中国蜂胶及其主要组分对两种肺癌细胞作用及机制研究

蜂胶具有较好的抗肿瘤功效,但其功效成分及其作用机理还未完全阐明。本文研究了中国蜂胶乙醇提取物(EECP)(100μg/ml)及其主要组分(咖啡酸苯乙酯、白杨素、芹菜素、高良姜素)(80μM)抑制两种肺癌细胞(A549和H1299)的作用功效及机理。通过transwell实验,发现EECP及其主要组分显著抑制A549和H1299细胞的浸润;通过Hoechst33258染色和Western blotting检测,发现EECP及其主要组分显著促进两种肺癌细胞的凋亡,上调caspase 3水平,降低未剪切PARP蛋白水平,而EECP及其主要组分促进A549和H1299两种肺癌细胞凋亡与上调肿瘤细胞内活性氧水平、降低线粒体膜电位有关。蜂胶及其主要组分是潜在的抗肿瘤天然活性物质。     

甘草乙醇提取物对猫肾脏细胞的毒性研究

甘草常见于一些处方猫粮的配方中,但其对猫肾脏毒性作用尚无研究。本研究分析了甘草乙醇提取物的主要成分,并通过细胞模型分析了提取物对猫肾脏细胞CRFK的毒性作用。结果表明,甘草乙醇提取物中多糖含量较高,在24 h作用时间内,高浓度提取物(≥200μg/mL)对猫肾脏细胞CRFK细胞活力、中性红吞噬能力有抑制作用,能显著降低贴壁细胞的总蛋白含量,低浓度(50μg/mL)提取物对CRFK细胞活力无显著影响;50μg/mL甘草提取物长期作用(96 h)对CRFK细胞活力有显著促进作用。研究提示,家猫长期采食含有适当量甘草的处方粮不会对其造成肾脏毒性,但需要进一步体内研究验证。     

辣蓼黄酮提取物对南美白对虾血淋巴细胞内免疫相关酶活性的影响

研究旨在观察辣蓼黄酮提取物对南美白对虾血淋巴细胞免疫相关酶活性的影响。试验设不同浓度辣蓼黄酮提取物组(1 600、800、400、200、100、50、25、12.5μg/mL)、黄芪多糖对照组(1 600、800、400、200、100、50、25、12.5μg/mL)和0.5%DMSO对照组,采用CCK8法测定细胞活性;试剂盒检测细胞内酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、酚氧化酶(PO)和超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性。结果显示,浓度为12.5～100.0μg/mL的辣蓼黄酮提取物能提高体外培养的南美白对虾血淋巴细胞的细胞活性,并能够不同程度地增强南美白对虾血淋巴细胞内的ACP、AKP、PO和SOD等免疫相关酶活性。结果表明,辣蓼黄酮提取物能通过提高南美白对虾血淋巴细胞内免疫相关酶活性而增强其免疫功能。     

蒲公英根多糖的体外抗炎作用研究

从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL～200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。     

复方中药加味四物汤对LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响

目的:研究复方中药加味四物汤的抗炎效果。方法:选择小鼠RAW264.7细胞为模型细胞,采用噻唑蓝法(MTT法)检测加味四物汤(mSWD)对该细胞的细胞毒性。用脂多糖(LPS)刺激小鼠RAW264.7细胞,使其活化,建立体外炎症模型,并通过ELISA和RT-PCR方法检测加味四物汤在50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL不同浓度时对体外炎症模型分泌TNF-α、IL-6和IL-1β等炎性细胞因子的影响。结果:加味四物汤浓度在0～320μg/mL范围内对小鼠RAW264.7细胞无毒副作用;浓度为50μg/mL、100μg/mL和200μg/mL时对炎症模型分泌细胞因子TNF-α和IL-6有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;而浓度为200μg/mL时,对IL-1β分泌有抑制作用。结论:LPS诱导小鼠RAW264.7细胞能使TNF-α、IL-6、IL-1β的蛋白含量和mRNA表达量增加,加味四物汤可抑制该生物反应,发挥间接抗炎作用。     

蜂胶抗炎功效成分研究

为确定中国杨属型蜂胶的抗炎功效成分,用100ng/ml脂多糖(LPS)和40μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)分别诱导脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤。通过SRB法分别检测蜂胶水提物中分离的11种组分和蜂胶乙酸乙酯提取物中分离的8段组分对2种炎症细胞模型细胞存活率的影响。结果表明:蜂胶水提物中的11种组分不同程度的促进2种炎症细胞的细胞存活率,乙酸乙酯提取物中的8段组分也是不同程度的提高2种炎症细胞的细胞存活率。由此可知,蜂胶的抗炎功效成分十分复杂,很可能是多种成分协同功效的结果,而且酚酸类物质发挥了一定的作用。     

蜂胶的毒性研究概况

随着蜂胶研究的深入和应用的扩大,各国学者对蜂胶提取物的毒性和致敏作用也进行了广泛研究. 1.急性毒性 没有关于未加工的粗蜂胶的毒性的试验报道.蜂胶一般采用乙醇、甲醇、乙醚等有机溶剂或用蒸馏水提取其有效成分,分离出大部分蜂蜡及其它不溶物.由于蜂胶的提取没有统一标准,关于蜂胶提取物毒性的报道会有很大差别.例如,南通医学院药理教研组给小白鼠灌服15%蜂胶淀粉混悬液,得到蜂胶急性LD50为6.3±0.167g/kg;家兔亚急性试验每日喂服蜂胶粉2.7g/kg,连续给药30日后,对家兔血清谷-丙转氨酶、血尿素氮及肝、肾、心、肺等组织均无明显影响,喂药过程中未见家兔有异常现象(房柱,1984).     

蜂胶对烟曲霉抑菌机制的体外研究

探讨蜂胶对烟曲霉的抗茵作用及其作用机制,为蜂胶临床治疗由烟曲霉引起的疾病提供参考依据。本文采用不同浓度(10、20、30、40、50、100、150、200 mg/m1)的蜂胶乙醇提取物(EEP)处理烟曲霉孢子,结果发现,其存在剂量依赖性,接着琼脂稀释法测定蜂胶的最小抑茵浓度(MIC),将烟曲霉与1/2MIC_(50)EEP孵育3d后发现,蜂胶组烟曲霉菌丝的重量和呼吸速率显著低于对照组,且蜂胶组孢子的超微结构严重受损。通过半定量PCR分析磷脂腺肌醇信号通路相关的表达情况,发现蜂胶组pKC基因与对照组相比呈现下调趋势。这些结果暗示,蜂胶能够抑制烟曲霉的生长,具有治疗由烟曲霉引起的疾病的潜力,是一种有前途的生物活性化合物。     

黑种草籽提取物对炎症模型的作用研究

目的:探讨黑种草籽乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对成纤维细胞炎症模型作用及保护大肠杆菌感染小鼠的作用机制.方法:将两种提取物按不同浓度添加到细胞炎症模型中,观察细胞形态；将两种提取物均按1 g/mL浓度腹腔注射给炎症模型小鼠,观察小鼠临床症状,ELISA检测血清白细胞介素-10(IL-10)的表达水平.结果:0.1 g/mL乙酸乙酯提取物和0.4 g/mL乙醇提取物均可引起细胞病变,细胞固缩脱壁或裂解破碎；乙醇提取物在其安全浓度0.1-0.2 g/mL、乙酸乙酯提取物在其安全浓度0.025-0.05 g/mL均对细胞炎症模型有抗炎作用.与对照组比较,模型组小鼠血清IL-10显著升高(P＜0.05)；两种提取物治疗组IL-10水平均较模型组低,与对照组比较无显著差异,两种提取物(1 g/mL)均有降低炎症小鼠血清IL-10水平的趋势,对小鼠大肠杆菌的感染有保护作用,且乙醇提取物较乙酸乙酯提取物有效.结论:黑种草籽乙酸乙酯提取物和乙醇提取物在安全浓度内均对细胞炎症模型有抗炎作用；两种提取物(1 g/mL)均可降低炎症小鼠血清IL-10水平,且对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,乙醇提取物较乙酸乙酯提取物好.     

胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留

建立了胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留的检测方法。样品在碱性条件下溶解稀释,20%高氯酸溶液除杂过滤后,加入碱化剂适量,经乙酸乙酯提取,盐析净化后,再用乙酸乙酯提取吹干,加入正己烷和复溶液溶解后,用胶体金快速检测试剂板快速检测。结果表明,胶体金免疫层析法对蜂胶及蜂胶提取物中氯霉素残留量的检测限分别为0.1μg/kg和0.2μg/kg。经高效液相色谱-串联质谱确证,假阳性率和假阴性率均为0%。该方法操作简单、灵敏度高、准确可靠,可用于加工蜂胶及蜂胶乙醇提取物过程中对氯霉素残留量的质量控制。