生鲜奶中β-内酰胺酶残留情况调查及来源分析

β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的细菌分泌的一种胞外酶，该酶可选择性分解牛奶中残留的β-内酰胺类抗生素，通过水解使β-内酰胺环打开而失去抗菌活性，类型众多，底物不同，特性各异。β-内酰胺酶包括以下几种：（1）青霉素酶，主要水解青霉素类，能被克拉维酸抑制；（2）头孢菌素酶，能水解头孢菌素，但对青霉素水解作用很弱，     

抗金玉兰酶制剂(β-内酰胺酶)单克隆抗体的研制与特性分析

以金玉兰酶制剂(β-内酰胺酶)为抗原,制备出16株能稳定分泌抗β-内酰胺酶特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株.对其中的高效价单克隆抗体进行了特性和表位分析,结果显示,抗原金玉兰酶制剂分子表面至少有两个相同或相近的表位,且它们的距离较远,采用4F11、2H5或1B10中的任一株单抗,就能实现对β-内酰胺酶的双抗夹心ELISA检测;4F11、2H5和1B10的免疫球蛋白亚型鉴定都是IgG1,亲和力常数在1×107L/mol～1×1010L/mol之间;4F11的检测灵敏度为19 ng/mL.证实该3株单克隆抗体可用于研制检测牛奶中金玉兰酶制剂的免疫学试剂盒.     

牛奶中TEM1型β-内酰胺酶免疫胶体金试纸条的研制

牛奶中存在的抗生素残留是影响牛奶安全的重要因素之一,其来源主要是奶牛养殖过程中使用的β-内酰胺类抗生素,如青霉素簇药物.近来出现了一种声称能分解抗生素的"抗生素分解剂"-TEM1型β-内酰胺酶.该酶能将青霉素类药物降解,将"有抗奶"变为"无抗奶"[13].但该酶只是将青霉素类药物水解,而不能将其完全除去,水解产物仍存在于牛奶中.     

鸡大肠杆菌产生耐药性的原因分析及防制对策

1 菌种自身原因 大肠杆菌自身产生灭活抗菌药物的酶,分为水解酶(如β-内酰胺酶)和钝化酶.β-内酰胺酶能使青霉素类抗生素类和头孢菌素类抗生素的β-内酰胺环水解裂开而失活.钝化酶能使氨基糖苷类抗生素钝化使之不易与细菌体内的核蛋白结合,丧失其对蛋白质合成的抑制作用,从而导致耐药性的产生.     

β-内酰胺酶的分类与检测

综述了β-内酰胺酶尤其是超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的分类及检测方法进展。     

青霉素结合蛋白与产β-内酰胺酶细菌耐药性的研究进展

产β-内酰胺酶细菌是目前临床常见的致病菌。近年来,随着产β-内酰胺酶细菌不断的增多,如何能有效治疗产β-内酰胺酶细菌感染已成为临床治疗的重要问题。本文综述了青霉素结合蛋白(penicillin binding proteins,PBPs)与产β-内酰胺酶细菌的耐药机制及耐药性的关系,为预防和控制产β-内酰胺酶细菌感染提供参考依据。     

细菌产生耐药性的生物化学和遗传机理

1生物化学机理1．1细菌产生破坏抗生素结构的酶β-内酰胺酶是细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。由于β-内酰胺酶的产生，使其β-内酰胺环的酰胺键断裂而失去抗菌活性。该类酶可为染色体介导，也可为质粒介导。     

野生草食动物源奇异变形杆菌的耐药性分析

为了检测从野生草食动物临床标本中分离的62株奇异变形杆菌对23种抗菌药物的体外活性以及这些杆菌产生超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、金属β-内酰胺酶的情况,正确指导兽医临床合理使用抗菌药物。用API-20E对分离获得的菌株进行鉴定,双纸片协同试验和确证试验筛选超广谱β-内酰胺酶,纸片扩散法检测AmpC酶,改良Hodge试验检测金属β-内酰胺酶,药敏试验采用标准的纸片扩散法。实验证实分离获得的奇异变形杆菌产酶率为25.8%（16/62）,其中超广谱β-内酰胺酶为16.1%（10/62）,AmpC酶为9.7%（6/62）、金属β-内酰胺酶为0%（0/62）。头孢曲松钠、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、头孢噻肟钠、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星的敏感率大于80%。这说明产β-内酰胺酶的奇异变形杆菌在野生草食动物临床中占较大的比例,实验室需加强检测。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、亚胺培南、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星是治疗奇异变形杆菌感染的首选药物。     

牛奶中非法添加β-内酰胺酶的检测方法及研究现状

综述了非法添加β-内酰胺酶的原因、危害,以及检测牛奶中β-内酰胺酶的方法,包括微生物法、碘量法、头孢菌素显色法、酸度法和高效液相色谱法,指出快速检测试剂盒是今后检测牛奶中β-内酰胺酶的发展方向。     

大肠埃希氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制的研究进展

摘要：产β-内酰胺酶是大肠埃希氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。本文主要综述大肠埃希氏菌产ESBLs、AmpCβ-内酰胺酶的分类及各类型酶对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的机制。     

北京市生鲜牛乳中内源性β-内酰胺酶残留现状研究

从乳房内直接采集10家养殖场的生鲜牛乳593份,通过物理和生化方法检测β-内酰胺酶残留情况,并对β-内酰胺酶阳性样品中的主要细菌进行分离培养鉴定,同时测试菌株的药物敏感性,通过统计学方法分析内源性β-内酰胺酶的影响因素。试验结果表明:内源性β-内酰胺酶在生鲜乳中是存在的;正常、隐性乳房炎、休药期和乳房炎4组生鲜乳的阳性率分别是26.4%、30.9%、48.3%、31.1%,平均阳性率是28.7%;分离得到的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产酸克雷伯氏菌和链球菌等主要菌种,阳性率分别是65.9%、6.47%、5.9%、4.1%,其中大肠杆菌对3种β-内酰胺类抗生素(氨苄西林、青霉素G和头孢噻呋)的耐药率分别是42.15%、61.98%和40.5%,克雷伯菌对青霉素G和氨苄西林的耐药率分别是100%、60%,提示大肠杆菌和产酸克雷伯菌可能是合成内源性β-内酰胺酶的主要菌种;数据分析显示,菌落总数差异、隐性乳房炎阳性、休药期与否对于β-内酰胺酶阳性结果有显著影响,组间差异、乳房炎与否对于β-内酰胺酶阳性结果无显著影响,隐性乳腺炎阳性率与β-内酰胺酶阳性率无直接相关性。研究对指导健康奶牛养殖、保护奶农利益、指导生鲜乳监督执法、强化乳品质量安全具有重要意义。     

微生物管碟法测定牛奶中β-内酰胺酶的研究

使用管碟法,采用对青霉素类药物绝对敏感的标准茵株,利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,加入青霉素作为对照,通过比对加入β-内酰胺酶抑制刺与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物.微生物管碟法不需做阳性确证试验,技术较为成熟,可以适用于大批量检测鲜牛奶中是否添加解抗剂β-内酰胺酶.     

β-内酰胺酶抑制剂的研究进展

β-内酰胺酶抑制剂在对抗β-内酰胺酶耐药菌感染中发挥着重要作用,一直是药物化学领域的研究热点,但β-内酰胺酶变异体多元化及不利突变减缓了新型抑制剂的发展进程。诸多国内外相关文献在深入了解β-内酰胺酶水解机制及活性位点关键氨基酸作用特点的基础上,通过对已有化合物进行结构修饰或基于片段设计来筛选新的β-内酰胺酶抑制剂。详细介绍了β-内酰胺酶抑制剂的研究进展,旨在为进一步深入开展以增强化合物与酶关键氨基酸互作为基础的创新药物筛选提供帮助。     

生乳中β-内酰胺酶对抗生素检测的影响

国家标准中明确规定了生乳中不得检出抗生素,GB/T4789.27-2003中也规定了生乳中抗生素残留的检测方法,但目前使用较多的β-内酰胺酶,在一定程度上给检测工作带来了困难,掩盖了抗生素的残留量。本文从生乳中抗生素的残留来源、检测方法和β-内酰胺酶的现状、检测2个方面进行了论述。     

原料乳中外源性β-内酰胺酶快速检测方法的建立

β-内酰胺酶是乳及乳制品中的非法添加物,卫生部已发布相关检测方法,但是方法耗时,不利于乳制品企业应用。本文采用间接测定原理,即利用β-内酰胺酶在原料乳中降解青霉素G(青霉素钠)的能力,建立了外源性β-内酰胺酶快速检测方法,并确定了该方法的检出限、重复性和抗干扰性能。结果显示:该方法的检出限为4IU/mL,10组平行性实验结果符合度为100%;阴性样品的掺假添加检测结果均为阴性,说明抗干扰性能好;对阳性结果的样品进行定量验证,验证结果均为阳性,说明准确度高,且普遍性较好,是一种适应用于原料乳收购过程的快速检测方法。     

鸡大肠杆菌临床菌株耐药性的初步检测

用试管二倍稀释法检测5株临床分离鸡大肠杆菌对常见药物的耐药性,同时检测其是否产β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶。结果表明:5株临床鸡大肠杆菌对12种常见药物均产生不同程度耐药,其中两株山东分离株最严重,但均未发现产超广谱β-内酰胺酶菌株。     

鸭大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及药物敏感性分析

分析鸭大肠杆菌的耐药性与超广谱β-内酰胺酶的关系,为临床相关感染的治疗提供理论依据。采用CLSI推荐的初步筛选试验和表型确证试验方法,检测了临床分离的12株鸭大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的情况,用微量稀释法测定了环丙沙星等9种抗菌药对其的抗菌活性。临床分离的12株鸭大肠杆菌中,有4株产超广谱β-内酰胺酶,检出率为33%。产超广谱β-内酰胺酶的菌株对多种药物耐药,对氟喹诺酮类药物之间产生交叉耐药,对氟喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢菌素类产生多重耐药性,产酶菌的耐药性明显大于非产酶菌。产超广谱β-内酰胺酶是鸭大肠杆菌对抗菌药物产生耐药性的主要机制之一。     

微生物管碟法测定牛奶中β-内酰胺酶的研究

使用管碟法,采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株,利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,加入青霉索作为对照。通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。微生物管碟法不需做阳性确证试验。技术较为成熟,可以适用于大批量检测鲜牛奶中是否添加解抗剂β-内酰胺酶。     

牛乳中三聚氰胺和β-内酰胺酶快速检测方法的评估——双流向酶联免疫法

本试验用加标的方法制备合不同浓度三聚氰胺和β-内酰胺酶的还原乳,分别应用气相色谱-质谱/质谱法和SNAP双向酶联免疫法、SNAP双向酶联免疫间接法检测加标试样,评估SNAP双流向酶联免疫法检测牛乳中非法添加的三聚氰胺和β-内酰胺酶的精确性和灵敏度.结果表明,SNAP双流向酶联免疫法对三聚氰胺加标试样的检测限可以达到0.3ppm.最低检出限为0.1ppm,且还原乳中三聚氰胺浓度与SNAP读数仪读数呈正相关.SNAP双向酶联免疫间接检测法对β-内酰胺酶加标试样的检出限可以达到0.0005IU/mL和0.001IU/mL.SNAP流向酶联免疫法可以作为检测牛乳中非法添加的三聚氰胺和β-内酰胺酶的快速筛选方法,有较高的精确度和灵敏度,适用于奶户、奶站、乳品厂和实验室的快速筛选检测.     

荷兰重视鸡抗生素耐药问题

荷兰消费者协会近日发布新闻公报说,目前荷兰市场上来自集约化家禽养殖场的鸡肉中99％都存在抗生素耐药性风险,并希望引起荷兰政府和消费者的足够重视。根据荷兰消协调查结果,“风险”是指家禽养殖场的鸡感染了超广谱β-内酰胺酶阳性细菌。这种细菌能够分解青霉素类、头孢菌素类以及氨曲南等抗生素,对抗生素类药物具有耐药性。