂肪酸钙能显著提高羊肉中的α-亚麻酸(ALA)含量(P<0.05),也能显著提高羊肉中的二十碳五烯酸(EPA)含量(P<0.05),使二十二碳六烯酸(DHA)含量略有提高(P>0.05);鱼油脂肪酸钙显著提高了肉中ALA、EPA和DHA含量(P<0.05);添加2种脂肪酸钙均可显著提高肉中ω-3 PUFA的总量(P<0.05);添加2种脂肪酸钙组羊的平均日增重、饲料报酬也得到了显著改善(P<0.05)。     

猪IRS1基因对C2C12细胞系增殖分化的影响

本课题组在前期研究中发现IRS1是民猪和大白猪背最长肌中存在表达差异的一个关键基因,为了深入探讨IRS1在骨骼肌细胞中发挥的生物学功能,本研究首先将猪的IRS1基因完整编码区序列连入pcDNA3.1载体内,构建过表达质粒,同时人工合成IRS1的siRNA干扰序列,在C2C12细胞系内过表达或干扰IRS1基因,使用qRT...     

我国首次成功获得转ω-1脂肪酸去饱和酶基因猪

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、湖北省农业科学院畜牧兽医研究所和军事医学科学院生物工程研究所通力合作,成功培育出转ω-3脂肪酸去饱和酶基因猪。此种转基因猪肉预计对人类的心血管疾病具有比较重要的预防作用和保健功能。     

口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1基因的克隆及原核表达

根据口蹄疫病毒（FMDV）china99流行毒株基因序列设计特异引物，以阳性质粒pGEM—p1为模板，扩增p1基因。p1片段经Nco1和Xho1酶消化后，得到目的基因VP2—3—1，将其与经相同酶消化的表达载体pProEx—HTb连接并转化BL21（DE3），经PCR、酶切鉴定和序列分析筛选阳性克隆，经IPTG诱导后SDS—PAGE检测，结果表明VP2—3—1基因得到表达；Western blotting结果显示，该表达蛋白能被口蹄疫病毒阳性血清所识别。     

多不饱和脂肪酸对种公猪繁殖性能的影响

多不饱和脂肪酸(PUFAS)是脂肪的重要组成部分,不同种类的PUFAS以及ω-3 PUFAS与ω-6PUFAS之间的不同比例显著影响动物的繁殖性能。哺乳动物体内由于缺乏PUFAS从头合成的去饱和酶,因此,必须通过饲粮途径来获取多不饱和脂肪酸。文章综述了PUFAS的分类与来源、PUFAS对种公猪繁殖性能的影响,为其在现代规模化养猪生产中有效提高猪精液品质、猪场生产成绩和经济效益提供参考。     

共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达

为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞（chicken embryo fibroblasts,CEF）,通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。     

多不饱和脂肪酸对动物精液品质影响的研究进展

多不饱和脂肪酸(PUFA)主要分为ω-3 PUFA和ω-6 PUFA,是精子质膜脂质的主要成分,对精子抗氧化、提高精子质膜流动性、维持精子结构完整性及睾酮合成等具有重要作用。不同类型PUFA对精液品质的作用有所不同,ω-6 PUFA中的花生四烯酸(AA)能够促进睾酮的分泌,但精浆中过量的AA可能诱导氧化应激;亚油酸(LA)同样可提高体内睾酮水平,共轭亚油酸(CLA)可降低精子的氧化应激;动物体内少量的二十二碳五烯酸(DPA)不仅能参与精子的运输过程,还能提高精子的抗氧化能力。ω-3 PUFA中的α-亚麻酸(ALA)具有抗氧化作用并能刺激睾酮的合成,二十二碳六烯酸(DHA)作用与ALA相似,可提高精子的抗氧化能力,同时可促进睾酮合成;二十碳五烯酸(EPA)对精子结构及睾酮合成具有调节作用。适当的ω-6/ω-3 PUFA比例对精子的活力、质膜结构、脂质组成和顶体反应均具有重要的调节作用。PUFA对精子的作用可因添加的方式、类型、ω-6/ω-3PUFA的比例及动物种类的不同而有所不同。近年来,PUFA对动物精液品质作用的相关研究取得了较大进展,但其提高精液品质的作用机制仍需进一步深入探讨。作者综述了在饲粮或精液稀释液中添加不同类型的ω-3 PUFA、ω-6 PUFA及ω-6/ω-3 PUFA比例对精子的影响,以期为深入了解PUFA在动物精液生产中的应用提供理论参考。     

饲粮 ｎ-６／ｎ-３多不饱和脂肪酸比例对鹅肌肉脂肪酸组成的影响

本文旨在探讨饲粮 ｎ-６／ｎ-３多不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡ）比例对扬州鹅肌肉脂肪酸组成的影响。试验选取 １６０只健康、体重接近的 ２１日龄扬州鹅,随机分成 ４组,分别饲喂 ｎ-６／ｎ-３ＰＵＦＡ比例为 １２∶１、９∶１、６∶１及 ３∶１的饲粮,于 ７０日龄时取胸肌和腿肌,进行脂肪酸组成的测定。结果表明：１）在胸肌中,亚油酸的含量 ９∶１组显著高于 ３∶１组（Ｐ＜０．０５）,而与其他各组之间无显著差异（Ｐ＞０．０５）;α－亚麻酸的含量 ３∶１组显著高于 ６∶１和 ９∶１组（Ｐ＜０．０５）,极显著高于１２∶１组（Ｐ＜０．０１）。２）在腿肌中,亚油酸的含量 １２∶１和 ６∶１组均显著高于 ３∶１组（Ｐ＜０．０５）,而与９∶１组无显著差异（Ｐ＞０．０５）;α－亚麻酸的含量 ３∶１组显著高于 ６∶１组（Ｐ＜０．０５）,极显著高于１２∶１和 ９∶１组（Ｐ＜０．０１）。综上所述,鹅肌肉中 ｎ-６／ｎ-３ＰＵＦＡ比例随饲粮中该比例的下降而下降,并以 ３∶１组最低,但除 １２∶１组的腿肌 ｎ-６／ｎ-３ＰＵＦＡ比例较高外,其他各组比例均在世界卫生组织推荐的适于人体健康的（６∶１）～（１０∶１）的比例范围内。     

Cloning and Bioinformatics Analysis of FADS2 Gene in Buffalo

This study was aimed to clone the buffalo Δ6-fatty acid desaturases (FADS2) gene using in-Silico cloning and analyze its genetic struction with bioinformatics, which provide a foundation for investigating the milk performance in buffaloes. Primers were designed according the sequence of FADS2 gene in dairy cow (GenBank accession No.:NM_001083444.1). The FADS2 gene was amplified by RT-PCR, and its sequence was analyzed by bioinformatics. Sequence analysis revealed that the buffalo FADS2 gene had 36 600 bp in length and consisted of 12 exons and 11 introns, containing an open reading frame (ORF) of 1 335 bp which encoding 444 amino acids. Sequence homology analysis indicated that the buffalo FADS2 protein gene showed 98.88%, 98.88%, 89.66%, 90.79%, 90.85%, 92.35% and 87.11% identity with that of Bos mutus, Bos taurus, Homo sapiens, Sus scrofa, Oryctolagus cuniculus, Orcinus orca and Rattus norvegicus, respectively. Protein prediction analysis showed that the molecular weight and isoelectric point (pI) of buffalo FADS2 were 52.51 ku and 8.75, respectively, and the FADS2 protein was weak alkali and the hydrophobicity protein without signal peptide. Phylogenetic tree analysis showed that FADS2 gene was highly conserved in different species and evolutionary processes,buffalo was close to Bos mutus and Bos taurus, and was far from Rattus norvegicus. This study suggested that FADS2 gene was successfully cloned in buffalo, which laid a foundation for clarifying the mechanism of milk performance in buffalo.     

水牛FADS2基因的电子克隆及序列分析

试验旨在利用电子克隆法对水牛Δ6脂肪酸脱氢酶（Δ6-fatty acid desaturases,FADS2）基因进行克隆和生物信息学分析,为探究FADS2基因对水牛泌乳性能的作用机制奠定基础。以奶牛FADS2基因序列（GenBank登录号：NM_001083444.1）为探针设计引物,利用电子克隆法克隆水牛FADS2基因,并通过RT-PCR验证,对FADS2基因的序列特征进行生物信息学分析。测序结果表明,水牛FADS2基因序列全长为36 600 bp,由12个外显子和11个内含子组成,包含一个长1 335 bp的开放阅读框,可编码444个氨基酸。序列同源性分析显示,水牛FADS2基因编码序列与牦牛、黄牛、人、猪、家兔、虎鲸和褐家鼠序列的同源性分别为98.88%、98.88%、89.66%、90.79%、90.85%、92.35%和87.11%。蛋白质预测分析表明,水牛FADS2蛋白分子质量为52.51 ku,理论等电点（pI）为8.75,呈弱碱性,属于亲水性蛋白,无信号肽。系统进化树分析结果表明,FADS2基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性,其中水牛与牦牛、黄牛亲缘关系较近,与褐家鼠亲缘关系较远。水牛FADS2基因的成功克隆为今后阐明水牛泌乳性能的作用机制奠定了基础。     

日粮脂肪酸来源对动物产品中不饱和脂肪酸影响的研究进展

主要就动物日粮脂肪酸来源对肉、蛋和奶中不饱和脂肪酸含量的影响作一简要综述。     

Fat-1基因载体构建及其在家鸡中的体外表达

试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体,构建重组质粒pLL3.7-cFat-1;经PCR、酶切、序列分析等手段对重组质粒进行鉴定;用胰酶消化法培养鸡成纤维细胞,利用TurboFect^TM转染试剂将pLL3.7-cFat-1转染体外培养的成纤维细胞;通过RT-PCR检测和绿色荧光观察分析cFat-1基因在细胞中的表达。结果表明cFat-1基因在鸡成纤维细胞中高效转录并表达,成功构建了可在家禽体外表达cFat-1基因的特异性表达载体。本研究首次获得可在家禽体外表达cFat-1基因的转基因细胞系,证实了经基因改造后cFat-1基因可在家禽体外的高效转录和表达,为后续制备富含ω-3脂肪酸的转基因鸡奠定基础。