金花茶胚和子叶离体培养诱导植株的研究

本文报道了金花茶胚和子叶离体培养技术,探讨了胚离体培养取材的时间以及子叶离体培养的适当培养基、丛生苗和假珠芽的形成等,为克服金花茶杂交育种中常规播种繁殖困难和快速繁殖金花茶,开辟了新的途径。     

金花茶及其远缘杂种未成熟胚、离体培养的初步研究

金花茶授粉（包括杂交授粉）后4个月以上（子叶大于1mm)的未成熟胚（包括生理落果）在修改的MS（HC1－B11mg/1,烟酸1mg/l)附加NAA0．01，ZT1，IBA0．5，谷氨酰胺20，丝氨酸2，LH500，琼脂0．76－0．8％，蔗糖6－8％，pH=5.8的培养基上，能发育成幼株，不带子叶的未成熟胚亦能成长，但生长较慢，未成熟胚在离体培养过程中，子叶增长很慢，增大甚少。     

火鹤花离体培养无菌体系建立技术的研究

研究了火鹤花(Anthurium and raeanum)外植体、基本培养基类型、叶片生理部位、植物生长调节剂、光照条件等因素对其愈伤组织诱导的影响。结果表明,叶片的诱导率最高达97.5%,污染率最低,仅为4.9%;诱导愈伤组织发生率及发生速度依次为:1/2MS培养基>MS>N6>B5>White,幼叶>中龄叶>老叶,不含叶缘叶片>含叶缘叶片。愈伤组织在1/2MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L中长势最好;在1/2MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.1 mg/L中生长旺盛,不定芽健壮,可进一步生根培养;每日12h光照下愈伤组织发生率最高。     

薄荷离体培养再生体系的建立及优化

试验结果表明,薄荷芽苗增殖的最佳培养基为附加6-BA1.0mg/L、NAA0.05mg/L、ag0.7%、Su3.0%的MS培养基,最佳培养温度条件为25℃,增殖系数最高可达10.7。在附加IBA1.0mg/L的MS培养基上培养10d,生根率达90%;在增殖培养基上延长继代时间至30d时,生根率达84%。     

辣椒离体培养和植株再生体系建立

选3种不同基因型的辣椒(Capsicum annuum L.)材料,建立了辣椒高频离体再生体系,试验结果表明:芽分化的最适培养基为:MS 6-BA 5 mg/L I AA 0.2 mg/L;芽伸长的最适培养基为MS 6-BA 5 mg/L I AA 0.2 mg/L GA3 2 mg/L;生根的最适培养基为MS NAA 0.1mg/L,当植株长到10～12片叶时,进行移栽.     

月季离体培养植株高效再生体系的建立

以月季品种红双喜为试材,以MS为基本培养基,研究不同6-BA与NAA浓度配比、不同芽龄对丛生芽增殖的影响,不同NAA浓度与培养基大量元素强度组合对芽苗再生根诱导的影响等。结果表明:月季品种红双喜丛生芽增殖的最佳培养基为MS 6-BA 2.0 mg/L NAA 0.05 mg/L,增殖倍数可达5.0;芽龄在5周以上的腋芽丛生芽增殖倍数可达5.0以上;芽苗再生根诱导的最佳培养基为1/2MS NAA 0.05 mg/L,再生根诱导率可达90%,平均再生根数为8.1条,瓶苗的移栽成活率高达100%。本研究成功建立了月季品种红双喜离体培养植株高效再生体系,为进一步开展月季基因工程研究奠定了基础。     

枸杞花药离体培养技术体系的建立

以宁杞1号为试验材料,探讨枸杞花药离体培养中不同激素组合、不同活性炭及蔗糖浓度、低温预处理或热激处理、不同光照培养条件对花药培养效果的影响.试验结果表明:最佳激素组合为2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L,花药愈伤组织诱导率达11.7%;4 ℃低温预处理5 d和32 ℃高温预培养2 d,均可显著提高愈伤组织诱导率;添加活性炭能提高胚状体的诱导率;培养基中适宜的蔗糖浓度为3%;暗培养优于光照培养和弱光培养.愈伤组织转入分化培养基(MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L)分化出大量绿色小芽,分化芽转入生根培养基(MS+NAA 0.1 mg/L)中,20 d后得到完整植株.     

枸杞胚乳离体培养技术体系的建立

以宁杞1号为试验材料,探讨枸杞胚乳离体培养中不同果期、不同激素组合、低温预处理、不同蔗糖浓度、接种密度、不同光照培养方式及胚因子对胚乳培养的影响.试验结果表明,最佳培养果期为色变期果;4℃下低温预处理3～4d可明显提高愈伤组织诱导率;激素组合1.0 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT诱导率最高,达63.3％,0.5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L KT激素组合中诱导率较高,达58.3％,且愈伤组织质地较好;培养基中蔗糖适宜浓度为5％;接种密度在6～8块/瓶时,诱导率较高;光培养优于暗培养,胚存在可明显提高愈伤组织诱导率,在GA3代替胚的培养下,愈伤组织诱导率也较高.愈伤组织转入分化培养基(MS +0.2 mg/L6 - BA +0.01 mg/LNAA)中分化出绿色小芽,转入生根培养基(1/2MS +0.01 mg/L 6 - BA +0.1 mg/L NAA)中诱导生根.     

岷江百合离体培养快繁体系建立

以岷江百合(Lilium regale)为试材,以MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质(6 BA,NAA,IBA)诱导丛生芽及再生植株.结果表明:采用先用75%的酒精浸泡20 s,再用0.1%Hgcl2浸泡6 min的灭菌方法最为有效,芽增殖最适培养基为MS+6 BA 3 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g+琼脂7.0 g,可培养出大量具有分化能力的不定芽,芽增殖倍数是最高的.在1/2 MS+NAA 0.1 mg/L+IBA 0.01 mg/L上生根质量好,在岷江百合整个培养过程中需要光照,在河沙∶珍珠岩∶草炭土=1∶1∶1基质上,移栽成活率高,可达92%.     

树莓离体培养无性系的建立

以树莓带芽茎段或顶芽为外植体,探讨不同激素种类与水平对其不定芽分化、增殖与不定根形成的影响,并筛选了树莓试管苗移栽的适宜基质。结果表明:不定芽启动培养以MS+BA 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L为宜;继代增殖以MS+BA0.5~1.0 mg/L+NAA 0.1~0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L+干酪素30~50 mg/L为宜;不定根分化以1/2 MS+IBA0.2~0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L或1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L为宜,生根率高于96%;在泥炭或泥炭∶蛭石=1∶1的基质中移栽,成活率高于93.8%。     

金花茶种子萌发与快速繁殖技术研究

[目的]研究防城港金花茶种子萌发及组培快繁技术,初步建立金花茶组织培养体系,为金花茶的组培快繁利用提供参考.[方法]以金花茶种子为外植体进行组织培养试验,设置3个不同种子的发育程度处理、17个不同培养基的激素浓度处理,测定不同处理对金花茶种子萌发率、增殖系数、株高、叶片数等的影响,筛选出适宜金花茶组培苗生长的萌发、继代和壮苗培养基.[结果]选用胚乳直径大于1.0 cm的金花茶种子接种于MS+GA3 1.0 mg/L培养基中,萌发率可达82.4%;金花茶组培苗增殖系数随6-BA浓度增加呈先上升后下降的变化趋势,当6-BA浓度为3.0 mg/L时增殖系数最大,达3.79;适宜金花茶壮苗生长的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,其平均株高、叶片数、茎粗等均优于其他处理;在黄泥∶泥炭=1∶1组合处理下金花茶组培苗移栽生根率最高,达61%,成活率也较高,为90%.[结论]广西防城港金花茶适宜的种子萌发培养基为MS+GA3 1.0 mg/L、继代增殖培养以MS+6-BA 3.0 mg/L效果较好、壮苗培养基以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L较适宜、黄泥∶泥炭=1∶1作为金花茶组培苗移栽基质最适宜.     

金花茶化学成分研究

利用色谱法和波谱法对金花茶(Camellia nitidissima Chi)的化学成分进行分离和结构鉴定。结果从金花茶中分离出3种化合物,分别为芦丁、Apigenin 6,8-di-C-β-glucopyranoside、肌醇。其中芦丁和Apigenin 6,8-di-C-β-glucopyranoside为黄酮类化合物。     

金花茶体胚和叶片愈伤组织培养

分别以金花茶子叶胚切块和成年植株叶片为材料,进行愈伤组织培养的研究。结果表明:金花茶子叶胚去外表皮后切块,接种于MS+1.5mg·mL-12,4-D+0.5mg·mL-1KT中,能诱导出愈伤组织,并能较好地继代,蔗糖浓度为6%时,愈伤组织生长良好;金花茶成年叶片在流水中冲洗30min,75%酒精浸泡30s后,转入0.2%HgCl2消毒剂中浸泡8min,接种于MS+1.5mg·mL-16-BA+0.5mg·mL-1IAA+4mg·mL-1NAA中,愈伤诱导率为98.335%,遮光有助于叶片愈伤组织的生长。     

金花茶成年树茎段离体器官发生

以金花茶成年树茎段为外植体进行离体器官发生研究。结果表明:分段消毒法是较为理想的消毒方式;附加2 mg.L-1BA及0.5 mg.L-1IAA的改良WPM培养基适合诱导腋芽萌发,萌发率达57.1%;芽苗在附加3 mg.L-1BA及0.2 mg.L-1IAA的改良WPM培养基上增殖效果较好;在附加4 mg.L-1或6 mg.L-1NAA的1/2MS培养基上可诱导芽苗生根。     

不同处理方法对金花茶组培苗不定根发生的影响

[目的]筛选金花茶组培苗的最适生根培养条件。[方法]以金花茶组培苗为材料,研究不同激素处理、不同生根培养基、不同形态MW培养基对金花茶组培苗生根的影响。[结果]就促生根激素而言,500 mg/L IBA溶液浸泡处理效果较好,其生根率达82.5%,显著优于NAA;就基础培养基而言,MW培养基的生根效果更好,其生根率是1/2MS培养基的1.5倍;固体培养和滤纸桥液体培养同样都能诱导不定根产生,且生根率相当,不定根都较发达,侧根多。[结论]将金花茶无菌苗基部浸泡于500 mg/L IBA溶液后,转接于MW固体培养基进行生根培养,效果最好。     

金花茶CnCHS基因原核表达载体的构建及表达分析

根据已经克隆得到的金花茶（Camellia nitidissima Chi．）查尔酮合成酶基因序列,设计引物对P1／P2扩增出该基因全长并将其构建到原核表达载体 pGEX 4T 1中,转入大肠杆菌BL21后,用浓度为0．4 mmol／L的IPTG诱导其表达。SDS PAGE电泳检测结果显示,被诱导的大肠杆菌菌体中出现了约68 ku的特异融合蛋白,表明该基因在大肠杆菌中成功表达。     

我国金花茶研究概况及其自主知识产权保护

通过对我国金花茶研究概况的论述,了解金花茶育种、分类、演化和应用的基本情况。在利用金花茶资源的基础上,分析存在问题,并就其自主知识产权的保护提出建议。     

液体培养过程中金花茶体细胞胚增殖优化

为获得大量性状一致的金花茶体细胞胚,试验采用单因素与完全随机设计,在液体培养过程中先后研究了碳源组合、脯氨酸浓度及培养基体积与接种量对其增殖的影响。结果表明：碳源组合对体细胞胚增殖无显著影响,但以40 g·L-1蔗糖与20 g·L-1山梨醇作为碳源时,低畸形胚的产生频率较低;脯氨酸浓度对体细胞胚增殖有极显著影响且适宜的浓度为2g·L-1;培养基体积、接种量及两者的交互作用均对体细胞胚增殖有极显著影响且其中影响最大的为培养基体积,最佳的培养基体积为45 mL,最佳的接种量为0.5或1.0 g。采用以上优化结果对体细胞胚进行液体培养,其增殖系数可达5.65且一致性良好。     

广西防城金花茶花期气候适应性分析

[目的]研究金花茶开花期与各气象要素的相关性,为提高金花茶产量和品质提供决策依据.[方法]收集广西防城国家基准气候站1982年11月~2016年3月逐日观测数据,运用普查法查找防城站1982~2016年共34年的逐日雨量、温度、相对湿度、日照、风等气象要素,统计各要素的平均值、距平值和5年滑动平均值等,用线性倾向估计最小二乘法和累积距平法找出各气象要素与金花茶开花期的相关性.[结果]广西防城金花茶花期多年降雨量稳定在200.0~300.0 mm,呈减少趋势,但不明显;金花茶单花周期降雨量在4.0~12.0 mm的时段长,为最适宜开花时段;11月上旬和3月中、下旬单花周期雨量≥12.0mm概率和中雨以上降雨过程概率均较高,不利于开花.广西防城金花茶花期干旱概率在35.0%以上,干旱特征明显.花期多年平均相对湿度为77%,线性拟合递减率为-0.527,有减小趋势,但不显著;3月中、下旬相对湿度≥85%以上日数在7d以上,高温高湿天气频现,对开花不利,12月中旬中后期和下旬前期易出现低温低湿天气.单花所需≥8℃有效积温约110℃,相对固定,各旬气温分布不均,导致单花维持周期呈单峰型分布,1月下旬单花周期最长,11月上、中旬和3月中、下旬最短.11~12月单花周期日照时数过多,均在24.0h以上,3月中旬平均日照时数仅有9.8 h.多年花期出现大风概率占全年出现大风概率的53.5%,需防范偏北大风天气.[结论]广西防城金花茶花期主要受持续性降雨、干旱、低温低湿、低温高湿、高温高湿、大风等气象灾害影响,种植户应关注当地天气预报,及时采取相应的防范措施,以达到提高金花茶产量和品质的目的.     

DRIS 法在金花茶和山茶营养诊断上的应用研究

【目的】根据研究结果及植物营养与肥料的关系进行平衡施肥,提高八角林下金花茶和山茶的生产能力和肥料利用率,为林下种植金花茶和山茶的栽培养护提供理论依据。【方法】以金花茶(Camellia nitidissima Chi)和山茶(C. japonica L)为试验材料,测定4种不同郁闭度下的金花茶和山茶的N、P、K元素含量,同时用DRIS法分析金花茶和山茶在不同郁闭度的八角林下的营养指标和养分情况。【结果】金花茶叶片的全N、全P含量均随着郁闭度的增加呈"增加-减小"趋势,均在郁闭度0.7下最大;金花茶叶片的全K和山茶叶片的全N、P、K含量均随着郁闭度的增加呈现增加趋势,且均在郁闭度0.9下最大。根据诊断施肥综合法(DRIS)分析发现,不同郁闭度下两种植物的需肥顺序各不相同;金花茶在全光照、郁闭度0.5、郁闭度0.7、郁闭度0.9下的需肥顺序为KPN、NPK、KNP、PNK;山茶在全光照、郁闭度0.5、郁闭度0.7、郁闭度0.9下的需肥顺序为NPK、KPN、KNP、PKN;金花茶的NII(营养不平衡指数)大小表现为郁闭度0.9CK郁闭度0.7郁闭度0.5,山茶表现为CK郁闭度0.9郁闭度0.5郁闭度0.7。【结论】根据两种植物的NII值大小可以得出,金花茶在郁闭度0.5下、山茶在郁闭度0.7下的营养最平衡,比较适宜两种植物的生长,但不同郁闭度下两种植物土壤养分状况、需肥情况存在一定差异,在生产上要根据实际郁闭度进行合理施肥。