绵羊血管内皮生长因子基因siRNA载体在卵巢颗粒细胞中的表达

为构建绵羊血管内皮生长因子(VEGF)基因siRNA载体并对其在绵羊颗粒细胞中的表达,采用DMEM/F12培养液对绵羊卵巢颗粒细胞进行体外培养,采用脂质体转染法将干扰载体转染到颗粒细胞中,用ELISA试剂盒测定转染后各组颗粒细胞中VEGF的表达量。转染阳性对照载体PGC的颗粒细胞组为对照组,转染PGC-1、PGC-2和PGC-3的颗粒细胞组分别为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ。与对照组相比,各试验组中VEGF的表达量分别降低了55.37%、81.45%和73.29%,其中载体PGC-2所转染的细胞中VEGF的表达量最少,说明在3个载体中,PGC-2对VEGF的基因沉默效果最好。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

［目的］ 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响。［方法］ 试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组;Ⅲ组（SCON）,20 μmol/L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20 μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化。［结果］VEGF mRNA在Ⅰ、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在Ⅲ组VEGF mRNA 表达略有降低,但与Ⅰ和Ⅱ组间无显著性差异（P＞0.05）;Ⅳ组（反义寡核苷酸组）的VEGF mRNA表达量显著下降（P＜0.05）,并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1 mRNA的表达与VEGF相似。［结论］反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响

[目的] 探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响.[方法] 试验分为4组: I组,空白对照组;II组,脂质体组(不加寡核苷酸);III组(SCON),20 μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20 μmol/L反义寡核苷酸组.上述各组均在培养24、36、48 h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达情况的变化.[结果] VEGF和Flt-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24 h, VEGF mRNA I组相对表达量为0.076 9,II组为0.076 8,III组为0.076 9,3组之间无显著性差异(P＞0.05),IV组VEGF mRNA 相对表达量下降为0.024 2,且与I、II、III组有显著性差异(P＜0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.059,0.051,0.051 4,3组之间无显著性差异(P＞0.05),第IV组为0.024 2,与前3组比较有显著性差异(P＜0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.061,0.055 2,0.052 1,3组之间无显著性差异(P＜0.05),第IV组为0.011 5,与前3组比较有显著性差异(P＜0.05).培养24 h,Flt-1 mRNA I组相对表达量为0.078 6;II组为0.078 2,III组为0.078 1, 3组之间无显著性差异(P＞0.05),IV组Flt-1 mRNA 相对表达量下降为0.025 6,且与I、II、III组有显著性差异(P＜0.05).培养36 h,前3组相对表达量分别为0.078 1,0.078 4,0.078 2,3组之间无显著性差异(P＞0.05),第IV组为0.022 8,与前3组比较有显著性差异(P＜0.05).培养48 h,前3组相对表达量分别为0.069 1,0.078 0,0.069 3,3组之间无显著性差异(P＞0.05),第IV组为0.021 5,与前3组比较有显著性差异(P＜0.05).可见,VEGF受体Flt-1mRNA的表达与VEGF相似.二者均在 I组、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在III组表达轻微下降,但与I组和II组无显著性差异(P＞0.05);IV组的表达量显著下降(P＜0.05),并且随着时间的延长至逐渐下降.[结论] 反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用.     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Fit-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组（不加寡核苷酸）;Ⅲ组（SCON）,20μmol／L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20μmol／L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达情况的变化。[结果]VEGF和Fh-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24h,VEGFmRNAⅠ组相对表达量为0．0769,Ⅱ组为0．0768,Ⅲ组为0．0769,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组VEGFmRNA相对表达量下降为0．0242,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．059,0．051,0．0514,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0242,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．061,0．0552,0．0521,3组之间无显著性差异（P〈0．05）,第Ⅳ组为0．0115,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养24h,Fit—lmRNA Ⅰ组相对表达量为0．0786;Ⅱ组为0．0782,Ⅲ组为0．0781,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组Flt-1 mR—NA相对表达量下降为0．0256,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．0781,0．0784,0．0782,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0228,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．0691,0．0780,0．0693,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0215,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。可见,VEGF受体Flt-1 mRNA的表达与VEGF相似。二者均在Ⅰ组、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在Ⅲ组表达轻微下降,但与Ⅰ组和Ⅱ组无显著性差异（P〉0．05）;Ⅳ组的表达量显著下降（P〈0．05）,并且随着时间的延长至逐渐下降。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt—1的mRNA表达有下调作用。     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Flt-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组:I组,空白对照组;II组,脂质体组;III组(SCON),20μmol/L正义寡核苷酸组;IV组(ASCON),20μmol/L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Flt-1mRNA表达情况的变化。[结果]VEGFmRNA在I、II组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长无明显变化;在III组VEGFmRNA表达略有降低,但与I和II组间无显著性差异(P>0.05);IV组(反义寡核苷酸组)的VEGFmRNA表达量显著下降(P<0.05),并且随着时间延长逐渐下降。VEGF受体FLT-1mR-NA的表达与VEGF相似。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt-1的mRNA表达有下调作用。     

血管内皮生长因子对绵羊卵母细胞体外受精及胚胎发育的影响

为了研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对绵羊卵母细胞体外成熟和成熟后卵母细胞体外受精卵的早期发育的影响,在细胞培养过程中分别在体外成熟培养液、体外受精液及体外胚胎发育液中添加5、10 ng/mL VEGF.结果显示,添加VEGF组卵母细胞的体外成熟率由对照组的80.68%提高到了86.09%和85.22%(P<0.01),成熟卵母细胞的卵裂率由69.38%提高到了75.18%和73.48%(P>0.05),5 ng/mL添加组的桑葚胚率(45.45%)和囊胚率(30.06%)极显著(P<0.01)高于对照组(37.61%;23.65%);而10 ng/mL添加组的桑葚胚率(40.25%)和囊胚率(27.80%)低于5 ng/mL添加组的,高于对照组,但差异不显著.据此认为5 ng/mL VEGF的添加量比10 ng/mL VEGF添加量能更有效的促进绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精和胚胎早期发育.     

人VEGF受体Ⅱ胞外Ⅲ区单克隆抗体研制与生物学活性测定

根据GenBank中发表的血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体Ⅱ(KDR)基因序列,设计1对引物经RT-PCR从人脐静脉内皮细胞中克隆出KDR胞外Ⅲ区(KDRD3)编码序列,克隆入原核表达载体pGEX-6P1.重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃条件下诱导,经SDS-PAGE和Western blottin...     

αV,β3整合素在绵羊体外受精胚胎的表达模式研究

[目的]探讨胚胎附植调控因子αV,β3整合素在绵羊早期体外胚胎的表达情况,为早期胚胎发育及附植调控机理提供理论依据.[方法]采用RT-PCR和间接免疫荧光染色技术,检测绵羊体外受精个发育阶段胚胎中αV及β3整合素mRNA的表达模式及蛋白表达定位情况.[结果]在绵羊2-细胞至桑椹胚体外胚胎中未能检测到整合素αV及β3 mRNA的表达,但可以检测到囊胚期胚胎有微量整合素αV及β3 mRNA的表达.并且在绵羊第7d扩张囊胚和第8d孵化囊胚上均可检测到整合素αVβ3蛋白的表达,且蛋白表达主要分布在胚胎滋养层细胞周围,孵化囊胚蛋白表达量略高于扩张囊胚.[结论]αV,β3整合素在绵羊早期胚胎发育及附植过程中具有重要调控作用.     

FGF1对牛卵巢颗粒细胞Spry基因表达的影响

【目的】研究体外培养牛卵巢颗粒细胞中Sprouty基因(Spry)的表达,探讨成纤维细胞生长因子1(FGF1)对Spry基因表达的影响。【方法】从屠宰场收集牛卵巢,剪下直径2~5 mm的卵泡,机械破碎卵泡后收集颗粒细胞进行体外培养,在培养的第5天用FGF1和PD98059处理培养的颗粒细胞,然后用Trizol提取细胞总RNA,利用牛特异性引物进行实时定量PCR检测,用ΔΔCt方法计算Spry基因的相对表达量。【结果】牛卵巢颗粒细胞可以表达Spry基因;Spry基因的表达与FGF1呈现剂量依赖关系,Spry2和Spry4的表达量随FGF1作用时间的延长呈现出先上升后下降的变化趋势;FGF1信号通过RTK/ERK通道对Spry基因的表达产生刺激作用。【结论】在体外培养的牛卵巢颗粒细胞中,FGF1信号通过RTK/ERK通道刺激牛Spry基因表达。     

不同精粗比日粮对犊牛组织中脂肪代谢相关酶基因表达的影响

为研究不同精粗比全价颗粒饲料对犊牛不同组织中SREBP-1、FASN、SCD1和ApoA1mRNA表达的影响,选取日龄和体重相近的中国荷斯坦断奶公犊牛12头,分为4组,每组3头,各试验组精粗比分别为75∶25(Ⅰ)、70∶30(Ⅱ)、65∶35(Ⅲ)和60∶40(Ⅳ),预试期14d,正试期56d。结果表明,试验Ⅱ组肝脏、十二指肠和瘤胃中的SREBP-1和ApoA1mRNA相对表达量显著高于试验Ⅳ组(P0.05);试验I组肝脏和十二指肠中的FASN mRNA相对表达量显著高于试验Ⅲ组(P0.05),而在瘤胃和肌肉中的结果与之相反;试验Ⅰ组犊牛肝脏和十二指肠以及试验Ⅲ组瘤胃中的SCD1mRNA相对表达量显著高于其他各组(P0.05)。以上结果说明,日粮高精粗比能够促进犊牛体内脂肪的形成。     

血管内皮生长因子研究进展

血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)是一种由各种正常细胞或肿瘤细胞合成和分泌的糖蛋白。人类医学研究证明,VEGF有两种受体——KDR/FLK-1和FLT-1。VEGF与受体结合,具有促进血管内皮细胞的增生和提高微血管对大分子物质的通透性作用。人的VEGF 基因由8个外显子构成,主要有VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF206等5个同型异构体。等电点的差异和肝素亲合力的差异可能是造成VEGF 生物活性差异的主要原因。     

血管内皮生长因子及其受体在胚胎卵黄囊 不同发育时期的表达

为研究胚胎不同时期VEGF、KDR和CD34在人卵黄囊中的表达情况,了解胚胎造血的发育过程和机理。采用免疫组织化学SP法卵黄囊冰冻切片进行染色,光镜观察。结果发现在第3￣4周的人卵黄囊低表达VEGF和KDR,不表达CD34。4￣6周组强表达VEGF、KDR和CD34。在血岛内阳性细胞大而圆,成簇或分散聚集,有些细胞沿血岛边缘形成血管样结构。6周以后,卵黄囊弱表达VEGF、KDR和CD34。上述结果提示卵黄囊可表达造血和血管生成相关因子,随胚胎发育呈阶段性表达。卵黄囊中出现造血干细胞和血管内皮细胞的分化。     

羊膜移植抑制碱烧伤后角膜血管内皮生长因子表达的实验研究

目的探讨羊膜移植对角膜内血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及角膜新生血管形成的影响,方法12只兔(24眼)被建立角膜碱烧伤动物模型,行羊膜移植的左眼为实验组,右眼为对照组,分别采用免疫组化染色检查VEGF蛋白的表达,宏观测量新生血管长度及生长速度,显微镜下微血管计数方法研究角膜新生血管形成及抑制情况,结果与对照组比较,实验组兔眼角膜的VEGF蛋白表达下降,新生血管生长速度变慢,微血管数量减少(P＜0．01),VEGF主要表达在角膜受损区的炎性细胞胞浆内,其出现时间及位置与角膜新生血管一致,结论VEGF是一种重要的角膜内新生血管形成因子,其变化与角膜新生血管平行;羊膜移植可抑制碱烧伤角膜内VEGF的表达及角膜新生血管的形成.     

低分子肝素对高脂血症性胰腺炎大鼠VEGF表达的影响

目的 研究低分子肝素对大鼠高脂血症性胰腺炎胰腺微循环的作用机制。方法 将72只健康SD大鼠随机分成假手术组、模型组和治疗组各24只,每组再随机分成四个亚组。先采用高脂饮食建立高脂血症模型,模型组和治疗组制作大鼠急性胰腺炎模型,制模成功后治疗组分别于0、6、12、18 h开始使用低分子肝素皮下注射,各亚组均间隔6 h重复皮下注射一次,每亚组均干预4次;模型组和假手术组同时间点皮下注射等量生理盐水对照。结果 大鼠胰腺血流速度模型组低于假手术组,治疗组高于模型组（P<0.05）;胰腺组织病理学评分模型组高于假手术组,治疗组低于模型组（P<0.05）;模型组各亚组胰腺血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达、VEGF mRNA表达水平均高于假手术组,而治疗组均低于模型组（P<0.05）。结论 大鼠高脂血症性胰腺炎,VEGF与微循环障碍密切相关;低分子肝素可能通过下调胰腺组织VEGF水平来改善胰腺微循环障碍,减轻胰腺组织进一步损害,且早期干预价值更大。     

中药饮水剂对感染球虫后雏鸡血清一氧化氮及其合成酶的影响

为了进一步探讨中药饮水剂的抗球虫作用机制,将120只14日龄海兰褐蛋公雏,随机分为对照组(I)、感染组(Ⅱ)和中药饮水剂组(Ⅲ),每组40只。除I组外,其余每只鸡口服感染8.0×104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染0、3、6、9、12 d后,每组随机取鸡5只,心脏采血,用于血清一氧化氮(NO)及其合成酶(iNOS)的测定。结果表明,在感染后3 d,各组血清NO含量和iNOS活性无显著差异(P>0.05);在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性较Ⅱ组分别降低了36.17%和14.25%,差异极显著(P<0.01),与Ⅰ组比较无显著差异(P>0.05);至感染后9 d,虽然Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性与Ⅱ组差异不显著,但仍较其降低了12.53%和13.51%;至感染后12 d,Ⅱ组血清NO含量及iNOS活性基本恢复正常水平。结果提示:中药饮水剂通过抑杀球虫,以减少炎性因子的释放,抑制宿主细胞内iNOS活性及表达,降低血清NO含量。     

小花棘豆中毒对大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴α-甘露糖苷酶的影响

将144只雌性大鼠随机分为4组,即对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组.将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%(含苦马豆素30 mg·kg-1)、Ⅱ组添加30%(含苦马豆素60 mg·kg-1)、Ⅲ组添加45%(含苦马豆素90 mg·kg-1)的比例制作混合饲料,饲喂至典型中毒症状出现为止.攻毒后每7 d每组随机采集4只大鼠的下丘脑、垂体和卵巢,检测其AMA活性及表达的变化.结果表明,试验及对照大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(AMA1)和溶酶体α-甘露糖苷酶(AMA2)均有表达,但各试验组表达转录水平与对照组差异显著,试验Ⅰ组大鼠HPOA的AMA1及AMA2的表达均与对照组差异不显著(P0.05),但试验Ⅱ组大鼠HPOA的AMA1以及试验Ⅲ组大鼠HPOA的AMA1、AMA2相对表达均显著低于对照(P0.05),而且随着试验的进行抑制效果愈加明显.结果表明,小花棘豆中毒可影响大鼠HPOA中AMA的活性及其基因的转录表达.