紫花苜蓿高频植株再生体系的建立

研究了不同品种间愈伤组织诱导及植株再生的差异.结果表明,MS+2,4-D(2.0 mg/L)+6-BA(0.5mg/L)+蔗糖0.3%+琼脂0.08%,MS+KT(0.5 mg/L)+NAA(0.01 mg/L)+蔗糖0.3%+琼脂0.08%,1/2MS+NAA(0.01 mg/L)+蔗糖0.15%+琼脂0.08%分别是紫花苜蓿的愈伤组织诱导、芽、根分化的适宜诱导培养基.     

紫花苜蓿组织培养及其再生植株

以SH为基本培养基,分别添加NAA 0.5～3 mg/l;KT0.1～1.0 mg/l的激素,对紫花苜蓿无菌苗子叶和下胚轴进行离体培养,所产生的愈伤组织可在原诱导培养基上直接分化出芽,其中下胚轴愈伤组织的平均诱导频率,分化频率均高于子叶.     

大白菜高效稳定遗传转化体系的建立

以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS＋2mg／L6-BA＋1mg／LNAA＋2mg／LAgN03＋300mg／L Car＋10mg／LHyg,共培养基pH5．2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0．5,侵染时间为10min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。     

紫花苜蓿的愈伤组织诱导及组织培养

紫花苜蓿以其品质优良、易于栽培的特点,在饲料牧草中占有重要地位。本实验对苜蓿子叶、下胚轴的愈伤组织诱导进行了研究。结果表明,MS+2,4 D(2mg/L)、MS+6 BA(2mg/L)、1/2MS+NAA(0 5mg/L)分别是紫花苜蓿的愈伤组织、芽、根的适宜诱导培养基。     

紫花苜蓿下胚轴高频离体再生体系的建立

【目的】以北极星、阿尔刚金、皇后2000及国产紫花苜蓿4个苜蓿品种下胚轴为外植体,建立其稳定、高效的离体培养再生体系,为基因转化改良苜蓿性状奠定基础。【方法】研究了种子预处理方法、培养基、基因型以及蔗糖质量浓度对苜蓿下胚轴分化特性的影响。【结果】低温4℃预处理有利于提高苜蓿下胚轴愈伤组织的出愈率和绿苗分化率;其最佳诱导激素组合为"MS+1.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖"和"MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+5.5 g/L琼脂+30 g/L蔗糖";愈伤组织分化的最佳培养基为"MS+0.3 mg/L6-BA+3.0 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+5.5 g/L琼脂+50 g/L蔗糖";最佳蔗糖质量浓度为50 g/L;4个紫花苜蓿品种愈伤组织诱导率的差异不大,但分化特性有较大差异,分化率由高到低依次为北极星、阿尔刚金、皇后2000和国产紫花。【结论】不同的种子预处理方法对4种紫花苜蓿品种的分化率均有一定影响,3种处理中以4℃下浸泡2 h处理的分化率最高,与其他处理间的差异达显著水平(P<0.05)。不同激素组合是影响紫花苜蓿下胚轴愈伤组织诱导率和分化率的主要原因,不同激素组合处理间的差异均达到显著水平(P<0.05),2,4-D与6-BA配合对紫花苜蓿下胚轴愈伤组织的诱导效果较好,分化培养基中高质量浓度的NAA,不利于愈伤组织的分化;不同基因型对分化率有显著影响(P<0.05),而不同蔗糖质量浓度对分化率的影响不显著(P>0.05)。说明其对离体培养再生体系的影响作用与处理方法、培养基、基因型相比是次要的。     

油菜子叶和下胚轴再生体系及其遗传转化的研究进展

对油菜子叶和下胚轴快繁体系及其遗传转化的研究进展进行了概述,并从基因型、激素及添加物、外植体状态、预培养和共培养、抗生素筛选等方面讨论了影响子叶和下胚轴快繁体系及其转化的因素。     

两个茄子品种高效再生体系的建立

【目的】建立茄子高效再生体系,为遗传转化、种质创新研究奠定基础.【方法】以‘兰杂一号’和‘兰杂二号’两个茄子品种为试材,通过对不同质量浓度外源激素组合的筛选,研究基因型、外植体类型、苗龄、外源生长调节剂组合对不定芽分化与伸长的影响.【结果】‘兰杂二号’的不定芽分化率显著高于‘兰杂一号’;子叶的不定芽分化能力强于下胚轴和茎段;11~13d苗龄的外植体不定芽分化频率较高;‘兰杂一号’和‘兰杂二号’分别在6-BA/IBA为10∶1和30∶1的配比下,分化率达最高,分别为89.58%、94.97%;在6-BA/IBA为1∶2配比下有利于两个品种不定芽伸长,伸长率分别高达91.67%、96.88%.【结论】适宜‘兰杂一号’和‘兰杂二号’不定芽分化的培养基分别为MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA和MS+3.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA;适宜不定芽伸长的培养基为MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA;最佳生根培养基为1/2 MS培养基.     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄B04子叶盘和下胚轴切段为外植体,研究了不同种类和浓度的细胞分裂素(ZT、6-BA和KT)和生长素(IAAI、BA和NAA)组合及附加物AgNO3对外植体不定芽诱导的影响。结果表明,细胞分裂素ZT的不定芽诱导效果明显优于6-BA和KT,KT诱导效果最差;生长素IAA的不定芽诱导效果优于IBA和NAA;在不同的激素组合中,不定芽诱导率最高的培养基为MS 2.0 mg/L ZT 0.2 mg/L IAA。再生芽在MS 0.1mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

新疆大叶紫花苜蓿(Medicago sativa.L)子叶、下胚轴、根的植株再生

随着植物抗逆性研究和植物转基因技术的发展,通过异源目的基因转化培育耐盐碱苜蓿品种的研究已引起人们的关注,植物受体高频再生体系的建立是异源转化高效的基础。选取新疆大叶紫花苜蓿种子萌发5～7d无菌苗的子叶、下胚轴及根为外植体,诱导愈伤培养基为MS 2,4-D0.1～3.0mg/L(8种不同水平)或MS 2,4-D2.0mg/L KT0.01～0.5mg/L(10种不同水平),诱导芽培养基为MS 6-BA0.5mg/L NAA0.05mg/L,生根培养基为MS。结果表明,外植体在MS 2,4-D2.0mg/L KT0.2mg/L培养基中能够产生状态较好可再分化的愈伤组织,子叶、下胚轴、根的平均出愈率分别为93.1%、100%、100%。愈伤组织在MS 6-BA0.5mg/L NAA0.05mg/L培养基中培养40～80d中均可分化芽,子叶、下胚轴、根的芽平均分化率为50%、78%、50%,将2cm以上的芽转入MS培养基中诱导生根,14d后,生根的小植株炼苗移入花土中,成活率达90%以上。子叶、下胚轴、根在该体系中均能获得再生植株,根也是一种较好的植株再生材料,以根为外植体进行植株再生的研究报道还较少。     

6个紫花苜蓿栽培品种高效再生体系的建立

建立高频的紫花苜蓿再生体系,为采用基因工程技术定向改良紫花苜蓿品种奠定基础。以中国6个紫花苜蓿栽培品种的子叶、下胚轴、叶片为外植体,研究不同外源激素、基因型对紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导培养及再生的影响。结果表明:新疆大叶苜蓿品种叶片胚性愈伤组织诱导率、分化率及出苗率最佳,分别为95.0%、72.7%和40.0%。最佳诱导培养基为改良SH培养基+2.0mg.L-1 2,4-D+0.25mg.L-1 KT;最佳分化培养基及出苗培养基为MS。此外,还确定生根培养基中以茎段基部蘸取100mg.L-1 IBA以及添加7.5g.L-1蔗糖可提高生根率。     

高效农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的建立

以农艺性状优良的紫花苜蓿品种“德宝”为转化受体,通过对外植体选择、bialaphos筛选浓度、预培养与共培养时间等因素进行优化,成功建立了高效苜蓿组织培养再生体系和农杆菌介导的遗传转化体系。试验结果表明,子叶作为外植体愈伤组织诱导频率最高,可达97%;bialaphos作为筛选标记,获得转化愈伤组织与转基因植株的最佳筛选浓度为2.5 mg/L;子叶在农杆菌浸染前的预培养对于对于抗性愈伤组织产生频率甚为关键,可由低于5%(未经过预培养)提高至30%以上(预培养3 d);子叶与农杆菌的共培养时间以3 d为最佳。按最佳条件转化共计获得100余株T0代抗性株系。PCR检测其中30个抗性株系,全部表现为阳性。对抗性植株和野生型植株叶片喷施5‰除草剂Basta溶液,阳性植株全部表现为除草剂抗性,进一步证实了建立的紫花苜蓿转化体系是高效、可靠的。     

蝴蝶兰高效再生体系与遗传转化体系的建立

为建立蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)再生体系和遗传转化体系,对蝴蝶兰进行人工授粉,成熟后将胚播种于诱导培养基上诱导原球茎或不定芽。探讨外源调节剂的种类及浓度,并筛选卡那霉素浓度以及除菌剂的种类及浓度。结果表明:当6-BA浓度为5 mg·L~(~(-1)),NAA浓度为1 mg·L~(-1)时,原球茎的诱导效率最高。当6-BA浓度为1.5mg·L~(-1),同时添加0.5g·L~(-1)活性炭和40mL·L~(-1)椰汁时,壮苗效果最佳。卡那霉素的筛选浓度为4mg·L~(-1),除菌剂的种类为阿莫西林克拉维酸钾(7∶1),除菌浓度为100mg·L~(-1)。     

紫花苜蓿茎尖离体再生体系的建立

以紫花苜蓿的成熟种子为外植体，以组培苗茎尖为材料建立了紫花苜蓿离体再生体系。研究结果显示：紫花苜蓿茎尖分化增殖的最佳培养基为MS＋6-BAl．5mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1平均增殖系数为6．25；最适生根培养基为MS＋IBA0．05mg·L-1，平均侧根数为28．5条，生根率达到93．5％。该再生体系的建立为紫花苜蓿遗传转化后转基因植株的快速繁殖奠定了基础。     

紫花苜蓿两种再生体系的优化及比较

紫花苜蓿高频再生体系的建立有助于促进其遗传转化的研究。以陇东、阿尔冈金以及甘农4号紫花苜蓿为实验材料,比较了体细胞胚胎和丛生芽再生途径对于紫花苜蓿再生周期及频率的影响。并通过利用不同外植体、不同植物生长调节剂配比,以实现对这两种再生途径的进一步优化。实验结果表明：在三个苜蓿品种中,甘农4号的再生效果较好,下胚轴的再生频率较高,在愈伤诱导阶段添加2 mg/L 2,4-D、1 mg/L KT,胚状体诱导阶段添加1 mg/L KT、0.5 mg/L NAA可以达到较好的再生效果;在培养基中添加1 mg/L 6-BA、1 mg/L TDZ,则直接诱导丛生芽的效果最好;对比发现,丛生芽再生途径显示出较强的优越性,其再生时间仅10周,是紫花苜蓿再生体系建立的一种可选方式。     

3种苜蓿不同部位皂苷含量的测定研究

[目的]研究3种苜蓿不同部位中皂苷含量的测定。[方法]采用比色法测定了江苏地区苜蓿属3种植物紫花苜蓿（包括5种栽培品种）、天蓝苜蓿和南苜蓿不同部位的总皂苷含量。[结果]紫花苜蓿根中皂苷含量（1.39%）明显高于其他2种苜蓿根中皂苷含量;天蓝苜蓿和南苜蓿茎中皂苷含量差异不明显（RSD=2.4%）,略低于紫花苜蓿茎中皂苷含量（0.583%）;天蓝苜蓿叶中皂苷含量最低（0.623%）。综合3种不同部位的皂苷含量,根中皂苷的平均含量达到1.335%,明显大于茎（0.596%）和叶（0.655%）中皂苷含量。[结论]该研究为进一步开发苜蓿属植物资源提供了一定的理论依据。     

苜蓿皂苷研究概述

综合近年来国内外有关苜蓿皂苷的研究,从苜蓿皂苷特征、分离提取、生理功能、应用前景等方面对其进行了详细介绍,为今后苜蓿皂苷资源的深入研究和开发利用提供一定的参考和借鉴作用。     

马铃薯高效遗传转化受体体系的建立

以4个马铃薯(Solanum tuberosum L.)栽培种为材料,对其叶片、茎段和试管薯3种外植体再生体系进行研究,筛选与优化马铃薯遗传转化的受体材料和条件,建立马铃薯高效遗传转化受体体系。结果表明:茎段较叶片愈伤组织形成速度更快、诱导率更高。其中,‘陇薯3号’愈伤组织分化效果最佳,分化率和出苗率分别达100%和175.0%。在添加1.0mg·L~(-1)ZT+1.0mg·L~(-1) IAA+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.2mg·L~(-1) GA的MS培养基中,4个品种的试管薯均可通过直接分化再生系统分化成苗。其中,以‘青薯168’试管薯薯片出苗率最高(110.0%)。验证了试管薯作为转化受体,受基因型的影响小,转化周期短,是马铃薯遗传转化的最佳材料,进一步建立试管薯繁育及再生体系,为马铃薯遗传转化奠定良好的基础。     

辣椒子叶高效再生体系的建立

以保加利亚尖椒(Capsicum annuum L.Bulgaria pointed pepper)为试验材料,探讨了有机成分、激素组合、辣椒幼苗提取物、AgNO3、脱落酸和亚精胺等因素对子叶离体培养的影响.结果表明,辣椒幼苗汁液对不定芽的诱导分化及伸长有明显的促进作用,添加脱落酸和亚精胺可促进不定芽的伸长;采用优化的培养基培养,不定芽诱导率达到100%,不定芽伸长率达83%,生根率达到100%.在此基础上建立了保加利亚尖椒的子叶离体高效再生体系.     

农杆菌介导紫花苜蓿子叶遗传转化的影响因素研究

以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选,用RG-2质粒（合VP7基因和卡那霉素抗性基因）和农杆菌（EHA101、EHA105）构建重组质粒,对无菌苗和重组质粒进行共培养,研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明,菌株EHA105对紫花苜蓿的转化率达4％,重悬菌液的0D60。以0．3～0．5为宜,农杆菌侵染时间以10～12min较好;PCR检测结果表明,37株卡那霉素抗性植株中30株为阳性,说明VP7外源基因已整合到受体植物基因组中。