建立黑龙江省农作物品种DNA指纹库技术体系探讨

随着科学技术的进步,黑龙江省农作物品种区试审定鉴定技术水平也在不断提高,已经形成了比较完整的农作物品种区试审定、抗病鉴定、品质分析、抗冷害等鉴定技术评价体系,为保证黑龙江省农作物品种区域试验审定工作顺利进行和农业增产起到了积极的作用。但是,近两年随着参试品种数量的不断增加,假冒伪劣品种参加试验的现象时有发生。     

玉米品种DNA指纹数据库构建的标准化规范

为了保证玉米品种DNA指纹库构建的标准化,从建库标记、检测平台、试剂、样品、评估程序、数据整合、模式库、扩展库、随机盲测等九个方面进行了全面的规范:(1)通过对不同分子标记的比较,确定SSR标记作为建库标记;(2)通过对不同DNA指纹检测方法的比较,确定毛细管电泳结合多色荧光检测方法作为DNA指纹片段分析方法;(3)规范了DNA、引物、Taq酶等试剂质量,以保证数据的稳定性和可重复性;(4)规范了样品来源、样品类型及分析样品数量;(5)确定评估品种的数量及引物的取舍标准;(6)为解决不同来源DNA指纹数据的有效整合问题,提出了固定一套核心引物、提供标准品种、提供标准DNA、确定引物等位基因BIN、规定对异常带型数据处理方式、规定数据的编码方式等6个解决策略;(7)规范了构建模式库的材料名单、来源及构建方式;(8)规范了构建扩展库的材料来源及构建方式;(9)进行数据库数据随机盲测,以评估入库数据质量.以上规范将为不同单位合作开展大规模的DNA指纹库构建研究奠定基础.     

DNA指纹图谱技术及其在作物品种资源中的应用

随着各种新型DNA分子标记的出现,带动了DNA指纹图谱技术的快速发展。本文简要阐述了几种常见DNA指纹鉴定技术,如限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,简称RFLP)、随机扩增多态性DNA(randomamplifiedpolymorphicDNA,简称RAPD)、扩增片段长度多态性(am-plifiedfragmentlengthpolymorphism,简称AFLP)、简单重复序列或微卫星标记(simplesequencerepeat,简称SSR)、内部简单重复序列(inter-simplesequencerepeat,简称ISSR)和单核苷酸多态性(singlenucleotidepoly-morphisms,简称SNPs)等的基本原理、在技术上的优缺点及其在作物品种资源中的应用,包括品种的鉴定、纯度的检测、品种亲缘关系与分类的研究及品种专利权的正当维护等。同时,对DNA指纹图谱技术在应用中的存在问题及相应的解决途径进行了简单的讨论,如目前DNA的提取方法与育种应用的大规模群体不相适应和大多数DNA指纹图谱检测技术仍比较繁琐,限制了该技术在育种中的大规模应用等。     

VF6.0在农作物品种数据库模糊聚类分析中的应用

根据农业科学研究的特点，结合模糊聚类分析方法在豇豆育种实践中的应用，使用VF6.0编程着重介绍了模糊聚类分析对农作物品种数据库的处理。     

农作物品种责任简论

农作物种子经营,不仅涉及品种责任、种子责任、种子包装责任、种子标签责任和咨询服务责任等多种责任,而且还涉及品种选育者、品种推广者、种子生产者、种子生产商、种子销售商和咨询服务者等多种主体。按照常理,不同的责任应当分别由不同的主体承担,但是,在司法实践中,几乎所有与种子经营有关的责任都由种子经营者承担,特别是将品种责任与种子责任混为一谈。     

烟草基因组DNA的高效提取与SSR应用

采用改进的CTAB高盐沉淀法,以烟草的幼嫩叶、冰冻叶、花为材料提取基因组DNA,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和SSR分析.结果表明,此方法简便有效,从3种材料中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,A260 nm/A280 nm的比值均在1.7～1.9之间,无降解现象,蛋白质、多糖类等去除较彻底.其SSR分析条带清晰,多态性好.研究结果为进一步开展烟草遗传多样性的研究和指纹图谱的构建奠定了基础.     

浅析新形势下如何抓好农作物品种管理

《中华人民共和国种子法》和《贵州省农作物种子管理条例》的实施,为各级种子管理部门搞好农作物品种管理提供了法律依据,根据近几年种子管理工作的情况,就如何搞好农作物品种的管理工作,提出一些粗浅的看法,仅供参考.     

DNA指纹技术在河南省玉米品种区试管理中的应用

近年来,河南省玉米品种数量不断增加,目前生产上推广品种达300多个,每年参加河南省玉米区试的品种达100多个.出现了品种多、乱、杂现象.DNA指纹技术是从分子水平上为每一个品种确定一个身份证,克服一品多名和一名多品的现象,因此开展玉米品种DNA指纹鉴定、构建玉米品种标准DNA指纹库,对规范种业市场以及对玉米新品种权进行保护具有重要意义.     

DNA指纹鉴定玉米品种技术要点

NY/T1432—2007《玉米品种鉴定DNA指纹方法》是玉米（Zea mays L．）品种DNA指纹鉴定的标准方法。该方法适用于玉米自交系和单交种的品种真实性和品种纯度鉴定。该技术以PCR为基础,具有可靠性强、重复性高、多态性丰富、呈共显性遗传、易于分析等特点,可用来高效、准确地检测生物体中的遗传变异。该标准的发布实施。一方面给种子管理部门、品种保护部门以及广大的种子生产者、     

利用SRAP标记构建18个木薯品种的DNA指纹图谱

利用SRAP标记,选用36对多态性较好的引物组合,对18个木薯品种进行分析鉴定,扩增出320个位点,其中多态性位点235个,多态性比率达73.4%,平均每对引物组合可产生8.9个位点和6.5个多态性位点;235个多态性位点采用非加权组平均法(UPGMA)进行聚类分析,以遗传相似系数0.734为阈值,可将18份供试材料分为4组;选用2对多态性引物Me1-Em5和Me24-Em10,初步构建了18份木薯品种的指纹图谱,根据条带的有无转换为0、1二进制编码形成数字指纹,每个品种拥有唯一的数字指纹区别于其他品种,置信概率达到99.999%。结果表明,采用SRAP标记建立的指纹图谱适用于木薯品种的分类和鉴定。     

中国棉花主栽品种DNA指纹数据库初步构建研究

 基于多重PCR（Polymerase chain reaction）与毛细管五色荧光检测系统,利用36对核心引物构建了138份棉花主栽品种DNA指纹数据库,采用棉花DNA指纹数据库软件管理系统进行数据统计与分析。36对引物在138份材料中共扩增出143个多态性等位位点,每对引物的等位位点数为2～8个,平均每对引物扩增出3.97个多态性等位位点。抽查的101个主栽品种仅45.6%的位点完全纯合,中棉所系列品种61.6%的位点完全纯合。存在5种非纯合位点表现形式,以2种基因型混杂所占比例最大,其中以5∶1的混杂类型最多。4种类型的同名品种指纹比对分析表明,品种内的遗传变异度均在0～2个差异位点。初步建立了高通量的棉花DNA指纹检测与数据分析平台,提出了不同品种间的差异判别标准。     

新疆主要玉米杂交种及亲本DNA指纹数据库构建

通过对新疆目前推广的8个主要玉米杂交种及其亲本自交系的RAPD分析,初步构建了新疆玉米DNA指纹图谱及数据库,探索了RAPD技术在玉米种质鉴定和纯度分析中的应用.结果表明,8个玉米杂交种及其亲本自交系的指纹图谱多态性丰富,仅用一个引物即可以将24个材料完全区分开,表明了该指纹数据库在玉米品种鉴定与种子纯度分析中应用的可行性.     

农作物品种责任简论

农作物种子经营,不仅涉及品种责任、种子责任、种子包装责任、种子标签责任和咨询服务责任等多种责任,而且还涉及品种选育者、品种推广者、种子生产者、种子生产商、种子销售商和咨询服务者等多种主体。按照常理,不同的责任应当分别由不同的主体承担,不应什么责任都由种子经营者承担。但是,在司法     

大麦申请保护品种DNA指纹图谱构建

本研究采用农业行业标准《大麦品种鉴定技术规程SSR分子标记法》(NY/T 2466-2013)中的28个标记对142份大麦申请品种进行DNA指纹采集和遗传多样性分析。28个标记共检测到196个等位变异和314个基因型,平均值分别为7和11.2,PIC值范围为0.140 6～0.790 4,平均值为0.585 3。聚类结果显示,142份材料可以完全区分,遗传距离范围为0.031 4～0.974 7,平均值为0.617 2。本研究分别以字符串形式和条形码格式表示142份大麦品种的DNA指纹图谱,每一份品种的指纹都具有唯一性,指纹数据可作为大麦新品种保护受理审查的参考依据和技术支撑,有利于大麦育种创新和新品种推广。     

新陆早棉花品种DNA指纹图谱的构建及遗传多样性分析

以新疆2013年前审定的51个新陆早常规棉花品种为材料, 从5000对SSR引物中筛选出多态性高、稳定性好、且定位在棉花26条染色体上(每条染色体上选择2~3对)的75对核心引物,检测到多态性位点226个, 每个标记检测到的基因型位点数在2~12之间, 平均为3.01个;引物多态信息量(PIC)值介于0.0799~0.8752之间, 平均值为0.6624。结果显示, 在51份新陆早棉花常规品种中, 可利用特征引物将21份品种一次性区分开。利用40对引物可以完全区分开新陆早51份常规品种, 并构建供试品种的指纹图谱。同时利用NTSYS-pcV2.10软件聚类分析表明, 51个新陆早棉花品种遗传相似系数变化范围为0.4269~0.9873, 平均值为0.7071, 说明新陆早棉花品种之间遗传多样性较狭窄;遗传相似系数矩阵和聚类分析将51个新陆早品种分为4大类型, 与原品种选育系谱高度吻合。     

DNA指纹图谱技术在我省种子管理中的应用

近年来,伴随着种子市场的全面开放和经营主体的多元化,我省种子管理工作面临着许多新情况,为提高行业管理能力和水平,我省大胆探索,率先将DNA指纹图谱技术应用于“两杂”种子的品种管理、质量管理和产权纠纷中,攻克了困扰种子管理工作多年的技术难题。四川省种子站与四川农业大学水稻研究所、四川省农科院作物所合作,分别构建了杂交水稻和杂交玉米主推品种的DNA指纹图谱数据库,为鉴定“两杂”作物品种真实性、检测品种纯度和鉴别品种亲缘关系和转基因种子检测奠定了基础。     

北京市农作物品种转让活动组织小麦转让品种观摩

2011年6月8日北京种子协会联合北京市平谷区种业服务中心,举办北京市平谷区冬小麦品种田间考察及北京种子协会转让拍卖小麦品种展示活动,天津、河北小麦种子经销商60余人到会考     

浅谈农作物主导品种推介制度

近年来，各地纷纷兴起农作物主导品种推介工作，笔者认为其为我国种子市场化条件下出现的新生事物，应当予以扶持、完善并形成制度，加快良种推广的速度和提升良种推广的规模效益。     

瓠瓜类型砧木品种根系DNA提取方法比较及指纹图谱构建

为利用瓠瓜砧木根系提取DNA进行品种真实性分子检测,本研究比较了CTAB法(方法 1)、SDS简易法(方法 2)、SDS法(方法 3)、TPS法(方法 4)、快速制备法(方法 5)和简易快速制备法(方法 6)提取瓠瓜类型砧木根系基因组DNA的效果。研究结果表明,SDS简易法(方法 2)提取瓠瓜根系总DNA质量好,蛋白污染小,PCR扩增条带清晰稳定,满足瓠瓜根系DNA分子检测的要求。利用该法提取的‘甬砧1号’、‘甬砧3号’、‘甬砧4号’、‘甬砧5号’、‘神通力’和‘京欣砧1号’的根系DNA可重复上述6份瓠瓜材料幼叶DNA的指纹图谱结果(01001,10010,10101,01010,00110和00000)。新增加‘华欣948’、‘5756’、‘1715’和‘56YZ2’等4份瓠瓜砧木材料,通过根系DNA构建的指纹图谱分别是00110、01011、11000和01000。10份瓠瓜类型砧木品种根系DNA指纹图谱出现概率为1/13 500,图谱出现概率低,表明可以利用根系取代叶片提取DNA,用于构建指纹图谱进行品种鉴定与保护。     

利用SNP芯片构建我国冬油菜参试品种DNA指纹图谱

以2016?2017年度187份国家油菜参试品种及2015?2016年度33份续试品种为材料, 利用油菜60K Illumina Infinium SNP (single nucleotide polymorphism)芯片进行基因分型, 得到52 157个SNP标记。按照分型为AA和BB频率不为0、最小基因型频率(minor freq)大于0.05、SNP得率(call freq)大于0.80、样品缺失率小于5%及分型明晰的要求筛选出5374个SNP标记。这些标记的PIC (polymorphism information content)均值为0.27, PIC值大于0.25的SNP标记占55.94%。其中有5143个SNP标记能对应到A1~A10、C1~C9连锁群上, 且比较全面地覆盖了油菜的基因组。用PowerMarker、MEGA等软件对224份样品的5374个标记分析, 结果显示: (1)设置8个品种重复2次点样对照, 得出Infinium芯片的技术误差为0.36%, 与Illumina公司公布的0.1%的技术误差十分接近。(2) NJ (Neighbor-joining)聚类分析中, 97.86%的区试品种的相似系数小于95%、87.88%的续试品种相似系数大于95%, 相似系数95%可作为品种特异性及一致性鉴定的阈值。这5374个SNP标记在油菜全基因组上分布均匀、多态性高、区分度好, 可用于甘蓝型油菜品种特异性和一致性的鉴定分析及甘蓝型油菜品种DNA指纹图谱构建的研究。