猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

利用RT—PCR技术，用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因，克隆于DNA复制子载体pSCAl中，获得重组质粒pSCA／1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞，RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示，猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明，自杀性DNA疫苗pSCA／1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。     

塞姆利基森林病毒复制子DNA疫苗研究进展

甲病毒(Alphavirus)是披膜病毒科(Togavirus family)的成员,是单股、正链的RNA病毒,包括塞姆利基森林病毒(Semliki forest virus,SFV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SIN)和委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equineencephalitis virus,VEE)等30个成员.20世纪80年代末,随着这些病毒的cDNA感染性克隆的建立,相继开展了以甲病毒复制子为基础载体的研究,利用复制子特有的RNA复制酶提高翻译模板mRNA的量来实现高水平表达的目的,以改造出相应的甲病毒载体,已被广泛地应用于基因治疗和分子生物学的研究,并在疫苗领域中受到关注.     

"自杀性"DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍.     

双基因共表达的"自杀性"DNA疫苗载体的改造及其体外表达特性

PCR扩增西门利克森林病毒（SFV）亚基因组启动子26S序列及人工合成Linker，将其插入基于SFV复制子的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1的多克隆位点，获得舍2个26S启动子并能同时驱动双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA2。为了验证pSCA2的表达能力，PCR扩增绿色荧光蛋白基因EGFP和红色荧光蛋白基因DsRed2，分别插入pSCA2的2个26s启动子下游，获得EGFP和DsRed2双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗pSCA2-EGFP／RFP。将pSCA2-EGFP／RFP转染BHK-21细胞，转染后24h，可同时观察到被转染细胞发绿色荧光和红色荧光，证实EGFP和DsRed2均获得表达。     

兔病毒性出血症DNA疫苗研究进展

兔病毒性出血症是养兔业最重要的疾病之一,其发病急,致死率高,可对养兔业造成巨大的经济损失,在疫苗研究方面,由于传统组织灭活疫苗存在诸多缺点,迫切需要研制新型疫苗。本文主要从兔病毒性出血症DNA疫苗的构建、免疫佐剂、临床免疫途径以及临床使用的效果等方面进行简要介绍。     

DNA疫苗研究进展

核酸疫苗作为第3代新型疫苗,其制作简单、经济安全、易于贮存运输等优点已日益引起广泛重视。复制型或称“自杀性”DNA 疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗,具备高度的安全稳定性和对外源基因的高效表达。作者简述了常规DNA疫苗的发展过程和复制型DNA疫苗的研究进展。     

"自杀性"DNA疫苗研究进展

核酸疫苗又称基因疫苗、DNA疫苗 ,是从基因治疗研究领域发展起来的一种全新的免疫防制剂。核酸疫苗具有许多优点 ,但是同时也有其不可避免的缺陷 ,这就使人们不得不把注意力集中在对传统的核酸疫苗进行改造以保持其优点 ,避免其缺陷上。“自杀性”DNA疫苗(suicidalDNAvaccine)就是基于常规DNA疫苗和“自主复制型”RNA疫苗 (self replicatingRNAvaccine)基础上发展起来的一种新型疫苗 ,不仅具有常规DNA疫苗易制备、运输、保存等方面的优点 ,而且还有“自主复制型”RNA疫苗的安全性与有效性 ,这使得其成为目前核酸疫苗研究的热点。文章就“自杀性”DNA疫苗的载体、构建、作用机理、优点以及研究现状作了综述     

鹅源新城疫病毒HN基因“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究

为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因在该细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pc-HN)分别免疫鹅,结果表明,在诱导体液、细胞免疫和攻毒保护方面,pS-HN均优于pc-HN,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。     

猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2.用BamH Ⅰ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2.对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定.用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10 μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平.结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达.免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应.     

DNA疫苗简介

DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗,即将外源基因克隆到真核表达载体上,然后将重组的质粒直接注射到动物体内,使外源基因在活体内表达、产生抗原、激活机体免疫系统,引起免疫反应。这些质粒来源于可编码病毒抗原的DNA。疫苗中包含的DNA是通过大肠杆菌发酵过程得到。在接种的过程中,质粒在注射位点被细胞（例如皮肤或者肌肉中的树状突细胞）吸收,从而使编码病毒抗原的基因被转录。     

鸡球虫核酸疫苗的研究进展

鸡球虫病是一种重要的寄生原虫病,给养禽业带来严重的经济损失,鸡的病死率有时高达40%。传统的强毒苗、弱毒苗预防鸡球虫病因存在安全性差、免疫效果不理想等因素而得不到广泛应用;球虫基因工程疫苗是较为理想的疫苗,但免疫保护效果较差。核酸疫苗是近年发展起来的一种新型疫苗,因其安全、稳定、高效和易于制备而得到广泛研究,被称为第三代疫苗。随着球虫抗原基因的不断发现,鸡球虫核酸疫苗的研究引起人们的广泛关注。本文就近年来鸡球虫核酸疫苗的研究进展作一综述。     

小瓜虫抑动蛋白基因核酸疫苗制备

为防治水产养殖动物常见多发的小瓜虫病,本试验选取小瓜虫抑动蛋白基因,人工合成经物种优化后的抑动蛋白基因序列,以pVAX1为载体构建重组质粒,转入大肠杆菌DE3进行克隆表达。大量提取构建的重组质粒,通过肌肉注射免疫鱼体,注射剂量为125μg/尾,同时设立空载体对照组及空白对照组。首免后第4周进行二次加强免疫,分别于首免后第2、3、4周,二次加强免疫后第1、2、3、4、8、16周,抽样采集各组血液,分离血清,RT-PCR法检测抑动蛋白转录水平,同时检测血清抗体产生情况。二次加强免疫后第2周进行同居感染及人工感染试验,检测免疫保护效果。结果表明,质粒注射入鱼体后,所有抽查血液样本均检测到目的基因的转录;所有抽查免疫鱼血清样本均可以对小瓜虫幼虫产生制动效果,制动时间长达8周,空载体对照组和空白对照组无制动效果;同居感染及人工感染后,核酸疫苗免疫组存活率达到90%以上,而空载体组存活率为20%⁴0%,空白对照组全部死亡。表明构建的质粒作为核酸疫苗对小瓜虫病有较好的免疫保护效果,可显著降低死亡率。研究结果为小瓜虫核酸疫苗的研发与生产应用奠定了基础。     

鱼类的DNA疫苗

DNA疫苗是继减毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗和重组多肽疫苗之后的又一新型疫苗，比其他疫苗高效、安全且易于大量生产。本文主要对鱼用DNA疫苗的构建、作用机制、使用方法、使用效果及安全问题等方面研究近况作一综述，以促进我国对鱼用DNA疫苗进一步的研究和应用，从而加速我国水产养殖业的发展，并为深入研究和掌握鱼类的免疫防御机制提供一些依据。     

猪囊虫DNA疫苗pPCV的生物安全性

以猪囊虫DNA疫苗pPCV为研究对象,其生物安全性问题。将DNA疫苗pPCV以肌注方式免疫仔猪,分别于接种后1d、7d、4周、8周分离各组织,提取组织总DNA,利用PCR技术分析了质粒DNA在各组织的分布,以及与细胞基因组整合的可能性;同时采集环境样品,PCR法分析DNA疫苗上的CMV启动子基因、抗性基因和抗原基因在环境中发生转移和扩散的可能性。结果表明,在疫苗接种后第1天几乎所有组织都能检测到质粒DNA,随着时间的延续,仅在注射部位检测到质粒的存在,并且未发现质粒DNA整合入细胞基因组以及转化环境细菌。实验结果表明肌注DNA疫苗在注射部位以外组织中很快被清除,在注射部位组织及环境细菌中均未发现整合现象,因此认为该DNA疫苗对猪体和环境都是安全的。     

畜禽用DNA疫苗研究进展

近年来 ,许多畜禽病毒性传染病已不能依靠传统疫苗如灭活疫苗、弱毒疫苗等对其进行防治 ,ＤＮＡ疫苗的出现使得这一状况得到改善。编码病毒、细菌和寄生虫等不同种类抗原基因的质粒ＤＮＡ ,能够引起脊椎动物如哺乳类、鸟类和鱼类等多个物种产生强烈而持久的免疫反应。ＤＮＡ疫苗被人们称为继灭活疫苗和弱毒疫苗、亚单位疫苗之后的“第三代疫苗” ,具有广阔的发展前景。1　ＤＮＡ疫苗简介ＤＮＡ疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗 ,是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒ＤＮＡ(有时也可是ＲＮＡ) ,它可经一定途径进入动物体内 ,被动物宿主细胞…