继代培养对北虫草菌落形态及子实体产量的影响

采用3株北虫草(Cordceps militaris)组织分离株及2株单孢分离株在PDA培养基上进行15次继代培养。结果表明:组织分离株在继代培养中可发生明显角变。将角变区菌丝分离培养,根据菌落形态,可将菌落分为5种类型。Ⅰ、Ⅱ型菌落具有角变频率高、角变面积大的特点,多出现在组织分离株继代的最初几代。无角变的Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型分布在单孢株和组织分离株的继代的后几代。出发菌株决定角变类型及分布。Ⅰ型比Ⅱ型子实体产量高。菌株具有高角变频率时期子实体形成能力强。     

矿质元素对北虫草继代培养中菌落形态的影响

研究矿质元素对北虫草继代培养中菌落类型的影响,旨在探讨优型菌落保持代数最长的矿质元素配方.采用正交试验,将北虫草优良菌株L_(20)在不同矿质元素培养基上进行12次继代培养.结果表明:菌株L_(20)在不同培养基中继代培养后形成7种菌落类型,有子实体形成能力的菌落为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型,其中Ⅰ型菌落产量最高,Ⅲ型居中,Ⅱ型最低,Ⅴ型形成子实体均为畸形:Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型无子实体形成能力.各类型菌落在不同培养基中的分布规律是:子实体产量较高的Ⅰ、Ⅲ型菌落主要分布在前10代;产量较低的Ⅱ型菌落分布存前4代;子实体为畸形的Ⅴ型和无子实体形成能力的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型菌落主要分布在4代以后.保持优型菌落--Ⅰ型最为稳定的矿质元素配方为1.0g·L~(-1)k、0g·L~(-1)Mg~(2+)、0.02g·L~(-1)Ca~(2+)、0μg·L~(-1)Mn~(2+)、25μg·L~(-1)或375μg·L~(-1)Zn~(2+).可见,Ⅰ型菌落产量最高,为北虫草优型菌落.其主要形态特征为:菌落颜色较深呈橘黄色、菌丝气生性中等、菌落质地为致密绒毛状,有同心纹、存继代培养中有角变现象.1.0g·L~(-1)K~+、0.02g·L~(-1)Ca~(2+)、250μg·L~1或375μg·L~(-1)Zn~(2+)对Ⅰ型菌落起到延缓退化的作用,而Mn~(2+)、Mg~(2+)会促进其退化.     

不同培养介质对蛹虫草子实体生长及产量的影响

结合新疆地区蛹虫草栽培实际,在已有研究的基础上,针对不同培养介质进行处理,分析不同培养介质处理对蛹虫草子实体长度、鲜干重、生物转化率以及产量、产值效益等方面的影响,筛选适宜本地蛹虫草人工栽培介质,以期更好地提高本地区蛹虫草子实体的产出率和优品率。结果表明,不同培养介质处理对蛹虫草的菌丝发育及子实体生长影响具有显著差异。以组培玻璃圆瓶的表现最好,其蛹虫草的菌丝及子实体生长良好,虫草子实体长度6.50 cm,鲜重12.76 g/瓶,干重2.46 g/瓶,生物转化率最高,为63.8%,净利润2.02元/瓶。因此,组培玻璃圆瓶(内底径6.5 cm,口径6.9 cm,高10.8 cm)可作为蛹虫草人工栽培适宜的培养介质,提高其生产效率和产量,为伊犁乃至新疆地区规模化栽培人工蛹虫草提供技术支撑。     

影响蛹虫草子实体产量及质量的因素研究

通过对不同容量营养液的培养基、不同柠檬酸铵含量的培养基以及在不同培养条件下栽培的蛹虫草子实体产量和质量的分析比较,发现培养基营养液、柠檬酸铵含量、光照强度、相对湿度等因素都会影响蛹虫草子实体的产量和质量,培养基中加入40 mL营养液时蛹虫草子实体产量及高度最高,培养基中加入1.0 g/L柠檬酸铵蛹虫草子实体产量最高。适宜蛹虫草子实体生长的培养条件是温度20°C、光照强度500 lx、相对湿度70%。     

光照对人工培养蛹虫草子实体形成和生长的影响

光照在人工培养蛹虫草子实体中起着重要的作用。光质和光强对蛹虫草子实体形成、生长的影响试验结果表明,50~100 lx弱光对原基分化、子实体诱导有促进作用,光强1 000 lx条件下子实体生长好、产量高,橙黄光条件下子实体的质量和产量都有所提高。     

蛹虫草子实体人工栽培技术

介绍了蛹虫草子实体人工栽培技术,包括产地环境、栽培场所、培养基配制、灭菌、菌种培养扩繁、培养场所消毒、恒温培养管理、污染防治、采收、贮藏等内容,以期为蛹虫草人工栽培提供参考。     

固体培养条件对蛹虫草产子实体和虫草菌素的影响

研究了营养液不同pH值和米粒大小两个培养条件对蛹虫草固体发酵产子实体和虫草菌素的影响.当营养液pH值为5.5～6.0时子实体的产量最大,营养液pH值为6.5时,虫草菌素总的产量最大,达48.44 g/瓶.较大的米粒有利于蛹虫草子实体的生长,较小的米粒有利于蛹虫草虫草菌素的积累.子实体的产量随着米粒的变小而减少;子实体中虫草菌素的含量随着米粒的变小而增加.当采用整米作为培养基基质时,蛹虫草子实体产量最大,达1.67 g/瓶,当采用40目米 10目米(1∶1,M/M)作为培养基基质时,蛹虫草子实体中虫草菌素含量最大,达1.87%,虫草菌素总的产量也最大,达52.46 mg/瓶.     

优质蛹虫草菌种的快速选育方法

从人工栽培的蛹虫草子实体上分离得到Az和Bz2个群体菌株,观察其菌落形态并从中选取部分菌株进行子实体产生实验。结果表明,菌落颜色为杏橙色且气生菌丝较少的菌株摇培后菌丝球较小而且密集,出草率高且产量高;菌落颜色为淡柠檬黄色且气生菌丝多的菌株摇培后形成的菌丝球大且稀少,出草率低;菌落颜色为乳白色且气生菌丝浓密基本不出草。     

温度对蛹虫草菌丝及子实体生长的影响

以优质蛹虫草(Cordycps militaris Link)液体菌种为栽培种,分别以12、16、20、24、28℃5个不同温度处理对蛹虫草的发菌、转色、原基分化、子实体生长等主要生长阶段进行单因子对照试验,通过比较各温度处理的菌丝及子实体形态、色泽、生长趋势、产量、质量的变化,并以实际栽培产量及商品性能为主要指标,探索蛹虫草不同生长阶段适宜培养温度及生长规律。结果表明,当培养温度分别为16~20、20~24、20、20℃时,蛹虫草各生长阶段的生长性能优良,生产周期较短,出草产量较高。说明蛹虫草菌丝及子实体生长对温度十分敏感,实行变温管理是提高蛹虫草产量与质量的有效措施。     

蛹虫草发酵条件的初步优化

采用单因素法,研究了蛹虫草发酵过程中培养温度、培养时间、种龄、接种量、培养基初始pH值等因素对蛹虫草发酵的影响,最后通过蛹虫草的菌丝收率,来确定最佳发酵条件。研究结果表明：培养基初始pH值为6．0,种龄为4d,培养温度为27℃,培养时间为55h,接种量为7．5％（v／v）,在该条件下所得蛹虫草菌丝收率最高,以此确定蛹虫草发酵的最佳条件。     

提高蛹虫草质量和产量的综合生产技术研究

目前市场上生产的蛹虫草产品没有统一的质量标准,影响市场对蛹虫草产品的消费,研究结果表明,蛹虫草菌种Hz1孢子复壮的菌株培养的子实体干重高于菌种B1、Bz1、H1孢子复壮的菌株培养的子实体干重,其液体培养基最优组合为葡萄糖20 g/L、蛋白胨8 g/L、KH2PO4 1.0g/L、MgS04 500 mg/L.生产富硒蛹虫草培养基的最优主料为富硒大米45 g、培养液55 mL,在培养温度为22℃、空气相对湿度70％时蛹虫草子实体生长最好.综合而言,子实体培养最优条件为日间温度22℃、夜间温度15℃、空气相对湿度70％、光照度200 lx,并结合先用日光灯照射、待子实体长至1～2 cm时使用蓝紫灯照射处理的产量最高.检测结果显示,蛹虫草子实体的有效成分含量分别为硒52.03 mg/kg、蛋白质27.74％、腺苷0.05％、多糖2.50％、虫草素2.61％、氨基酸26.92％,尤其是所含的虫草素具有工业提取价值.     

蛹虫草中虫草素测定方法的比较

采用紫外分光光度法和高效液相色谱法测定蛹虫草子实体中虫草素的含量。结果表明:这两种方法在测定蛹虫草子实体中虫草素的平均回收率分别为100.1%和100.2%,RSD分别为2.3%和1.2%。这两种方法均可作为蛹虫草子实体中虫草素含量的测定方法,但高效液相色谱法专属性强,灵敏度高,测定结果更为准确。     

蛹虫草在豆天蛾上的接种试验

[目的]探讨蛹虫草在豆天蛾幼虫和蛹上的接种效果。[方法]以豆天蛾幼虫和蛹为寄主,进行蛹虫草接种试验,比较不种接种方法对豆天蛾幼虫和蛹感染虫草菌种的影响及接种效果。[结果]不同接种方法对豆天蛾幼虫和蛹感染虫草能力有影响。从感染虫草菌能力方面看,用浸过虫草液体菌种的洋槐叶饲喂的豆天蛾幼虫为寄主进行的接种试验的效果最好,其次为以放置在已经发满菌丝的固体培养基上并用洋槐叶饲喂的豆天蛾幼虫为寄主进行的接种试验;而豆天蛾蛹上接种的最佳方法为注射50山的液体菌种。[结论]该研究为蛹虫草寻求廉价的寄主和工厂化生产提供了理论依据。     

蛹虫草主要有效成分分析

[目的]进一步开发蛹虫草,满足人们对药品和滋补保健品的需求。[方法]通过用HPLC测定核苷类化合物和氨基酸,乙醇沉淀法测定虫草多糖,比色法测定虫草酸,SOD Assay Kit-WST试剂盒测定SOD酶酶活分析蛹虫草的主要有效成分。[结果]蛹虫草子实体中含有虫草素(3′-脱氧腺苷)、腺嘌呤、脱氧胸苷、尿嘧啶、腺苷、次黄嘌呤、鸟苷、尿苷等核苷类化合物,18种氨基酸,其中以谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、亮氨酸含量最高;甘露聚糖和葡萄糖含量分别为13.88和16.68 mg/g,虫草酸含量为17 mg/g,胞内SOD酶酶活为515.40 U/g。[结论]蛹虫草的主要有效成分为:核苷类化合物(虫草素、腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷)、虫草酸、虫草多糖、氨基酸、SOD酶等。     

不同培养液对蛹虫草多糖及虫草酸含量的影响

[目的]明确不同碳氮源培养液对蛹虫草多糖及虫草酸含量的影响。[方法]以不同碳氮源培养液振荡培养蛹虫草,用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量,用高碘酸钠法测定虫草酸含量。[结果]培养液中多糖含量以米蛹配方最高,为6.48mg/ml,其次为玉米糁蛹的5.87mg/ml;虫草酸含量以玉米糁蛹配方最高,为5.21mg/ml,其次为米蛹的4.94mg/ml;菌丝体中多糖含量以玉米糁蛹配方最高,为68.32mg/g,其次为米蛹的57.91mg/g;虫草酸以麦米蛹配方最高,达186.29mg/g,其次为小麦蛹的180.32mg/g。[结论]选择适宜碳氮源进行蛹虫草的液体培养,可获得多糖和虫草酸含量很高的培养物。     

蛹虫草多糖提取及纯化工艺研究

采用以大米、蚕蛹为主原料的培养基培养蛹虫草子实体。通过正交实验对蛹虫草水溶性多糖的提取工艺进行了研究,利用蒽酮-硫酸法来测定多糖含量。发现90℃、加水20倍、分3次提取、每次3 h为最佳提取条件。同时考查了不同除蛋白方法对虫草多糖的蛋白去除效果。     

蛹虫草菌液体发酵工艺的研究

通过恒温振荡液体培养法,研究了蛹虫草菌合理的发酵条件及其对各营养物质的利用情况。采用正交实验,应用方差分析法,确定了合理的发酵条件:22℃、150 r/m in、pH 6~7、接种量10%、培养时间6d;筛选出合理的液体培养基:蔗糖4.0%、玉米汁3.0%、麸皮3.0%、全脂牛奶粉1.0%、蛋白胨0.5%、VB10.01%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%。