不同基因型高山杜鹃茎段离体培养及工厂化繁育体系优化

为了优化高山杜鹃茎段离体组织培养体系及其工厂化繁育体系,对10份不同基因型高山杜鹃离体培养与植株再生差异进行了研究。结果表明,供试高山杜鹃茎段外植体在WPM培养基上均能诱导出芽、增殖和生根。在诱导萌发阶段,添加0.5～1.0 mg/L的ZT萌发效果较好,其中有7份材料在0.5 mg/L ZT时获得最佳萌发诱导。在增殖阶段,最佳增殖激素配比为ZT 0.5～0.7 mg/L+NAA 1.0 mg/L,其中6份材料在ZT 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L激素配比下增殖达6～9倍。生根阶段,培养基最佳激素配比则为NAA 0.25mg/L+IBA 0.25 mg/L。并且试管外生根效果好于试管内生根,平均成活率为80.95%,而试管内平均成活率仅为57.94%。在最佳激素配比下供试所有高山杜鹃采用试管外生根成活率均在98%以上,并且试管外生根成本低,操作简便快速,适用于工厂化生产。     

绿玉树茎段组织培养再生体系的建立

[目的]研究绿玉树茎段组织培养再生苗的条件,确定各培养阶段的最佳培养条件,为绿玉树组培苗工厂化生产和相关研究提供参考。[方法]以绿玉树茎段作为外植体试验材料,研究了不同培养基对萌芽率、增殖倍数、生根率的影响。[结果]萌芽培养最佳的诱导培养基为1／2MS＋O．02mg／LNAA＋1．00mg／L6-BA,分化率为89．7％;继代培养最佳培养基为1／2MS＋O．02mg／LNAA＋O．60mg／L6-BA＋3．00mg／LAD,增殖倍数为5．70;生根培养最佳培养基为1／2MS＋0．40mg／LNAA＋0．40mg／LIBA,生根率达100％,移栽成活率达80％。[结论]初步确定了绿玉树茎段组织培养的生长条件。     

高山杜鹃的组织培养快速繁殖技术研究

以德国产高山杜鹃的茎段和茎尖进行外植体诱导试验,结果显示,茎外植体诱导无菌芽效果较好,诱导率达50．0％。分别比较了不同培养基对外植体诱导、丛生芽增殖及试管苗生根的效果,结果表明,外植体诱导的适宜培养基是1／4MS MS铁盐 维生素B50．2mg／L KTl．0mg／L 水解乳蛋白(CH)300mg／L 蔗糖30g／L;丛生芽增殖的适宜培养基是1／2MS KT0．5mdL 水解乳蛋白(CH)300mg／L 蔗糖30g／L;生根培养基则以1／2MS NAA5mg／L 蔗糖20g／L 活性炭0．5％为宜。试管苗经假植炼苗培育成穴盘苗再移栽定植,可确保种苗质量,经穴盘培育的高山杜鹃试管苗,上盆移栽存活率达100％。     

高山杜鹃组织培养快速繁殖技术研究

以比利时高山杜鹃茎段和叶片为外殖体进行诱导试验,显示茎外植体诱导丛生芽效果好。分别比较了不同激素对外殖体诱导、丛生芽增殖及组培苗生根试验的效果,表明:相对较优的芽诱导培养基为1/4MS0+ZT 2.0mg/L+IAA0.5mg/L;继代增殖培养基为1/4 MS0+ZT 0.5～1.0mg/L+IAA0.5mg/L+GA31.0mg/L;壮苗生根培养基为1/2MS+蔗糖20g/L+活性碳2g/L+IBA0.5mg/L,移栽成活率80%以上。     

绿玉树茎段组织培养再生体系的建立（摘要）

[目的]研究绿玉树茎段组织培养再生苗的条件,确定各培养阶段的最佳培养条件,为绿玉树组培苗工厂化生产和相关研究提供参考。[方法]以绿玉树茎段作为外植体试验材料,研究了不同培养基对萌芽率、增殖倍数、生根率的影响。[结果]萌芽培养最佳的诱导培养基为1/2MS＋NAA0.02mg/L＋6-BA1.0mg/L,分化率为89.7%;继代培养最佳培养基为1/2MS＋NAA0.02mg/L＋6-BA0.60mg/L＋AD3.0mg/L,增殖倍数为5.70;生根培养最佳培养基为1/2MS＋NAA0.40mg/L＋IBA0.4mg/L,生根率达100%,移栽成活率达80%。[结论]试验初步确定了绿玉树茎段组织培养的生长条件。     

无患子优选树茎段离体培养体系的建立

【目的】筛选无患子茎段离体快繁最佳培养基,建立无患子优良种苗快速繁育体系。【方法】以野外选优获得的无患子树带腋芽茎段为外植体,采用L9(33)正交试验对影响外植体灭菌的HgCl2浓度、HgCl2与酒精的作用时间,不定芽诱导萌发中的6-BA、NAA及蔗糖用量,继代增殖中6-BA与KT用量和芽苗生根中的MS培养基无机盐水平、6-BA和2,4-D用量进行优化。【结果】75%酒精浸泡1 min,再用0.2% HgCl2处理7 min是无患子茎段灭菌的最佳方法,其外植体成活率高达83.33%;MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖是无患子茎段腋芽萌发的适宜培养基,诱导率高达96.67%;MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT是无患子茎段腋芽增殖的适宜培养基,30 d可增殖4.13倍;1/3 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.7 mg/L 2,4-D是诱导芽苗生根的适宜培养基,平均生根率为41.50%。【结论】建立的无患子离体培养体系为:外植体茎段用75%酒精浸泡1 min,再用0.2% HgCl2灭菌7 min,在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+20.0 g/L蔗糖培养基中诱导腋芽萌发,在MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT培养基中进行增殖培养,在1/3MS+0.5 mg/L 6-BA+0.7 mg/L 2,4-D培养基中进行生根培养。     

柱花草茎段组织培养研究

以‘热研2号’柱花草茎段为外植体,研究不同激素种类及组合对试管苗诱导、增殖和生根的影响。结果表明:将带芽茎段接种在MS+6-BA 5.0 mg/L+GA30.5 mg/L的培养基中腋芽诱导率最高可达90%;最佳不定芽增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,其分化率达100%;最佳生根培养基为MS+IBA 1.0 mg/L+IAA1.0 mg/L。综上所述,该研究结果改变了丛生芽的产生途径,缩短了分化时间,提高了增殖速度,是快速繁殖柱花草苗的有效方法。     

杜鹃的组织培养 Ⅱ.无性系的茎尖培养

以杜鹃无性系品种的嫩梢为外植体,以Anderson改良MS培养基为基本培养基。在初代和增殖培养中,分别以添加玉米素(ZT)10—15ppm和5ppm可获得理想效果。生长素可采用NAA,浓度因玉米素添加量而异,一般不宜超过0.5ppm。生根培养时,蔗糖添加量仍为30g/l,NAA为1.5—2ppm,活性炭2g/l。     

芦荟茎段的组织培养

采用芦荟茎段培养,经实验得出最佳培养基配方。诱导分化培养基：Ｍｓ＋６－ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ;增殖培养基：Ｍｓ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ;生根培养基：Ｍｓ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ。     

高山杜鹃组织培养中褐化控制的研究

为降低高山杜鹃组织培养中外植体的褐化程度,实验对高山杜鹃组织培养中不同的外植体(顶芽、叶片、带腋芽的茎段)、不同的基本培养基和不同的抗褐化剂等进行了研究.结果表明,高山杜鹃不同的外植体褐化率不同,其中带腋芽的茎段的褐化率最低;活性炭对外植体褐变起到了很好的抑制作用,其中以添加1.0g/L的活性炭时外植体褐化率最低.     

高山杜鹃组培快繁技术研究

[目的]为高山杜鹃的快速繁殖提供技术指导。[方法]以高山杜鹃的侧芽为外植体,先将其在1/2MS培养基中预培养30 d,再对其进行芽增殖、芽伸长和生根培养,研究不同激素组合对其芽增殖、芽伸长和生根率的影响。[结果]当分裂素为6-BA时,每芽增殖数较少（最多为2.1个）,当分裂素为KT时,芽增殖数随KT浓度的增加而增加,当KT为0.5 mg/L时,每芽增殖数最多（4.8个）,且芽质量较好;培养基中KT/IAA为1/4时,芽最长（平均为5.1 cm）,且芽较健壮;当培养基中加入IAA时,每株平均生根数较少（最多为1.2条）,当加入NAA时,生根率随NAA浓度的增加而增加,当NAA为2.0 mg/L时,每株平均生根数最多（6.2条）。[结论]高山杜鹃组培苗增殖、芽伸长和生根的最佳培养基分别为MS＋KT 0.5 mg/L＋IAA 0.5 mg/L、MS＋KT 0.25 mg/L＋IAA 1.0 mg/L和1/2 MS＋NAA2.0 mg/L。     

离体培养高山杜鹃增殖的影响因子研究

[目的]培养基种类以及激素TDZ、NAA对高山杜鹃组培苗增殖的影响.[方法]应用正交试验设计拟定试验方案,以增殖系数为测定指标,筛选适合高山杜鹃组培苗增殖的最优培养基.[结果]经直观分析、方差分析和多重比较进行综合评价,高山杜鹃增殖的最优培养基为WPM培养基+NAA 0.01 mg/L+TDZ1 mg/L,其中培养基种类和激素TDZ对其影响最大,通过方差分析达到了极显著水平.[结论]用组织培养方法进行杜鹃的快速繁殖生产,为工厂化育苗提供了科学依据.     

油菜素内酯对秦岭高山杜鹃耐热性的影响

以野生高山杜鹃幼苗为试材,研究不同质量浓度[0(对照)、0.05、0.10、0.50、1.00、1.50 mg/L]油菜素内酯(BR)对高山杜鹃热害指数及生理生化指标的影响。结果表明:在高温胁迫下,随着BR质量浓度的增加,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性及脯氨酸、可溶性蛋白含量均呈现先升后降的趋势,且BR质量浓度在0.5 mg/L时脯氨酸含量、可溶性蛋白含量最高分别为32.8μg/g、2.5 mg/g,SOD、POD、CAT活性最高分别为89.6、84.5、25.5 U/g;MDA含量呈现先降后升的趋势,且BR质量浓度在0.5 mg/L时效果最为明显,MDA含量在高温胁迫72 h比对照组降低40.49%;不同质量浓度BR均能降低热害指数,缓解高温对高山杜鹃幼苗的伤害。BR质量浓度为0.50 mg/L时对高温胁迫下高山杜鹃各项生理生化特征有较好的缓解作用,可减轻高温对杜鹃的热伤害,提高其耐热性。     

高山杜鹃ISSR-PCR反应体系建立

[目的]建立高山杜鹃的ISSR—PCR反应体系。[方法]运用正交试验分析模板DNA、TaqDNA聚合酶、Primer、Mg^2＋和dNTPs5个因子对杜鹃ISSR-PCR反应影响,建立高山杜鹃ISSR-PCR反应体系。[结果]杜鹃ISSR—PCR25m反应体系中5个因子较适水平为：DNA模板浓度为1．6ng／μl,TaqDNA聚合酶浓度为0．040U／μl,Primer浓度为0．64mmol／L,dNTPs浓度为0．68mmol／L,Mg^2＋浓度为2．08mmol／L。[结论]研究结果为利用ISSR分子标记技术研究杜鹃提供了理论支持。     

茉莉酸甲酯对秦岭高山杜鹃耐热性的影响

为提高高山杜鹃的耐热性,给高山杜鹃的引种栽培提供依据,通过对秦岭高山杜鹃外施植物生长调节剂,测定高温胁迫下不同浓度外源茉莉酸甲酯处理杜鹃幼苗叶片的热害指数,并测定叶片中的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)、脯氨酸含量及质膜透性。结果表明:在高温胁迫下,随着茉莉酸甲酯浓度的增加,SOD、POD及CAT活性及脯氨酸含量呈现先升后降的趋势,且茉莉酸甲酯浓度在100μmol/L时SOD、POD及CAT活性达到最大,分别为107U/g、92U/g和12.74U/g;MDA含量、质膜透性呈先降后升的趋势,茉莉酸甲酯浓度在50μmol/L时质膜透性和MDA含量最小,分别为20%和8.92μg/g。不同浓度的茉莉酸甲酯均能缓解高温对高山杜鹃幼苗的伤害。茉莉酸甲酯浓度为50μmol/L和100μmol/L时对高温胁迫下高山杜鹃各项生理生化特征有较好的缓解作用,可减轻高温对高山杜鹃的热伤害,提高其耐热性。     

影响西洋杜鹃离体试管苗开花的几个因素

[目的]研究影响西洋杜鹃离体试管苗开花的因素。[方法]以西洋杜鹃无菌试管苗为材料,研究培养基、外源激素、外植体生理状态、光照、活性炭对西洋杜鹃离体试管苗开花的影响。[结果]低盐量、低硝酸盐的1/2 Read培养基较适合西洋杜鹃花芽的诱导,平均诱导率为34.44%;保持一定湿度的含0.7%琼脂的半固体培养基诱导花芽的效果好。IBA 2.0 mg/L是诱导花芽产生的最适宜激素用量。茎尖分化的试管苗最适宜作花芽诱导的材料。光强强度3 000 lx,光照16 h/黑暗8 h的光照条件适合花芽的诱导培养。培养基中加入0.2%活性炭能显著提高花芽诱导率。[结论]外植体生理状态、培养基成分及状态、光照强度和时间、植物激素等对西洋杜鹃离体培养试管苗开花均有影响。     

精原干细胞体外培养体系的建立

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是雄性哺乳动物精子发生及具有生育能力的保障。精原干细胞的体外培养不仅为精子发生的研究提供材料,还有助于开发新的家畜保种方法和动物遗传修饰。为了探索猪精原干细胞体外培养体系的建立方法,本研究采用胶原酶Ⅳ-胰酶两步酶法对3~7日龄大白仔猪睾丸进行消化得到单细胞悬液,利用不同时间程序的差速贴壁对精原干细胞进行纯化,选择大白仔猪睾丸支持细胞作为饲养层,添加不同细胞因子研究精原干细胞的增殖情况以期得到最佳的培养体系。结果显示,通过差速贴壁得到的UCHL-1阳性生殖细胞比例最高为18.59%±0.94%;不同细胞因子组合添加试验发现精原干细胞添加20 ng·mL^-1 GDNF、10 ng·mL^-1 IGF和20 ng·mL^-1 bFGF的增殖效果最佳;以支持细胞作为饲养层、在DMEM/F12中添加1%FBS以及上述细胞因子组合对精原干细胞进行培养15 d后可见大量的精原干细胞集落,通过免疫荧光、AKP染色、荧光定量PCR等试验证明精原干细胞进行了大量增殖。本研究初步建立了猪精原干细胞的体外培养体系,可通过体外培养大量增殖精原干细胞,为后续精原干细胞的研究奠定基础。     

猪胚胎体外培养体系优化对胚胎干细胞建系的影响

为提高体外胚胎发育质量和体外胚胎建立胚胎干细胞系效率,研究以N2B27为基础的干细胞培养体系对猪孤雌胚胎体外发育和后续建立胚胎干细胞系的影响。设立3个试验组:PZM-3组,孤雌激活的胚胎全程PZM-3培养体系中培养; N2B27组,孤雌激活的胚胎全程N2B27培养体系中培养; PZM-3-N2B27组,孤雌胚胎在PZM-3培养体系中培养至桑葚胚后更换为N2B27培养体系。结果表明,N2B27组无法获得囊胚,但PZM-3-N2B27组胚胎可正常发育至囊胚,囊胚率未显著提高,但囊胚细胞总数显著提高(P<0.05)。PZM-3-N2B27组获得孤雌囊胚用于建立猪胚胎干细胞系,显著提高原代克隆形成率(P<0.05),获得猪胚胎干细胞系呈碱性磷酸酶阳性,表达Oct4、Sox2和Nanog等多能性基因。结果表明,采用PZM-3和N2B27培养体系结合获得的猪孤雌囊胚利于猪胚胎干细胞系建立。研究为进一步优化猪胚胎体外培养体系,获得初始态胚胎干细胞系提供参考。     

杜鹃花组织培养技术研究

试验以东洋杜鹃花 (Rhododendron.L)的茎尖 (含茎段 )、叶片为培养材料 ,研究确定其合适的组织培养各因素条件。结果表明 ,1)由于杜鹃花生长在酸性条件下 ,底盐分浓度及高比值 NH4 + /NO3- 的基本培养基 K和 B适合东洋杜鹃 ;2 )最佳 p H值为 5 .2 ;3)诱导芽的最适外植体为 3～ 5月的顶芽 ,愈伤培养的最适外植体为嫩叶 ;4 )以K& B+2 ,4 - D(1) +6 - BA(0 .0 5 )和 K& B+6 - BA (0 .5 ) +NAA (5 )最适合培养愈伤组织 ,K& B+1AA (1) +2 ,4 - D(4 )对茎尖培养效果较好