无角道塞特羊胚胎移植技术研究

(1)超排处理无角道塞特绵羊163只,育成羊(76只)只均回收胚胎5.53枚,可用胚3.91枚,经产母羊(87只)只均回收胚胎7.55枚,可用胚6.34枚。经产羊平均回收胚胎总数高于育成羊(P<0.05)。春季和秋季之间超排效果差异不明显。重复超排羊和非重复超排羊之间平均回收胚胎总数和可用胚胎数差异均不显著(P>0.05)。(2)共处理受体876只,春季和秋季受体的同期发情率分别为56.37%和89.02%,发情受体利用率分别为84.67%和88.77%。(3)移植受体545只,妊娠318只,产羔396只,受体移植妊娠率为58.35%,移植胚胎成羔率为57.47%,在移植受体中,小尾寒羊的妊娠率最高为61.2%,同羊和内蒙细毛羊分别为54.62%和56.58%,受体品种之间移植妊娠率差异不显著(P>0.05)。受体黄体数对移植妊娠率及胚胎成羔率有一定的影响。胚胎的发育阶段对移植妊娠率也有影响,移植囊胚受体妊娠率最高为64.76%,明显高于早期桑椹胚移植妊娠率42.86%(P<0.05)。胚胎成羔率从桑椹胚到囊胚差异不显著(P>0.05)。     

受体牛品种和移植季节对胚胎移植妊娠率的影响

研究分析了不同受体品种、受体牛饲养方式和移植季节对胚胎移植妊娠率的影响。用于移植的冷冻性控胚胎由加拿大进口。移植的受体选用鲁西黄牛和西门塔尔牛。分析结果显示：受体牛品种对胚胎移植的妊娠率有一定的影响，鲁西黄牛的妊娠率相对较高（40．80％），而西门塔尔牛的妊娠率则相对较低（38.10％）。经卡方独立性检验受体品种与妊娠率之间无显著性关联（P〉0．05）。另外，受体牛饲养方式和移植季节对胚胎移植的妊娠率也有一定的影响，集中含饲条件下受体的整体妊娠率相对较高。秋季移植受体的妊娠率要比春季移植的相对稍高，但二者之间的差异均没有得到显著的水平。     

山羊鲜胚及冻胚移植

经超排处理获黑山羊3日龄新鲜胚眙12枚,分别移植到同期发情的6只白色受体羊,其中2只妊娠,产羔3只,受体妊娠率为33.3‰(2/6),鲜胚移植成功率25.0%(3/12)。7日龄山羊冷冻胚胎35枚,分别移植到同期发情的18只浏阳黑山羊和白色马头山羊受体母羊,其中7只妊娠,受体妊娠率为38.89%(7/18)。产活羔10只,流产1只,冻胚移植成功率31.43%(11/35)。     

肉羊胚胎移植成活的影响因素实例分析

【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P0.01);胚胎卵裂期与囊胚期移植妊娠率差异不显著(P0.05),但以2细胞移植的妊娠率最低;鲜胚与冻胚的妊娠率差异不显著(P0.05),2枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率,胚胎妊娠率随着胚胎质量而下降;囊胚与受体同期性差-24 h,妊娠率差异不显著(P0.05);放牧与舍饲的受体羊在胚胎妊娠率方面没有显著差异性(P0.05)。【结论】胚胎和受体因素对胚胎发生成功妊娠具有重要的影响。     

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

波尔山羊胚胎徒手分割试验

在体视显微镜下，用含20％NCS的PBS液作为操作液，用显微玻璃针徒手分割波尔山羊早期囊胚。将13枚A级囊胚用于分割，其中11枚对称分割为两半胚，2枚为不对称分割。将13对半胚手术移植于13只同期发情的受体羊黄体侧子宫角．有5只受体妊娠，半胚移植受体妊娠率38．5％（5／13）。其中有2只妊娠受体发生流产，观察到3只流产胎儿，其余3只受体妊娠到期，获得3只正常半胚后代。     

绵羊冷冻胚胎移植试验报告

本试验用年龄为２～３岁的绵羊，产１胎次的３０只杂交羊作受体，采用自然发情和ＴＣＭ－１９９为基础液配制的解冻液，于１９９２年９月２日至２９日进行手术法移植，本试验共移植２５只受体母羊，共计３４枚冷冻胚胎，胚龄为５～６天，胚胎保存期为２～４个月。妊娠１７只，妊娠率为６８％，其中移植单胚１６只，妊娠１０只，妊娠率为６２％；移植双胚９只，妊娠７只，妊娠率为７７％。１９９３年１月２３日开始陆续产羔，共产羔２０只，产羔率为１１８％，其中３只羊产双羔。     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

小型农牧场及农户波尔山羊胚胎移植关键技术研究

从小型农牧场及农户特点出发,探讨在这些场(户)进行波尔山羊胚胎移植时,供体超数排卵、受体同期发情、供受体羊胚胎回收和移植操作等关键技术对胚胎移植效率的影响。结果表明,调整供、受体母羊的发情周期并采用优化超排程序和同期发情程序,可获得理想的超排和同期发情结果,有效手术供体回收卵数平均达到(17.31±6.93)枚,可用胚(14.96±6.28)枚;受体同期发情率达到94.28%(2125/2254),手术受体利用率为86.55%(1602/1851)。严格而熟练的手术操作可提高供体利用次数,获得理想的胚胎移植结果,将2648枚胚胎移植给1602只受体后,妊娠率达到66.85%(1071/1602),其中1044只受体妊娠足月,产羔1320只。     

山羊配子输卵管内移植受精技术

以2只屡配不孕"波尔山羊"、1只F2代杂交波尔山羊、6只"徐淮白山羊"为卵子供体,经同期发情和超排处理,腹腔镜观察卵巢卵泡发育状况后筛选出供手术采卵供体。从7只供体中采集到可用卵子39枚,采用输卵管内配子移植(GIFT)技术植入受体徐淮母羊12只。移植后连续3个发情周期妊娠鉴定表明,12只受体中有6只未返情,妊娠率为50%。2只受体产单羔,1只受体产3羔(难产)。共移植39枚卵子,5枚发育为后代,配子受精发育率为13%。     

影响山羊胚胎移植效果的因素初探

为探讨最佳的胚胎移植方案,提高胚胎移植效率,试验以不同受体山羊为研究对象,比较了不同受体品种、移植胚胎数目、不同季节等因素对胚胎移植效果的影响。结果表明:不同品种受体和移植季节对胚胎移植效果影响不显著(P>0.05);胚胎移植数目对妊娠率没有显著影响(P>0.05),但移植一枚胚胎的胚胎受孕率显著高于移植二枚和三枚胚胎(P<0.01)。     

波尔山羊胚胎移植产业化关键技术研究

为使波尔山羊胚胎移植形成产业,对供、受体羊的选择、同期发情、超数排卵、采胚、检胚与移植等关键技术进行了研究.在非繁殖季节(北京地区 4月至 8月),供体波尔山羊 15只,受体羊(马头山羊) 76只,受胎率为 71.0%,移植产羔率为 42.1%;在繁殖季节(北京地区 9月至翌年 3月),供体波尔山羊 34只,受体羊(马头山羊) 98只,受胎率为 68.4%,移植产羔率为 48.0%.这表明波尔山羊胚胎移植可以从研究阶段发展到产业化应用阶段.     

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究

[目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞(GFF)和乳腺上皮细胞(GMGE)移植到MII期去核卵母细胞内,经电融合、激活、体外培养后,2~8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内,囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近(输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%);在GFF,输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近(分别为26.47%及25.00%),输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组(40.00%及26.67%,21.43%)。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大,但对于输卵管移植,受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外,该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。     

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to understand the effects of donor cell type,embryo stage,number and transfer position on the efficiency of goat transgenic clone.[Method] Using somatic cell nuclear transfer technology,the single goat fetal fibroblasts(GFF)and mammary gland epithelial cells(GMGE)harboring human lactoferrin(hLF)gene were transferred to the enucleated oocyte.Reconstructed karyoplast-cytoplast couplets were fused,activated,and cultured in vitro.Embryos at 2-8 cell stage were transferred into oviduct of synchronized recipients,and blastocysts were transferred into uterine horn.[Result] The pregnancy rate was similar between GFF and GMGE(oviduct transfer:26.47% vs.20.00%),and between oviduct transfer and uterine horn transfer(26.47% vs.25.00%)for GFF group;pregnancy rate in the group with the mean number of embryo transferred per recipient of 21.2 was significantly higher than in those the 5.93 group and 9.64 group(40.00% vs.26.67% and 21.43%).[Conclusion] These results indicate that pregnancy rate of goat transgenic clone couldn't be affected by donor cell type,embryo stage and transfer position but be done by the number of embryo transferred per recipient.In addition,the study also suggests the feasibility of making transgenic goat using GMGE as donor cells.     

Pregnancies Resulting from Transgenic Embryos with Human Lactoferrin Gene Produced by Somatic Cell Nuclear Transfer

[Objective] The aim of this study is to understand the effects of donor cell type,embryo stage,number and transfer position on the efficiency of goat transgenic clone.[Method] Using somatic cell nuclear transfer technology,the single goat fetal fibroblasts(GFF)and mammary gland epithelial cells(GMGE)harboring human lactoferrin(hLF)gene were transferred to the enucleated oocyte.Reconstructed karyoplast-cytoplast couplets were fused,activated,and cultured in vitro.Embryos at 2-8 cell stage were transferred into oviduct of synchronized recipients,and blastocysts were transferred into uterine horn.[Result] The pregnancy rate was similar between GFF and GMGE(oviduct transfer:26.47% vs.20.00%),and between oviduct transfer and uterine horn transfer(26.47% vs.25.00%)for GFF group;pregnancy rate in the group with the mean number of embryo transferred per recipient of 21.2 was significantly higher than in those the 5.93 group and 9.64 group(40.00% vs.26.67% and 21.43%).[Conclusion] These results indicate that pregnancy rate of goat transgenic clone couldn't be affected by donor cell type,embryo stage and transfer position but be done by the number of embryo transferred per recipient.In addition,the study also suggests the feasibility of making transgenic goat using GMGE as donor cells.     

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。     

盐酸丁卡因松弛奶山羊子宫颈试验研究

用蘸有１％～２％盐酸丁因溶液的纱布块填塞在发情后７天的奶山羊子宫颈外口处，松弛子宫颈１％浓度盐酸丁卡因作用２０ｍｉｎ外径４ｍｍ的采胚爱从子宫颈的通过率为９４％（１７／１８）；２％浓度作用１０ｍｉｎ，通过率为１００％（６／６），均极显著高于对照组（Ｐ〈０．００１），奶山羊非手术采胚和移胚试验结果，盐酸丁卡因既能用供体羊，又能用于受体羊，对胚胎无任何影响。     

采胚方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

采用2种采胚方法研究了64只波尔山羊的胚胎移植效果。结果表明:输卵管采胚法的胚胎回收率极显著高于(P<0.01)子宫角采胚法,且前者的获胚数与可用胚数均显著高于(P<0.05)后者,而两者的黄体数则差异不显著(P>0.05),说明采用输卵管采胚法所采集的胚胎数量与质量均优于子宫角采胚法;而子宫角移胚法的受体妊娠率及产羔率均极显著高于(P<0.01)输卵管移胚法。试验还表明,输卵管采胚法对处理供体术后的发情率有一定的不良影响,故在山羊胚胎移植中应优先采用子宫角采胚法回收胚胎。     

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to understand the effects of donor cell type,embryo stage,number and transfer position on the efficiency of goat transgenic clone.[Method] Using somatic cell nuclear transfer technology,the single goat fetal fibroblasts(GFF)and mammary gland epithelial cells(GMGE)harboring human lactoferrin(hLF)gene were transferred to the enucleated oocyte.Reconstructed karyoplast-cytoplast couplets were fused,activated,and cultured in vitro.Embryos at 2-8 cell stage were transferred into oviduct of synchronized recipients,and blastocysts were transferred into uterine horn.[Result] The pregnancy rate was similar between GFF and GMGE(oviduct transfer:26.47% vs.20.00%),and between oviduct transfer and uterine horn transfer(26.47% vs.25.00%)for GFF group;pregnancy rate in the group with the mean number of embryo transferred per recipient of 21.2 was significantly higher than in those the 5.93 group and 9.64 group(40.00% vs.26.67% and 21.43%).[Conclusion] These results indicate that pregnancy rate of goat transgenic clone couldn’t be affected by donor cell type,embryo stage and transfer position but be done by the number of embryo transferred per recipient.In addition,the study also suggests the feasibility of making transgenic goat using GMGE as donor cells.