浙江省平湖市南美白对虾虹彩病毒病初步调查及防控措施

为有效预防南美白对虾虹彩病毒病的发生,对浙江省平湖市林埭镇的患病南美白对虾进行了临床症状观察、病理解剖、寄生虫检查和细菌分离。病虾症状为活力较差,肝胰腺明显萎缩,肌肉发白,肠道发红、断裂,空肠空胃,鳃、步足及游泳足发黑。病虾的鳃、肝胰腺、肌肉中未发现寄生虫,肝胰腺、鳃、血淋巴中未分离出致病弧菌。经套式聚合酶链式反应(PCR)检测,确定引起此次南美白对虾集中连片死亡的原因是感染了虾血细胞虹彩病毒(SHIV)。同时检测发现,附近河道中的浮游生物、河虾、鲫、螺蛳以及河蟹等也存在不同程度的携带或感染虹彩病毒情况。根据相关生物感染和携带病毒的情况,提出了对虾虹彩病毒防控措施。     

上海地区养殖罗氏沼虾头部“白点病”的诊断

上海郊区养殖的罗氏沼虾出现了头部“白点病”,造成大量沼虾死亡。患病罗氏沼虾的明显临床症状是位于额角基部的造血组织呈白色不透明状。组织病理学检查表明,病虾造血组织细胞出现异常的嗜碱性包涵体。超微病理研究发现,其造血细胞的细胞质被大量病毒颗粒侵染,该病毒颗粒呈二十面体结构,直径大小为(153±8)nm。聚合酶链式反应(PCR)检测表明,该病毒三磷酸腺苷(ATP)酶基因与十足目虹彩病毒(DIV1)基因序列一致性达100%。根据综合病理和分子检测结果,确认此次上海地区养殖罗氏沼虾“白点病”是由十足目虹彩病毒(DIV1)导致的。文章可为罗氏沼虾“白点病”的诊断和病害防控提供理论依据。     

一例南美白对虾十足目虹彩病毒来源初探

<正>南美白对虾是当前世界上养殖规模最大、产量最高的对虾,具有肉质鲜美、抗病力强、生长迅速等特点。随着养殖面积的扩大和集约化生产的发展,养殖环境不断恶化,病害频发,极大地制约了南美白对虾养殖产业的发展,其中十足目虹彩病毒1(Decapod iridescent virus 1,以下简称DIV1)是近年来流行的主要病原之一。DIV1感染可引起养殖对虾短时间内暴发大面积死亡,     

十足目虹彩病毒(DIV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

本研究以十足目虹彩病毒(Decapod iridescent virus 1, DIV1)主要衣壳蛋白基因为靶序列设计引物,建立了DIV1的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测方法,并以pMD18-DIV1质粒标准品为模板对该方法的检测灵敏度、检测特异性等进行了评估。结果显示,此方法最适反应温度为64.4℃,优化后的25 μl反应体系中包含2.5 μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg2+、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart® DNA聚合酶、0.8 μmol/L EvaGreen®和4.4 μl ddH2O。该方法检测灵敏度下限为3.54×102拷贝/反应;与虾肝肠胞虫(EHP)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)、对虾偷死野田村病毒(CMNV)、传染性皮下及造血组织坏死病病毒(IHHNV)、白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)和黄头病毒(YHV)等主要虾类病原没有交叉反应;具有较好的重复性和稳定性。以GeneFinder®替换EvaGreen®并将其预置于反应管内,结合上述扩增方法可实现对DIV1的现场快速高灵敏检测。本研究建立的DIV1-LAMP实时荧光定量和现场检测方法具有灵敏、特异和快速等特点,为近几年新发虾类病原DIV1的定性、定量以及现场快速检测提供了新的技术选择,有利于对虾养殖业中开展DIV1的监测、预警和防控。     

重组酶快速检测十足目虹彩病毒1方法的建立

为建立十足目虹彩病毒1的快速检测方法,根据十足目虹彩病毒1的ATP酶基因(ORF114R)保守序列设计特异性引物,通过条件优化,建立基于重组酶聚合酶扩增技术的十足目虹彩病毒1检测方法.重组酶聚合酶扩增技术的最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成.特异性试验结果显示,该方法与其他常见虾类感染病毒无交叉反应....     

汕头地区对虾——青蟹池塘混养模式特点及技术要点

对虾、青蟹同属节肢动物门、甲壳纲、十足目，分类学上近缘，生态位接近。汕头市从80年代发展养虾开始便有虾农实施对虾一青蟹混养，张万隆1991年从对虾、青蟹生物学及生态学角度分析和肯定了它们混养的可行性。但近几年来研究发现青蟹可能作为对虾病毒原传播宿主，出现交叉感染故混养模式在学术上争论颇多。     

2022年宁波市南美白对虾主要病原流行病学调查

为了解虾肝肠胞虫(EHP)、十足目虹彩病毒1(DIV1)、白斑综合征病毒(WSSV)和致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Vp_AHPND)在宁波地区养殖南美白对虾中的致病途径和流行规律,采用PCR方法检测了该地区不同养殖模式下南美白对虾及其周边环境和生物中这4种病原的感染情况。结果显示：南美白对虾样本中,WSSV在整个养殖过程中未检出,Vp_AHPND阳性率最高,为14.6%,其次是EHP和DIV1,阳性率分别为10.2%和2.9%;土塘养殖模式下对虾病原检出率最高,为61.3%,其次为小棚模式和帆布池模式,病原检出率分别为26.3%和22.2%,大棚养殖的南美白对虾中未检出病原;水样中检出WSSV、EHP、Vp_AHPND、DIV1阳性批次数分别为1、14、8、6;底泥样品中未检出病原;周边环境生物中,仅1个批次的脊尾白虾检出EHP阳性。结果表明：4种病原在夏季有较强的流行趋势,需要针对性地加强防控;大棚养殖模式的抗风险能力要高于其他养殖模式,在该模式下水质相对稳定,受外界因素影响较小;病原在底泥和周边环境生物中检出率较低,而在...     

虾苗中斑节对虾杆状病毒感染的调查

近年来由于对虾病毒病的流行,给对虾养殖业带来了巨大的灾难。斑节对虾杆状病毒（Penaeusmonodonbaculovirus,MBV）为肠感染病毒,主要感染肝胰腺和前中肠的上皮细胞核。其宿主范围较广,可感染多种养殖对虾,但主要感染斑节对虾（Penaeusmonodon）,其仔虾感染率和致死率均可达100％,养成期虾感染率63．6－100％,多数虾池为90％左右。由于对虾病毒病缺乏特效药治疗,放对其应采取综合防治的原则,如育好苗、管好水、科学技何及应用一些抗病毒的中草药治疗等。其中虾苗质量的优劣对养成期的对虾的生长及虾病的发生发展均有很大的关系…     

养殖银鲳虹彩病毒感染的组织病理学分析及分子检测

2018年7月,宁波象山某养殖场内银鲳出现集中死亡现象,累积死亡率高达80%以上,为探究此次疾病暴发的原因,本研究通过对患病银鲳进行组织病理学分析、透射电镜观察、病原的分子生物学检测及分析来对其病原进行鉴定,以便制定合理的防控措施。患病银鲳临床表现为厌食、身体失衡、脾脏肿大、肝脏颜色异常等病征。组织病理学观察发现,患病银鲳肝脏、脾脏和肾脏均出现直径10～15μm、细胞质嗜碱性的肿大细胞。进一步的透射电镜观察则在脾脏、肾脏等组织细胞内发现了病毒包涵体结构以及大量的病毒粒子,直径为140～160 nm。通过虹彩病毒特异性PCR检测发现,患病组织样品为虹彩病毒阳性。此外,通过病毒主要衣壳蛋白基因(MCP)序列分析,发现银鲳源病毒与大黄鱼虹彩病毒(GenBank登录号:AY779031.1)MCP同源性最高为99.76%,认为此分离病毒属于虹彩病毒科、肿大细胞病毒属、真鲷虹彩病毒(Red sea bream iridovirus, RSIV)类群。本实验首次报道了全人工养殖环境下银鲳感染虹彩病毒的病例,该研究将为养殖银鲳虹彩病毒病的诊断和防治提供重要的参考依据。     

国内外对虾病毒病研究综述

本文就对虾病毒最新进展与动态进行了概述。具体介绍了对虾病毒研究的各项成果,列出了已见报道的近20种对虾病毒病原的中英文名称;描述它们的生物学和病理学的一些特征,包括对虾病毒的地理分布、对虾病毒的传播途径、感染病对虾的发病症状以及宿主虾细胞、组织和器官的病理变化;概述了对虾病毒的诊断方法:显微镜观察生物学测定、免疫学方法、细胞培养、生化检验、分子生物学方法;根据目前还未发现有效治疗对虾病毒病的药物现状,指出了几种预防对虾病毒病的措施。     

养殖三疣梭子蟹十足目虹彩病毒1的检出及组织病理学分析

为探究浙江省舟山市某养殖池塘中三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)暴发疾病的病因, 应用组织病理学、 分子生物学和荧光原位杂交等技术手段, 对患病三疣梭子蟹组织进行检验。研究发现, 患病三疣梭子蟹的临床症状主要表现为食欲下降, 行动迟缓, 鳃水肿; 光学显微镜下观察鳃及血淋巴液未发现寄生虫, 肝胰腺等组织中也未分离到致病菌; 采用 PCR 方法对病蟹进行血卵涡鞭虫(hematodinium)、白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV)、青蟹双顺反子病毒(mud crab discistrovirus-1, MCDV-1)以及青蟹呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus, SSRV) 蟹类常见病原 PCR 检测, 结果均为阴性; 病蟹的肝胰腺、心脏、鳃等组织的病理切片中可观察到明显的细胞病变和嗜酸性包涵体; 超薄切片电镜观察显示: 病蟹的肝胰腺、心脏和鳃组织中均存在六边形病毒颗粒, 粒子直径 150 nm 左右, 与已报道的十足目虹彩病毒 1 (decapoda iridescent virus 1, DIV1)形态特征相似。采用特异性套式 PCR 检测方法对患病蟹组织样品进行 DIV1 病原检测, 所有样本均扩增出 457 bp 和 129 bp 大小的目的片段。进一步根据 GenBank 中 DIV1 的主要衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)表达基因和三磷酸腺苷酶(ATPase)表达基因序列设计特异性引物, 均能从病蟹样品中扩增出预期大小的 MCP 和 ATPase 基因开放阅读框(open reading frame, ORF)区全长。将扩增获得的 MCP 和 ATPase 基因 ORF 区全长进行测序和同源序列比对分析, 进化树分析结果表明其与十足目虹彩病毒属(Decapodiridovirus)病毒的 MCP 和 ATPase 基因序列自然聚为一支, 判定导致此次三疣梭子蟹发病病原为 DIV1。根据原位杂交探针设计原则, 以 DIV1 的 MCP 和 ATPase 基因的保守区域为靶位点分别设计探针, 通过荧光原位杂交获得了病毒粒子在病蟹肝胰腺、心脏、肌肉和鳃组织的分布情况, 与电镜切片观察和套式 PCR 检测结果相符。研究结果可为海水养殖三疣梭子蟹十足目虹彩病毒 1 病诊断与防控提供参考。     

Development of new real-time PCR methods for detection of Decapod iridescent virus 1 in shrimp

Novel Decapod Iridescent virus (DIV1) infections emerged in mainland China around 2014 and have devastated shrimp aquaculture operations in Chinese coastal provinces. In 2020, DIV1 has spread to Taiwan with devastating results to shrimp and crayfish farms, in addition to being found in wild caught Penaeus monodon from the Indian Ocean. This trend is a major cause for concern and an urgent reminder to expand the tools needed to monitor the spread of DIV1 globally. Here, we describe a set of four different real-time polymerase chain reaction (PCR) assays positioned across the genome of DIV1 to detect the virus in shrimp tissues. All four assays show a wide dynamic range and high analytical sensitivity and specificity. In addition, the newly developed assays show excellent diagnostic sensitivity and specificity in clinical Litopenaeus vannamei samples of North Asian origin. The new molecular toolset will enhance global capabilities to monitor the spread of DIV1 and ultimately be used as an early warning system for farmers and authorities to engage in appropriate risk mitigation strategies.     

传染性皮下及造血组织坏死病毒致病性研究进展

传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)是一种分布较广、危害较大的对虾病毒,已被世界动物卫生组织(OIE)列为须向其申报的甲壳类重要疫病病原。IHHNV在我国已形成了一定的流行趋势,目前仍是严重危害我国养殖虾类的重要病毒。本文从IHHNV的流行地区及危害、宿主、致病类型、对宿主不同年龄阶段的致病性差异、与白斑综合征病毒(WSSV)的干扰作用、感染机制和致病机理方面,综述了与IHHNV致病性相关的研究进展,以期为进一步深入研究IHHNV防控提供参考资料。     

Recent insights into host–pathogen interaction in white spot syndrome virus infected penaeid shrimp

Viral disease outbreaks are a major concern impeding the development of the shrimp aquaculture industry. The viral disease due to white spot syndrome virus (WSSV) observed in early 1990s still continues unabated affecting the shrimp farms and cause huge economic loss to the shrimp aquaculture industry. In the absence of effective therapeutics to control WSSV, it is important to understand viral pathogenesis and shrimp response to WSSV at the molecular level. Identification and molecular characterization of WSSV proteins and receptors may facilitate in designing and development of novel therapeutics and antiviral drugs that may inhibit viral replication. Investigations into host–pathogen interactions might give new insights to viral infectivity, tissue tropism and defence mechanism elicited in response to WSSV infection. However, due to the limited information on WSSV gene function and host immune response, the signalling pathways which are associated in shrimp pathogen interaction have also not been elucidated completely. In the present review, the focus is on those shrimp proteins and receptors that are potentially involved in virus infection or in the defence mechanism against WSSV. In addition, the major signalling pathways involved in the innate immune response and the role of apoptosis in host–pathogen interaction is discussed.     

Progress in research on acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND)

Acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) of shrimps is an important disease, first appeared in China in 2009. Since then, AHPND has caused serious drops in shrimp production (up to 20 % worldwide). Although AHPND [originally termed as acute hepatopancreatic necrosis syndrome (AHPNS)] first appeared in 2009, it was not until 2013 that a laboratory infection model was devised and the causative agent identified as certain strains of Vibrio parahaemolyticus. AHPND has caused mortality from 40 to 100 % which usually occurs early (within approximately 35 days) after stocking shrimp fry in shrimp ponds; therefore, it was initially referred to as early mortality syndrome (EMS). Confusingly, other pathogens and environmental factors also cause EMS and are often attributed to AHPND by shrimp farmers. Frequently, farmers do not send samples for confirmatory tests requiring detection of the unique histopathology at the acute stage of disease (massive sloughing of hepatopancreatic epithelial cells without any accompanying signs of a pathogen). The gross signs presumptive of AHPND (lethargy, slow growth, empty stomach and midgut, and a pale to white, atrophied hepatopancreas) are insufficient for confirmatory diagnosis. Recently, molecular detection of AHPND bacteria using PCR has been developed, which has sped up diagnosis and increased research on the causative agent, alternative detection methods, and possible therapies. We hope that this review of research progress on AHPND will serve as a useful introduction for researchers who are currently unfamiliar with AHPND, but have backgrounds in bacterial virulence, detection, and epidemiology, and may be encouraged to participate in the research effort to reduce AHPND’s impact on shrimp cultivation.     

对虾白斑综合征病毒蛋白质组的研究进展

白斑综合征病毒WSSV(White Spot Syndrome Virus,WSSV)是引起对虾大规模死亡的主要病毒性病原,且该病毒感染的宿主广泛。自WSSV基因组全序列公布以来,国内外的学者对WSSV的研究热点转移到该病毒基因产物功能的相关研究上面来。弄清WSSV感染机理是有效防治病毒的基础,而对其感染机理的阐释则主要是搞清病毒各蛋白在感染中的作用,这些是WSSV蛋白质组学的研究内容之一。分析WSSV蛋白同时可以在分子水平上为研究海洋和陆地生物病毒的进化趋势提供有力的基础。     

饲料添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、Toll受体及溶菌酶基因表达及抗感染的影响

以初体重为(7.20±1.38)g的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,在室内养殖箱进行3周的养殖实验和2周的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)人工感染实验,其中对照组每日投喂普通商品饲料,实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)1.0×10~8 CFU/m L配制成的实验饲料。目的是研究饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、Toll受体及溶菌酶基因表达量和抗哈维氏弧菌能力的影响。实验结果表明,在饲料中添加地衣芽孢杆菌可显著提高对虾抗哈维氏弧菌感染的能力,其相对免疫保护率为22.22%。与对照组相比,实验组可显著降低对虾肠道内弧菌数量(P0.05)。感染哈维氏弧菌后,实验组溶菌酶(lysozyme,LZM)m RNA的相对表达量在12 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h均显著高于对照组(P0.05)。实验组感染哈维氏弧菌后在6 h、12 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h、7 d的Toll受体(Toll receptor)m RNA的相对表达量均显著高于对照组(P0.05)。实验结果提示:饲料中添加地衣芽孢杆菌可有效提高对虾抗哈维氏弧菌感染的能力,这种能力的提高可能是通过降低对虾肠道内的弧菌量,并提高抗病相关基因的表达量实现的。     

适合中国对虾群体遗传多样性和系统进化分析的DNA分子标记技术

中国对虾（Fenneropenaeus chinensis）是我国海水养殖业中最具代表性的一项产业,优良种质和抗病力已成为对虾养殖业中迫切需要解决的问题。在遗传育种中若能筛选到与抗病、生长等数量性状紧密连锁的遗传标记,将为开展标记辅助育种工作和实现良种化奠定基础。对虾种质资源以及种群遗传学已成为研究热点,种群保护也已提到议事日程。这些研究工作的开展将为对虾良种选育提供理论依据,相信随着研究工作的继续深入,人们会更好、更有效地利用对虾资源。本文对目前已经在对虾遗传多样性和系统进化研究中进行应用的DNA标记技术方法进行分析总结,拟对今后其他物种开展相关工作提供借鉴。     

An online operational alert system for the early detection of shrimp epidemics at the regional level based on real-time production

Diseases are among the greatest threats affecting the sustainability of shrimp aquaculture. In Ecuador, diseases of cultured shrimp have been quickly transmitted from one region to another. Therefore, an early detection system of impending epidemics could serve as an important management tool for the aquaculture sector. We developed a system for the early detection of shrimp epidemics for the largest shrimp zone of Ecuador based on production surveillance. The system, called Epidemiological Alert System and Aquaculture Management (SAEMA), uses a geographical information system (GIS) with an imaginary grid cartography (12,860 ha per grid) dividing the study area. A production and management index is calculated with the harvest data of each pond. A standardized deviation around the historical averages and an alert level is calculated per grid and month. Normal conditions of production and therefore the absence of disease are depicted in green and yellow. While, orange and red colours express a disease warning manifested through suboptimal production levels. As a result, a map of the study area with grid divisions is displayed, with a specific alert colour for each grid where information is available. SAEMA was developed as a Web application (http://www.saema.espol.edu.ec) that enables producers to record data via a worksheet format using any web browser. Instantaneously, the applications perform a calculation of the alert index and provide feedback to the alert levels displayed in an interactive map. A feedback process was initiated in May 2006 with 19 participating shrimp farms. The objective of this research is to develop a platform for an early detection of shrimp epidemics on a regional scale. The detection of an epidemic, expressed as suboptimal production in a specific region, can provide producers from other zones and government authorities to engage in time preventive and control measures in order to reduce the spread of diseases.     

中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal)的重组表达及活性分析

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以通过精确调控丝氨酸蛋白酶的活力,在生物体的防御应答等众多生物过程中发挥重要作用。以前期克隆的中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal, GenBank注册号为DQ318856)为基础,对其功能结构域进行序列比对和进化分析;组织表达分析结果表明,该基因在血细胞、鳃和淋巴器官等组织中高水平表达,而在眼柄、神经和肌肉中无表达;利用原核表达系统对该基因成熟肽区域成功进行了重组表达,纯化后的目的蛋白最终得率为0.4 g/L培养液;活性分析结果显示,复性后的rFc-Kazal对鳗弧菌、金黄色葡萄球菌、杀鲑气单胞菌、苏云金芽孢杆菌有明显的抑菌作用。