流式细胞术进行倍性分析的原理和方法

 倍性鉴定在遗传育种中具有十分重要的作用,倍性鉴定的方法一直是育种研究的重要内容之一。由于细胞核G1期的DNA含量反应一个细胞的倍性,因此常常用DNA 含量来估计细胞的倍性。流式细胞术(Flow Cytometry)是一种快速准确鉴定倍性的方法,其最突出的特点是测量快速,可在短时间内完成测定,而且操作简单。该方法包括完整核DNA 的提取和荧光染色,然后根据它们的相对荧光强度来分析DNA的含量。综述了流式细胞分析法在DNA倍性分析中的应用原理和方法,并阐述了流式细胞技术的优缺点。     

利用流式细胞术鉴定桦木染色体倍性和DNA含量

基于流式细胞术（FCM）研究体系,构建能快速、准确鉴定桦木属植物倍性和测定DNA含量的研究体系,是测定不同桦木属植物倍性与基因组大小的有效方法。使用流式细胞术检测7种桦树属类物种,以物种不同生长状态（嫩叶、幼叶、成熟叶）为实验材料,不同存储方式（常温、冷藏和聚乙烯吡咯烷酮保存PVP）进行实验处理,对9种常用的裂解液进行筛选与优化。结果表明：桦木属植物DNA含量测定中,新鲜幼叶以1% PVP浸泡常温保存,并使用MgSO₄裂解液制备细胞核悬浮液上机效果最佳;桦木属植物中,基因组倍性依次为黑桦（(2.09 ± 0.04) Gb,8倍体） > 坚桦（(1.53 ± 0.08) Gb,6倍体） > 光皮桦（(0.87 ± 0.05) Gb,4倍体）=岳桦（(0.80 ± 0.07) Gb,4倍体） > 垂枝桦（(0.46 ± 0.03) Gb,2倍体）=河桦（(0.51 ± 0.01) Gb,2倍体）。因此,桦木属植物DNA倍性和DNA含量可以通过FCM研究体系进行测定,且3倍体（(0.66 ± 0.02) Gb）子代的鉴定结果表明光皮桦与河桦之间不存在生殖隔离。     

4种思茅松总DNA提取方法的比较

以思茅松(Pinuskesiyavarlangbianensis)针叶为材料,分别采取了简易提取法、高盐沉淀法、CTAB沉淀法和高盐低pH法提取基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶处理和RAPD3种方法对所提取的DNA样品进行检测,将它们在DNA产量、质量等方面的优缺点进行总结,并根据群体分子遗传学研究工作的实际特点确定了高盐沉淀法为最佳方法     

流式细胞术(FCM)在贝类倍性检测中的应用

对某种生物来说,体内细胞核内所含的ＤＮＡ量总是一定的。利用流式细胞仪（ＦＣＭ）可在短时间内准确测出细胞中ＤＮＡ的含量,鉴别有机体的倍性。作者系统地介绍了用流式细胞仪检测鲍鱼、牡蛎、扇贝等经济贝类倍性的方法,包括机械法、化学法、抽取血液法及固定贝样的制备法等。另外,还报道了实验中新发现的一些现象,如牡蛎嵌合体及诱导过程中的非整倍体等。     

流式细胞术在蔬菜倍性鉴定中的应用

倍性鉴定一直是蔬菜育种研究的重要内容之一,而流式细胞术(FCM)是一种快速准确鉴定蔬菜倍性的方法。综述了流式细胞术倍性鉴定的原理、操作步骤、优缺点及其在蔬菜作物上的应用进展。     

流式细胞术检测草莓倍性的方法优化

以草莓品种章姬、自育品种C1、二倍体野生种的叶片和根尖为试验材料,比较了2种提取液制备的细胞核悬浮液经流式细胞术检测的结果。结果表明:WPB提取液的效果较好,背景细胞碎片少,G0/G1峰清晰;叶片取材容易,杂质少,更适合作为试验材料。     

转基因玉米检测中4种DNA提取方法比较

以1%转基因玉米MON810粉末为材料,对比了酚-三氯甲烷法、PVP法、CTAB法、胍-三氯甲烷法4种经过调整和优化的DNA提取方法在转基因玉米检测中的效果差别,该4种方法均能获得可供进行进一步转基因成分检测分析的DNA,其中CTAB提取法获得的DNA质量相对较高。DNA提取过程中,略去蛋白酶、淀粉酶以及RNA酶的使用步骤,同样可获得质量良好的DNA用于转基因成分检测分析。在转基因玉米检测中,可针对样品情况选择和优化方法。     

应用流式细胞仪检测细胞凋亡的4种方法的比较

[目的]比较4种测定细胞凋亡方法的优缺点。[方法]应用流式细胞仪,分别采用PI单染法、Annexin V-FITC/PI复染法、罗丹明123染色法及Fluo-3染色法测定细胞凋亡。[结果]每种分析方法均有自己优势和不足,在检测过程中应进行多参数分析。[结论]该研究可为后续研究提供试验方法支持。     

分离缓冲液对水稻细胞核悬液DNA分辨率效应的比较

为制备高纯度水稻细胞核悬液供FACSCalibur流式细胞仪使用,选用6种细胞核分离缓冲液制备样品,对其DNA分辨率效果进行比较,Otto buffers和Marie’s nuclearisolation buffer表现分辨率较高,细胞G0/1峰产生的变异系数较低(CV分别为3.57%和3.41%);其中Otto buffers的组分较Marie’s nuclear isolation buffer简单、成本低,且能在正常室温条件下分析和保存。虽然在细胞核悬液中Tris-MgCl2buffer显示最低的CV值(3.19%),但产生较多的背景碎片。而其余3种缓冲液(Lysis buffer LB01,Galbraith’s buffer和Arumuganathan’sbuffer)的变异系数均较高(分别为4.75%,6.28%和6.73%)。结果表明采用Otto buffers分离缓冲液制备细胞核悬浮液,能实现苗期对水稻花粉植株的不同倍性(单倍体、二倍体、三倍体等)快速鉴定。     

九孔鲍不同器官DNA相对含量与细胞周期的分析

应用流式细胞术测定了30只九孔鲍Haliotis diversicolor supertexte不同器官DNA的相对含量,比较了各器官的细胞周期差异。结果表明,相同条件下生长的2龄九孔鲍足、上足触手、上足、头触角、外套膜、鳃和眼柄组织的DNA含量存在差异,其中头触角的DNA含量较外套膜组织低15．19％。从各器官细胞周期的时相比例分析看,九孔鲍各器官细胞的同步性较好,G1期时相比例都高于80％,其中鳃G1期比例最高,达到88．62％,头触角中G2／M期时相比例最高,达到11．18％,不同器官各细胞时相的比例存在差异。     

多疣壁虎DNA含量的测定

采用流式细胞术方法测定多疣壁虎(Gekko japonicus)DNA含量(C值).结果表明,多疣壁虎的C值为2.928 Pg·C-1,计算其基因组大小约为2.86×109bp,雌性和雄性壁虎的C值分别为2.934 Pg和2.923 Pg.数据统计经独立样本t检验性别问无显著差异.相同方法测定了另外两种爬行动物北草晰(Takydromusseptentrionalis)和原尾壁虎(Hemidactylus bowringii)的C值,分别是(2.10±0.03)Pg·C-1和(2.04 ±0.03)Pg·C-1.并计算其基因组大小,北草晰为2.054×109bp,原尾壁虎为1.995×109bp.     

果树核DNA提取、目的基因分离与克隆技术研究进展

介绍了果树核 DNA的提取及目的基因分离的研究方法 ,并对核 DNA的几种主要提取方法的优缺点进行比较 ,列出目前已分离的果树目的基因的名称和性质     

基于流式细胞术的5种鼠尾草基因组C值测定

[目的]测定5种鼠尾草植物C值,为鼠尾草属的基因组学、细胞生物学和种质资源研究提供参考依据.[方法]以斑花鼠尾草、深蓝鼠尾草、天蓝鼠尾草、耶路撒冷鼠尾草和腺毛鼠尾草的嫩叶为材料,以已知基因组的水稻日本晴为内标,建立适合于鼠尾草基因组的流式细胞术C值测定方法.[结果]经解离液筛选,LB01解离液为鼠尾草属植物的最佳选择,测定5种鼠尾草和对照水稻的变异系数(CV)均小于5.0%;细胞悬浮液在加入碘化丙啶(PI)染色5 min左右即可上机检测.斑花鼠尾草、深蓝鼠尾草、天蓝鼠尾草、耶路撒冷鼠尾草和腺毛鼠尾草的1C值分别为0.555、1.170、1.515、1.031和0.884 pg,存在显著差异(P<0.05).[结论]测定的5种鼠尾草C值可丰富鼠尾草属植物的C值库;基于流式细胞术建立的鼠尾草属植物C值测定方法可为该属其他植物的相关研究提供借鉴.     

流式细胞术在农业领域的应用

流式细胞术是一种能够对群体细胞进行单细胞水平的多个参数同时快速定量分析和分选的技术,其在农业领域的应用还有较大的发展空间。在动物研究中,流式细胞术的应用较为广泛,特别是在疫病检测、精子分选等方面。在植物研究中,由于细胞壁的存在,其应用一直受到限制。现有的研究主要包括倍型分析、DNA含量测定、染色体的鉴定和分选等。流式细胞术在微生物方面的研究起步相对较晚,在食品微生物中的应用仍然较为有限,而在病原微生物检测方面相对成熟。未来,流式细胞术与其他技术的结合将为农业领域的研究提供更为高效、便捷的工具、手段和平台。     

适合草莓倍性鉴定的流式细胞术方法的建立

比较了3种提取液制备红颊、川九1号、吉林草莓细胞核悬液流式细胞术检测效果,结果显示,提取液Ⅲ主峰粒子团清晰而集中,背景碎片少,试剂配方简单配制容易,且3种草莓材料倍性差异区分明显,优于其他2种提取液。对红颊草莓不同部位或不同来源的材料进行流式细胞术检测效果比较,结果表明,组培苗的检测效果明显优于大田试材,组培苗叶片因取材容易、主峰清晰、杂峰少、细胞碎片少而成为最佳试材。     

利用流式细胞术分析活化T淋巴细胞特性

用多克隆刺激剂PMA和离子霉素体外刺激小鼠脾脏细胞4 h后,检测T淋巴细胞膜表面CD 69分子的表达;用P I标记分析细胞内DNA含量的变化;阻断细胞因子分泌后,检测不同亚群T淋巴细胞内细胞因子的表达。利用CFSE标记细胞,刺激44 h后,检测T淋巴细胞的分裂情况。结果表明：刺激4 h后,绝大多数T淋巴细胞表面表达CD 69抗原。细胞周期分析结果也表明,S＋G2/M期细胞数量明显增多,G1期细胞数量减少。通过固定、破膜、标记等处理后,分别表达IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-12的T淋巴细胞均有不同程度的提高。另外,刺激44 h后,明显检测到T淋巴细胞的分裂。以上结果说明,利用流式细胞术可以从不同的角度检测活化T淋巴细胞的活性。