青钱柳低聚糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响

探讨青钱柳低聚糖(Cyclocarya paliurus oligosaccharide,CPO)对3T3-L1脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响。采用水提醇的方法得到青钱柳初多糖,经D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子交换树脂分离纯化,收集CPO作用于3T3-L1前脂肪细胞,并采用Q-PCR测定相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomes proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达。结果表明:CPO含有2个组分,其重均分子量分别为3 842 Da和1 481 Da;CPO在低浓度时能促进脂肪细胞的增殖,高浓度时能抑制脂肪细胞的增殖;对脂肪细胞分化的影响较小。CPO可抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达,与对照组比较差异有极显著性意义(P0.01)。表明高浓度的CPO抑制脂肪细胞增殖分化水平,其机制可能与抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关。     

芦笋提取物抗氧化和抑制3T3-L1前脂肪细胞分化活性研究

目的 研究芦笋提取物的抗氧化能力和抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的活性。方法 采用乙醇回流提取,通过酸碱处理,制备得到芦笋提取物;利用紫外分光光度法测定提取物中的酚酸含量（以没食子酸计）;采用DPPH法测定提取物清除自由基的活性;通过CCK8法及油红O染色法分别检测芦笋提取物对3T3-L1前脂肪细胞存活率及分化率的影响。结果 芦笋提取物中以没食子酸计的酚酸含量为0.5308 mg/mg;测得提取物清除自由基活性强弱与剂量成正相关,当其浓度达到2 mg/mL时,其对DPPH的清除率可达89.68%;在10~200μg/mL的测定浓度范围内,提取物对3T3-L1细胞生存率无明显影响,对3T3-L1细胞的分化有明显抑制作用,且呈剂量依赖性。结论 芦笋提取物具有较好清除自由基的活性,且活性强弱呈剂量依赖关系;芦笋提取物具有抑制前脂肪细胞分化的能力,且随剂量升高而增大。     

银杏叶提取物中三种黄酮对3T3-L1细胞成脂代谢的影响

银杏叶提取物(EGB)包含了两大类活性成分——黄酮类和萜内酯类,并具有多种药用价值。本研究以3T3-L1细胞为研究对象,通过MTT法、油红O染色法和荧光定量PCR法研究银杏叶提取物中三种黄酮对脂肪细胞的成脂代谢影响。结果显示,山奈酚、槲皮素和异鼠李素在较高浓度下(100μmol/L)对成熟脂肪细胞的细胞毒性较为显著,分别是44%、26%和14%。山奈酚和槲皮素在100μmol/L时对前脂肪细胞的增殖抑制作用为分别27%和19%,异鼠李素对前脂肪细胞的增殖抑制效果小于5%,影响较小,以上数值均有统计学意义。油红O染色半定量结果表明异鼠李素,山奈酚和槲皮素在相同浓度下(50μmol/L)对脂质积累的抑制率分别为43%、29%和17%,且具有统计学意义。荧光定量PCR结果表明三种银杏黄酮在较高浓度下能够显著抑制细胞分化终末期的关键转录因子PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c的表达,进而影响其下游与脂质合成相关的酶和蛋白的转录水平表达。综上,三种银杏黄酮对3T3-L1细胞的主要影响方式是对成熟脂肪的细胞毒性以及对脂肪细胞分化和脂质积累的抑制。     

不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪合成相关基因转录表达的影响

【目的】诱导3T3-L1细胞分化为3T3-L1脂肪细胞,研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪合成相关基因转录表达的影响。【方法】利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0(对照组)、0.2、0.5、1 μmol/L生物素处理,分别在12 h、24 h与48 h时检测细胞上清液中PK mRNA、GLUT-4 mRNA、FAS mRNA及ACC1 mRNA相对表达量。【结果】在试验12 h时:各试验组GLUT-4、PK、ACC1 mRNA相对表达量均极显著(P＜0.01)高于对照组,1 μmol/L组与0.5 μmol/L组FAS mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组与0.2 μmol/L组;在试验24 h时:1 μmol/L组GLUT-4 mRNA与PK mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组,0.2 μmol/L组与0.5 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组;在试验48 h时:1 μmol/L组GLUT-4 mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L 组PK mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组,0.5 μmol/L组FAS mRNA相对表达量极显著(P＜0.05)高于1 μmol/L组,1 μmol/L组FAS mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于其它组。【结论】生物素的添加可以提升脂肪细胞GLUT-4、PK、FAS与ACC1 mRNA相对表达量,且当以1 μmol/L浓度作用时对GLUT-4、PK与ACC1提升效果最佳,以0.5 μmol/L浓度作用时对FAS提升效果最佳。     

甘薯sporamin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化和增殖的影响

 【目的】探讨甘薯sporamin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化与增殖的影响,为开发预防和治疗肥胖、糖尿病的保健食品提供理论依据。【方法】采用硫酸铵沉淀、离子交换、凝胶过滤层析的方法对‘55-2’甘薯中的sporamin蛋白进行分离纯化。然后,以黄连素为阳性对照,用不同浓度sporamin（0、0.025、0.125、0.250、0.500、1.000 mg?ml-1）处理3T3-L1前脂肪细胞。采用油红O染色和比色定量检测细胞内脂肪生成及细胞分化程度,以MTT法检测细胞的增殖。【结果】经离子交换、凝胶层析可纯化出高纯度的sporamin蛋白A和B（相对分子量分别为31 kD和22 kD）。与空白相比,用不同浓度的sporamin蛋白处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制。当sporamin蛋白浓度增至0.500 mg?ml-1时,脂滴生成量明显减少,洗脱液吸光度值降至最低为0.35（P＜0.05）。此外,高浓度的sporamin蛋白能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,且随着处理时间延长抑制效果更加明显(P＜0.05).【结论】甘薯sporamin蛋白能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化和增殖,具有潜在的减肥作用。     

血管紧张素Ⅱ对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并用油红O染色法和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinuceotid,NADH)氧化速率法检测了3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的累积和甘油磷酸脱氢酶(glycerol phosphatedehydrogenase,GPDH)的活性.结果表明,100 nmol/L的AngⅡ可显著增大3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质累积和GPDH活性(P＜0.01),外源性AngⅡ可促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞中脂类合成和储存.     

血管紧张素II对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为探讨血管紧张素II（angiotensin II,AngII）对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并用油红O染色法和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸（nicotinamide-adenine dinuceotid,NADH）氧化速率法检测了3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的累积和甘油磷酸脱氢酶（glycerol phosphatedehydrogenase,GPDH）的活性。结果表明,100 nmol/L的AngII可显著增大3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质累积和GPDH活性（P〈0.01）,外源性AngII可促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞中脂类合成和储存。     

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞分化中脂代谢基因mRNA表达的影响

采用RT-PCR技术,分别研究短链和长链脂肪酸及P38 MAPK通路抑制剂SB20358对小鼠前体脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达的影响及其调控机制.结果表明:短链脂肪酸可提高PPARγ2和C/EBPα mRNA表达量(P<0.05),而长链脂肪酸上调PPARγ2、C/EBPα、FAS、SREBP-1c mRNA表达量(P<0.05),但脂肪酸对TGH表达量影响不显著(P>0.05);当P38MAPK抑制剂存在时,PPARγ2、FAS和SREBP-1c mRNA表达量显著下降(P<0.05),而C/EBPα和TGH表达量变化不显著(P>0.05).表明脂肪酸可通过P38MAPK通路促进PPARγ2增量表达从而促进小鼠前体脂肪细胞分化.     

PPARγ对脂类代谢和脂肪细胞分化的调控

 过氧化物酶体增殖物激活受体γ是一种配体活化的核转录因子,具有多种生物学效应。除能调节脂肪细胞分化、脂代谢,细胞增殖、细胞周期外,还能调控细胞因子生成,增强机体对胰岛素的敏感性等作用。主要就PPARγ对脂类代谢和脂肪细胞分化调控作用的最新研究进展进行综述。     

沉默SOCS3对TNF-α诱导3T3-L1前体脂肪细胞凋亡的抑制作用

【目的】运用si RNA沉默小鼠前体脂肪细胞3T3-L1的细胞信号负调控因子3基因(SOCS3),探讨SOCS3在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导3T3-L1细胞凋亡中的作用。【方法】体外培养3T3-L1细胞,用0,20,40,60,80,100,150,200 ng/mL TNF-α处理细胞24 h后,观察细胞凋亡情况。利用脂质体LipofectamineTM2000,用化学合成的SOCS3小干扰RNA(si RNA)转染3T3-L1细胞,用100 ng/mL TNF-α刺激24 h,荧光显微镜下观察细胞凋亡的变化,RT-PCR检测SOCS3、c-myc和survivinmRNA的表达情况。【结果】SOCS3 si RNA抑制了3T3-L1细胞中SOCS3 mRNA的表达(P<0.05)。与空白对照组相比,SOCS3 si RNA组的SOCS3 mRNA表达量极显著减少,c-myc和survivinmRNA的表达水平极显著或显著升高,而脂质体组和阴性对照组无显著差异。【结论】体外试验结果证明,靶向抑制SOCS3基因表达可以有效抑制TNF-α诱导的3T3-L1细胞凋亡。     

蔷薇红景天提取物不同极性部位体外抗氧化活性研究

[目的]通过体外试验初步研究蔷薇红景天（RhodiolaroseaL.）提取物的抗氧化活性。[方法]采用有机溶剂萃取法将蔷薇红景天提取物分为乙酸乙酯相、正丁醇相和水相3个不同极性部位,以还原能力及清除羟自由基（.OH）、超氧阴离子自由基（O2-.）和亚硝酸根离子（NO2-）为评价指标初步研究其体外抗氧化活性。[结果]蔷薇红景天提取物的不同极性部位均有抗氧化活性,其抗氧化效果因反应体系不同而不同,且不同极性部位的抗氧化活性有差异。乙酸乙酯相和正丁醇相的还原能力及清除O2-.和.OH的能力均强于水相,而水相对NO2-的清除效果好于乙酸乙酯相和正丁醇相。[结论]蔷薇红景天提取物具有较强的抗氧化活性,可作为天然抗氧化剂的良好来源。     

蔷薇红景天总黄酮的提取及分析

[目的]为红景天的综合利用提供参考。[方法]以红景天干药材为材料,用不同浓度(50%、70%、85%)的乙醇提取总黄酮,确定总黄酮的最佳提取条件。以枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、短小杆菌、大肠杆菌为供试菌种,对红景天乙醇提取物的抑菌效力进行测定。[结果]用50%乙醇提取红景天24 h左右时,其总黄酮提取率最高,为1.309%;红景天中的总黄酮仅对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有抑制作用,抑菌圈直径分别为21.25、6.33 mm;红景天乙醇粗提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌都有抑制作用,抑菌圈直径分别为10.41、10.48、12.07 mm。[结论]红景天中可能存在对枯草芽孢杆菌、短小杆菌起抑制作用的成分。     

不同温度对蔷薇红景天种子萌发的影响

[目的]通过温度调控提高野生蔷薇红景天（Rhodiola rosea L．）种子发芽率。[方法]对野生蔷薇红景天种子进行不同时间4℃低温预处理,采用不同温度梯度进行恒温培养和变温培养,研究不同温度对野生蔷薇红景天种子发芽率的影响。[结果]种子最大发芽率出现在4℃低温预处理35d,30℃恒温培养条件下,为58．89％;而CK发芽率最低,仅为10．00％。[结论]在红景天种子萌发前采用低温预处理种子,有利于打破种子休眠和促进种子萌发;红景天种子萌发对温度非常敏感,培养温度过高或过低均会抑制野生蔷薇红景天种子萌发;而变温条件更有利于种子萌发。     

高压提取红景天根中红景天苷工艺研究

[目的]优化红景天中红景天苷的提取工艺。[方法]用密闭升温产生的高压提取红景天根中的红景天苷,高压液相色谱法测定红景天苷的含量,单因素试验选择提取溶剂,正交试验确定最佳提取工艺,并与超声波法进行比较。[结果]提取溶剂为水时,红景天苷的得率最高。提取时间对红景天苷得率的影响最大,其次是提取温度,两者为决定性因素,然后是料液比、浸泡时间。高压法最佳提取工艺条件下红景天苷的得率高于超声波法,避免了超声波及微波对人体的危害,成本低,更适用于工业化生产。[结论]水作提取溶剂时,高压法提取红景天苷的最佳工艺为:料液比1∶16(g/ml),浸泡时间1.0 h,提取温度140℃,提取时间30 min。     

The Differentiation-and Proliferation-Inhibitory Effects of Sporamin from Sweet Potato in 3T3-L1 Preadipocytes

The aim of this study was to investigate the effect of different concentrations of sporamin on the differentiation and proliferation of 3T3-LI preadipocytes, providing the theoretical basis for the development of food to treat obesity and diabetes, The isolation and purification of sporamin from sweet potato species 55-2 were performed by ammonium sulphate precipitation in combination with ion-exchange and gel filtration chromatography. With berberine as a positive control, different concentrations ofsporamin （0.000, 0.125, 0.025, 0.250, 0.500, and 1.000 mg·mL^-1 were used to treat 3T3-L1 preadipocytes. Intracellular fat accumulation and the degree of adipogenesis were quantified using Oil Red O staining and colorimetry, Preadipocytes differentiation was measured by 3（4,5-dimethylthiazolyl-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） spectrophotometric assay. Two sporamin proteins, which were separated into sporamin A （31 kD） and sporamin B （22 kD）, could be purified by ion-exchange and gel filtration chromatography. After being treated by different concentrations of sporamin, the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited, compared with the positive control. When the sporamin solution concentration was 0.500 mg mL-1, the accumulation of lipid droplets within the cells was significantly decreased and the optical density （OD） value of the solution from destained Oil Red O reached to 0.35, which was the lowest value （P〈 0.05）. The proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited by treating at higher sporamin concentrations. In addition, the inhibitory effect was more obvious with the prolonged treatment time （P〈 0.05）. The differentiation and proliferation of 3T3-L1 preadipocytes could be inhibited significantly by the addition of higher concentration sporamin. It was, therefore, suggested that the sporamin was potentially effective for weight loss.     

白花曼陀罗和白屈菜水浸液杀菌效果研究

[目的]研究药用植物白花曼陀罗（Datura metel L.）和白屈菜（Chelidonium majus L.）对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌水浸液的杀菌效果。[方法]取当年生成熟白花曼陀罗和白屈菜植株,用沸水浸提法制成药液,以双黄连口服液为对照,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行杀菌研究。[结果]白花曼陀罗对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均无明显抑杀作用;白屈菜对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑杀作用,但对金黄色葡萄球菌抑杀作用比对大肠杆菌的更强。[结论]白屈菜水浸液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有明显的抑杀作用,而白花曼陀罗水浸液无杀菌作用。