基于16S rDNA测序技术探究参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响

为了探究参苓白术散(SLBZS)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)模型小鼠肠道菌群的影响,选用32只6周龄、体质量18～20 g SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只。采用3.5%DSS水溶液自由饮水7 d建立UC模型,参苓白术散治疗组(SLBZS)和柳氮磺胺吡啶治疗组(SASP)灌胃治疗,通过观察各组小鼠的体质量变化、疾病活动指数评分(disease activity index, DAI)、结直肠长度、结肠黏膜损伤眼观变化及组织病理学变化评价SLBZS对小鼠UC的治疗效果,基于16S rDNA高通量测序探究SLBZS对UC小鼠肠道菌群的影响。结果显示,与对照组相比,Model组小鼠体质量明显下降,DAI评分显著升高(P<0.01),结肠长度明显缩短,结肠黏膜损伤严重,眼观评分明显降低(P<0.01),组织病理学评分差异显著(P<0.01);与Model组相比,SLBZS组小鼠体质量明显升高,DAI评分显著降低(P<0.01),结肠长度明显增...     

内毒素对雌性小鼠繁殖性能指标的影响

试验以雌性小鼠为试验模型,经脂多糖(LPS)灌胃检测母鼠妊娠后不同组织中LPS、sIgA、E₂、P₄、LH和FSH的含量。结果表明,母鼠经LPS灌胃,分娩后5 d对照组结肠、回肠和子宫的LPS和sIgA含量与染毒组无显著性差异(P>0.05);染毒组仔鼠肠道的LPS含量显著高于对照组(P<0.05)。分娩后15 d,对照组母鼠结肠、回肠和子宫中的LPS含量显著高于染毒组(P<0.05);染毒组仔鼠肠道LPS含量显著高于对照组(P<0.05)。分娩后15 d,对照组母鼠结肠和回肠的sIgA含量与染毒组无显著性差异;对照组母鼠子宫的sIgA含量显著高于染毒组(P<0.05);染毒组仔鼠肠道的sIgA含量显著高于对照组(P<0.05)。随后记录母鼠的繁殖性能指标,染毒组母鼠平均产仔数与对照组无显著性差异;但染毒组母鼠出生后5 d和15 d仔鼠存活率显著低于对照组;同时检测的生殖激素水平发现,染毒组母鼠血液FSH与LH的含量显著低于对照组。说明内毒素干预妊娠母鼠后,母鼠回肠、结肠和子宫组织中的内毒素可经胎盘屏障传递...     

复合维生素B对生长期山羊后段肠道菌群组成及肠黏膜的影响

本试验旨在研究日粮中添加复合维生素B对生长期山羊消化道微生物组成和肠黏膜结构的影响。试验选取10只4月龄波杂雌山羊（12.60±1.28） kg，随机分为对照组（control，CON）和复合维生素B处理组（vitamin B，VB），CON组饲喂基础日粮（n=5），VB组在基础日粮中添加复合维生素B（n=5），预饲期2周，试验期11周，试验期间自由饮水。试验结束后屠宰采样，16S rRNA测序分析盲肠和结肠内容物微生物组成，检测肠道上皮组织形态结构和相关基因与蛋白的表达。通过菌群分类学分析发现，与CON相比，VB组山羊盲肠和结肠内容物菌群的α多样性指数无显著变化（P>0.05）；在门水平上，盲肠和结肠内容物菌群中厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）为优势菌门，VB组盲肠拟杆菌门丰度有升高趋势（0.05<P<0.1），而螺旋菌门（Spirochaetes）丰度有降低趋势（0.05<P<0.1）；在目水平上，VB组盲肠Solirubrobacterales和Streptomycetales目菌群丰度显著下降（P<0.05）；在科水平上，VB组盲肠Christensenellaceae、Streptomycetaceae、Solirubrobacteraceae及结肠Christensenellaceae科菌群丰度显著下降（P<0.05）；在属水平上，VB组盲肠Lachnoclostridium属菌群丰度显著升高（P<0.05），盲肠Bacillus、Nocardioides及结肠unidentified_Christensenellaceae和unidentified_Gammaproteobacteria属菌群丰度显著下降（P<0.05）。与CON相比，VB组山羊空肠绒毛高度（P<0.01）、隐窝深度（P<0.05）和绒毛高度/隐窝深度（V/C，P<0.05）均显著增加；回肠隐窝深度显著降低（P<0.05），绒毛高度和V/C无显著变化（P>0.05）。实时荧光定量PCR结果显示，与CON相比，VB 组山羊盲肠上皮紧密连接和细胞增殖相关基因的表达均无显著变化（P>0.05）；而结肠黏膜上皮Occludin（P<0.05）、EGFR（P<0.01）、MIK67（P<0.05）和CCND（P<0.05）基因表达均显著上调；且VB组ZO-1蛋白表达显著上调（P<0.05）。综上表明，日粮中添加复合维生素B对生长期山羊肠道菌群多样性无显著影响，但可提高肠道中有益菌的丰度且降低有害菌的丰度，从而促进肠道绒毛的生长及紧密连接蛋白的表达，对山羊肠道健康和生长具有积极作用。     

胰高血糖素样肽-2对断奶仔猪肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响

本文旨在研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对离体培养的断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响,探讨GLP-2调节肠道黏膜屏障的可能机制。将断奶仔猪空肠组织块置于含0、1×10-8、1×10-7mol/L的GLP-2的细胞培养液中进行培养,考察不同GLP-2添加水平对断奶仔猪空肠上皮丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路细胞外调节蛋白激酶丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)、p90核糖体S6蛋白激酶(p90RSK)以及紧密连接蛋白ZO-1、Oc-cludin、Claudin-1基因表达的影响,待确定出GLP-2能有效促进紧密连接蛋白相关基因表达的剂量后,再向培养液中添加MEK1/2的特异性阻断剂U0126,考察阻断MAPK经典通路后紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达的变化。结果表明,与对照组相比,将空肠组织块置于含1×10-7和1×10-8mol/L GLP-2的培养液中培养72 h均能显著促进MEK1/2、p90RSK以及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量(P<0.05),除ZO-1的基因之外,上述各蛋白的基因mRNA相对表达量还随着GLP-2浓度的增高而升高(P<0.05);向1×10-7mol/L的GLP-2组添加U0126阻断p90RSK、ERK1/2的基因表达后,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量也显著下降(P<0.05)。由此可知,GLP-2能够促进断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达,而MAPK通路可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。     

姬松茸多糖和姬松茸多糖铁对DSS诱导的大鼠溃疡性结肠炎预防效果研究

为了探究姬松茸多糖和姬松茸多糖铁预防葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的大鼠溃疡性结肠炎(UC)效果,试验将64只SD大鼠随机分成8组,即空白对照组、模型组及姬松茸多糖和姬松茸多糖铁低剂量(50 mg/kg)、中剂量(100 mg/kg)、高剂量(200 mg/kg)组,姬松茸多糖和姬松茸多糖铁各剂量组大鼠按低、中、高剂量每只灌胃给予50,100,200 mg/kg姬松茸多糖和姬松茸多糖铁溶液1 mL,每天1次,连续灌胃14 d,空白对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。从第15天起,停止灌胃,除空白对照组外,其余组饮水全部替换成含4.5%DSS的水溶液,自由饮用,连用7 d,建立溃疡性结肠炎大鼠模型。干预结束后,测定大鼠体重、结肠长度,进行疾病活动指数(DAI)评分;采用H.E.染色法观察结肠组织病理学变化;采用ELISA法测定血清中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α);荧光定量PCR方法检测结肠组织中紧密连接蛋白相关基因ZO-1、Occludin和Claudin-1 mRNA的表达,以及肠道菌群Mucispirillum schaedleri、普拉梭菌、大...     

三味清热类中药水提物对肉仔鸡肠道菌群和黏膜屏障功能的影响

为了研究单味中药对肠道菌群和肠黏膜损伤的调节和修复作用,选用金银花、连翘和紫花地丁三味清热类中药对大肠杆菌所致肉仔鸡肠道菌群失调和黏膜屏障功能障碍进行治疗,为单味中药在提高肠道细菌的有益菌群和保护肠黏膜屏障提供可靠的理论依据。选取100只1日龄雄性肉仔鸡,分成5组,每组20只,空白组正常饲喂,模型组和中药组于15～17 d腹腔注射大肠杆菌O_(78)(1.0×10~6 CFU/mL),1 mL/只。中药组在第18天开始饮用中药,连续7 d,各中药组动物给药量为生药量1 g/kg。在给药后第7和14天,每组取6只鸡心脏釆血,采用ELISA法按照试剂盒说明进行D-乳酸(D-LA)、二胺氧化酶(DAO)和内毒素(ET)的检测。采集空肠肠段和盲肠。采用实时荧光定量PCR检测空肠紧密连接蛋白((闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)和闭合蛋白-1(Claudin-1))的mRNA的相对表达量。盲肠送检测公司检测中药对盲肠菌群多样性的影响。试验结果表明,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低给药后第7和14天肉仔鸡血清(DAO活性)、D-LA和ET含量。在给药后第7天,金银花组ZO-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高(P0.05);连翘组Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高(P0.05);在给药后第14天,金银花组ZO-1的mRNA相对表达量显著升高(P0.05),紫花地丁组ZO-1和Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高(P0.05),连翘组ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高(P0.05)。金银花、紫花地丁和连翘均可提高给药后第7天厚壁菌门占比(P0.05),金银花、紫花地丁可提高给药后第14天拟杆菌门占比(P0.05),金银花、紫花地丁抑制给药后第7和14天变形菌门的增殖,紫花地丁和连翘抑制给药后第7天放线菌门的生长(P0.05),连翘、金银花可以显著提高给药后7和14 d乳酸杆菌占比,紫花地丁可以显著提高给药后7 d乳酸杆菌占比(P0.05),紫花地丁显著提高给药后第14天未分类毛螺旋菌种相关菌属的占比。综上,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低肉仔鸡血清DAO活性、D-LA和ET含量,减少毒素入侵。金银花可以提高ZO-1、Occludin的mRNA相对表达量,连翘可提高ZO-1、Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量,保护肠道黏膜;紫花地丁可提高ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量。金银花、紫花地丁和连翘均可使肠道OTU数目增多,在不同程度上促进有益菌群繁殖,抑制致病菌群生长,具有调节肠道菌群结构的作用。     

高锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障和肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响

为研究高剂量氧化锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障的影响并探讨其作用机理,选取54头21日龄断奶仔猪按胎次一致、体质量相近和公母各半方法分为3组,每组3个重复,每个重复6头.哺乳组仔猪继续哺乳至35日龄,基础日粮组饲喂基础日粮(110 mg·kg~(-1)锌),高锌组饲喂基础日粮+3 000 mg·kg~(-1)锌(氧化锌).分别于28和35日龄取样测定血浆D-乳酸、内毒素含量和二胺氧化酶(DAO)活性、肠系膜淋巴结细菌移位率以及结肠内容物大肠杆菌数,并分析回肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达.结果显示:与哺乳组相比,断奶仔猪饲喂基础日粮,28日龄时血浆中D-乳酸、内毒素含量和DAO活性显著升高(P<0.05),至35日龄时,肠黏膜仍维持较高的通透性;添加高锌抑制上述3个指标的升高,进而阻止肠黏膜通透性的增加,达到与哺乳组相同的效果;与哺乳组相比,基础日粮组和高锌组在28和35日龄时均存在肠系膜淋巴结细菌移位现象,但是高锌组低于基础日粮组(P>0.05);28日龄时,基础日粮组结肠内容物大肠杆菌数大于哺乳组(P<0.05),与高锌组比较差异不显著(P>0.05),35日龄时各组间差异不显著(P>0.05);与哺乳组相比,仔猪断奶后饲喂基础日粮使Occludin和ZO-1mRNA丰度以及ZO-1的表达下降(P<0.05),高锌组Occludin和ZO-1 mRNA丰度、ZO-1蛋白表达均显著高于基础日粮组(P<0.05).结论:仔猪断奶后肠黏膜通透性增加,肠上皮细胞紧密连接蛋白表达下降;而添加高剂量氧化锌可抑制细菌在肠道黏膜上的黏附,阻止上皮细胞渗透性增加,能保护肠黏膜屏障功能.     

抗生素诱导肠道菌群失调对肠黏膜屏障和肝脏功能的动态影响

为了观察不同程度肠道菌群失调模型中肠黏膜屏障和肝脏功能的动态变化,采用头孢曲松钠复制小鼠肠道菌群失调模型,分别于造模处理的第3天、第6天、第10天取小鼠盲肠内容物进行16S rDNA基因测定,苏木精-伊红(HE)染色观察回肠组织病理变化,透射电镜观察回肠组织紧密连接情况,免疫组织化学法观察回肠组织闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的阳性表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肠组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,同时检测肝脏功能指标,包括肝组织匀浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性及肝组织病理变化。结果显示:与正常组相比,头孢曲松钠处理3、6或10 d后,模型组小鼠肠道中除金黄杆菌属、普氏菌属、假单胞菌属的相对丰度逐步上升外,芽孢杆菌属、Lo-tus、葡萄球菌属的相对丰度逐步下降。模型组小鼠回肠组织中ZO-1阳性表达和肠上皮细胞间的紧密连接随着头孢曲松钠处理时间的延长逐渐下降。与正常组相比,模型组肠组织匀浆中TNF-α、IL-1β含量在菌群失调初期(头孢曲松钠处理3、6 d时)无显著变化(P0.05),菌群持续失调(头孢曲松钠处理10 d时)后其含量极显著上升(P0.01);同时,菌群持续失调会累及肝脏,表现为模型组肝组织匀浆中ALT、AST活性较正常组极显著上升(P0.01),肝细胞肿胀,肝索结构紊乱。以上结果提示,长时间的肠道菌群失调会导致肠道稳态被破坏,表现为肠黏膜屏障的破坏加重,肠道中炎症因子的含量逐渐上升,同时肝脏功能受到影响。     

慢性冷暴露对小鼠结肠紧密连接的影响

为研究慢性冷暴露条件下小鼠结肠紧密连接的变化,试验将小鼠随机分为对照组和冷暴露组,对照组始终置于25℃环境中,冷暴露组置于4℃环境中每天暴露3 h,持续刺激3周,其余时间置于25℃环境中。冷暴露周期结束后将小鼠麻醉处死。利用HE染色观察小鼠结肠的形态学变化,免疫荧光染色观察ZO-1的表达,蛋白免疫印迹技术检测紧密连接相关蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1和炎症因子TNF-α、IL-1β、iNOS的表达。结果显示,与对照组相比,冷暴露组小鼠结肠皱襞消失,紧密连接蛋白的表达量显著降低,炎症因子表达量上调。上述结果表明,慢性冷暴露会导致小鼠结肠紧密连接受损,同时促进炎症反应的发生。     

外源粪菌干预对E.coli K88感染仔猪肠形态及肠道屏障功能的影响

选取胎次一致、体质量接近的25日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪12头,随机分为对照组和粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)组。2组仔猪均先用E.coli K88攻毒3d,然后给FMT组仔猪灌服金华猪粪便菌悬液3d,对照组灌服等量无菌磷酸钾缓冲液。结果显示:外源粪菌可以改善受体仔猪肠绒毛形态及大肠杆菌引起的肠绒毛损伤,可以抑制K88攻毒引起的肠道通透性增加,提高空肠、结肠中杯状细胞数目,也可相应提高MUC2、紧密连接蛋白(ZO-1,Occludin)的蛋白表达水平。结果表明:粪菌移植可缓解E.coli K88攻毒引起的肠道损伤,改善肠道黏蛋白表达,并提高紧密连接蛋白表达从而增强肠道上皮屏障功能。     

辣木叶总黄酮对小鼠溃疡性结肠炎防治作用的研究

【目的】以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠为模型,探究辣木叶总黄酮(MOLF)对UC的防治作用。【方法】将50只BALB/c小鼠随机分为5组：对照组、DSS组(模型组)和MOLF-L(25 mg/kg)、MOLF-M(50 mg/kg)、MOLF-H(100 mg/kg)处理组,每组10只。小鼠通过饮用4%DSS诱导UC模型,各MOLF处理组灌胃相应剂量药物0.2 mL,对照组和DSS组灌以等体积的生理盐水,每天1次,连续7 d。每天记录各组疾病活动指数(DAI),在末次给药的次日经眼眶静脉丛采血,分离血清测定白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和内毒素(LPS)含量;小鼠脱颈处死后取结肠组织进行HE染色观察组织形态、PAS染色观察组织杯状细胞数量变化;实时荧光定量PCR法检测结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-10、HMGB1 mRNA表达水平;免疫荧光法检测肠黏膜闭锁连接蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)表达情况;Western blotting分析凋...     

Study on Relationship between Intestinal Epithelium Tight Junction Proteins mRNA Expression and Piglets Weaning Diarrhea

The experiment was carried out to compare diarrhea status between Min pig and Landrace pig in a week after weaning, detect two varieties piglets jejunum, ileum and colon tight proteins Zonula occludens-1(ZO-1)and Occludin mRNA expression before and after weaning. The intention was to discuss the relationship between tight proteins expression and piglets weaning diarrhea. The results showed that Min piglets diarrhea rate, diarrhea frequency were very significantly lower than Landrace pig within one week after weaning (P<0.01), diarrhea days was significantly lower than Landrace pig within one week after weaning (P<0.05);Min piglets not weaning group ileum and colon ZO-1 and Occludin mRNA expression was very significantly higher than Landrace pig not weaning group (P<0.01);Min piglets weaning diarrhea group ileum and colon ZO-1 and Occludin mRNA expression was significantly higher than weaning health group (P<0.05). The results indicated that Min piglets intestinal tight junction proteins mRNA high expression before weaning might be had relation with guarantee piglets intestinal health and decrease occurrence diarrhea;Min pig fast recover intestinal mucosa function and rehabilitation by increased tight junction proteins mRNA expression after weaning. So tight junction proteins mRNA high expression before and after weaning had an important significance for piglets to resist weaning diarrhea.     

三味清热类中药水提物对肉仔鸡肠道菌群和黏膜屏障功能的影响

为了研究单味中药对肠道菌群和肠黏膜损伤的调节和修复作用,选用金银花、连翘和紫花地丁三味清热类中药对大肠杆菌所致肉仔鸡肠道菌群失调和黏膜屏障功能障碍进行治疗,为单味中药在提高肠道细菌的有益菌群和保护肠黏膜屏障提供可靠的理论依据。选取100只1日龄雄性肉仔鸡,分成5组,每组20只,空白组正常饲喂,模型组和中药组于15~17 d腹腔注射大肠杆菌O₇₈（1.0×10⁶ CFU/mL）,1 mL/只。中药组在第18天开始饮用中药,连续7 d,各中药组动物给药量为生药量1 g/kg。在给药后第7和14天,每组取6只鸡心脏釆血,采用ELISA法按照试剂盒说明进行D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）和内毒素（ET）的检测。采集空肠肠段和盲肠。采用实时荧光定量PCR检测空肠紧密连接蛋白（（闭合小环蛋白-1（ZO-1）、闭锁蛋白（Occludin）和闭合蛋白-1（Claudin-1））的mRNA的相对表达量。盲肠送检测公司检测中药对盲肠菌群多样性的影响。试验结果表明,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低给药后第7和14天肉仔鸡血清（DAO活性）、D-LA和ET含量。在给药后第7天,金银花组ZO-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;连翘组Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;在给药后第14天,金银花组ZO-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,紫花地丁组ZO-1和Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,连翘组ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。金银花、紫花地丁和连翘均可提高给药后第7天厚壁菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁可提高给药后第14天拟杆菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁抑制给药后第7和14天变形菌门的增殖,紫花地丁和连翘抑制给药后第7天放线菌门的生长（P<0.05）,连翘、金银花可以显著提高给药后7和14 d乳酸杆菌占比,紫花地丁可以显著提高给药后7 d乳酸杆菌占比（P<0.05）,紫花地丁显著提高给药后第14天未分类毛螺旋菌种相关菌属的占比。综上,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低肉仔鸡血清DAO活性、D-LA和ET含量,减少毒素入侵。金银花可以提高ZO-1、Occludin的mRNA相对表达量,连翘可提高ZO-1、Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量,保护肠道黏膜;紫花地丁可提高ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量。金银花、紫花地丁和连翘均可使肠道OTU数目增多,在不同程度上促进有益菌群繁殖,抑制致病菌群生长,具有调节肠道菌群结构的作用。     

凝结芽孢杆菌BC-HYI改善脂多糖损伤蛋雏鸡肠道作用的研究

本试验旨在探究凝结芽孢杆菌BC-HYI调节脂多糖(LPS)损伤蛋雏鸡肠道作用。选取1日龄京红蛋雏鸡180只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复6只,重复之间体重接近。空白对照组(CON组)和模型组(LPS组)饲喂基础饲粮,连续灌服生理盐水;3个益生菌组饲喂基础饲粮,同时分别连续灌服低、中、高剂量的凝结芽孢杆菌BC-HYI (浓度分别为106、107、108CFU/mL),连续灌服28 d,28 d后灌服LPS,灌服浓度为2 mg/kg,灌服剂量为200μL/只,试验周期为6 h,分别记为LOW+LPS、MID+LPS、HIGH+LPS组。6 h后采血,剖检、收集蛋雏鸡十二指肠、空肠、回肠肠道组织及空肠黏膜。结果表明：与空白对照组相比,LPS灌服后,蛋雏鸡十二指肠、空肠、回肠的绒隐比以及空肠黏膜黏液蛋白2(MUC2)、闭合蛋白(Occludin)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)mRNA相对表达量显著降低(P<0.05),血清二胺氧化酶(DAO)活性及D-乳酸(D-Lac)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,空肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和白细胞介素-10(IL-10)的含...     

低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮对IPEC-J2细胞紧密连接蛋白表达的影响

试验旨在探究低聚壳聚糖硒抗玉米赤霉烯酮（zearalenon，ZEN）对猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）紧密连接蛋白表达的影响。试验分为对照组（C）、ZEN （30 μg/mL ZEN）、ZEN+0.5 Se （30 μg/mL ZEN+0.5 μmol/L低聚壳聚糖硒，以Se计）、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组。待细胞长至60%~70%汇合时，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组培养液更换为含对应Se浓度的培养液，C和ZEN组更换为正常培养液，12 h后向含ZEN组加入30 μg/mL ZEN，继续培养24 h。收集各组细胞培养液，检测碱性磷酸酶（AKP）活性；Western blotting法检测闭锁连接蛋白（zonula occludens-1，ZO-1）、闭合蛋白（Occludin）的表达，免疫荧光法检测ZO-1和Occludin蛋白的表达和定位情况。AKP活性检测结果表明，与对照组相比，ZEN、ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se组AKP活性均显著升高（P<0.05），ZEN+3 Se组AKP活性差异不显著（P>0.05）；与ZEN组相比，ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组AKP活性均显著降低（P<0.05）。Western blotting检测结果表明，与对照组比，ZEN组ZO-1和Occludin蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）；与ZEN组比，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se和ZEN+3 Se组ZO-1表达水平均差异不显著（P>0.05），但随着Se浓度的增加，ZO-1表达水平逐渐升高，ZEN+0.5 Se、ZEN+1.5 Se、ZEN+3 Se组Occludin表达水平均显著升高（P<0.05）。免疫荧光结果表明，低聚壳聚糖硒可缓解ZEN引起的ZO-1和Occludin蛋白荧光信号减弱现象，并恢复ZO-1和Occludin蛋白的定位分布。由此说明，低聚壳聚糖硒可降低ZEN引起的IPEC-J2细胞AKP活性升高，上调ZEN引起的ZO-1、Occludin蛋白表达水平下降，并调节其定位分布。     

副猪格拉瑟菌5型细胞致死性膨胀毒素CdtB破坏猪呼吸道上皮屏障的机制

旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示，蛋白质条带分布在55～100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察，OMVs的粒径在100～200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示，样品在100～200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证，证实所提取的样品为外膜囊泡，且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平，并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现，OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋...     

微囊化益生菌对小鼠急性溃疡性结肠炎的影响

试验旨在观察微囊化布拉迪酵母菌（Saccharomyces boulardii,S.boulardii）与微囊化粪肠球菌（Enterococcus faecium,E.faecalis）对小鼠溃疡性结肠炎（UC）的治疗效果并探讨其作用机制。采用3%葡聚糖硫酸钠（dextran sulfacte sodium,DSS）灌胃法制备小鼠UC动物模型,试验共分为6组,其中饮用DSS的小鼠随机分为5组：粪肠球菌菌粉组、微囊化粪肠球菌组、布拉迪酵母菌菌粉组和微囊化布拉迪酵母菌组给予不同的药物治疗,药物皆以溶液形式灌胃给药,UC模型小鼠（DSS组）每天饮用与药物等体积的生理盐水;正常对照组灌服与药物等体积的生理盐水。观察UC小鼠的症状和组织学变化,ELSIA检测血清中细胞因子（IL-6、IL-10与TNF-α）的含量,Western blotting检测小鼠结肠黏膜紧密连接蛋白（Occludin和Claudin-1）表达量。结果显示,与模型组相比,治疗后各益生菌组小鼠血清中TNF-α和IL-6含量均显著降低（P<0.05）,IL-10含量显著升高（P<0.05）,微囊化益生菌组小鼠髓过氧化物酶（MPO）活性及结肠损伤组织学评分（粪肠球菌粉组除外）均显著下降（P<0.05）,布拉迪酵母菌菌粉组与微囊化布拉迪酵母菌小鼠结肠黏膜内Occludin和Claudin-1表达量均显著升高（P<0.05）。粪肠球菌和布拉迪酵母菌可以缓解UC模型小鼠结肠炎症病变,且经过微囊化后的粪肠球菌和布拉迪酵母菌表现出更好的缓解小鼠急性溃疡性结肠炎病症效果,其机制与粪肠球菌和布拉迪酵母菌可以降低血清中IL-6与TNF-α含量,提高Occludin与Claudin-1的表达量密切相关。