青麻总DNA的简易提取和鉴定

青麻成熟组织中酚类、黄酮类等次生代谢物较多,要从中提取出高纯度的DNA比较困难.本研究利用黄酮等次生代谢物未大量合成的青麻幼芽为材料,采用简化CTAB法提取青麻总DNA,可以获得高纯度、高产量的DNA.经实验鉴定,DNA纯度符合分子遗传实验要求.该方法快速、简便,也适于其它麻类作物总DNA提取.     

一种快速提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法

在SDS法的基础上,以富含多糖、多酚等次生代谢物质的香蕉叶片为材料,通过选择性添加适量5 mol/L KAc(pH4.8)或不同体积无水乙醇分别提取香蕉叶片总核酸、总RNA(不含DNA)和总DNA(不含RNA)。结果表明:不添加KAc的可提取到总核酸;添加1/3体积和2/3体积的KAc得到总RNA,添加1/3体积无水乙醇处理得到总DNA。该结果获得一种简单、快速,能在1次实验中添加不同试剂提取香蕉叶片总核酸、总RNA和总DNA的新方法。     

苎麻野生近缘种植物基因组DNA提取技术的改进

用CTAB法提取悬铃叶苎麻基因组 DNA.针对悬铃叶苎麻中多糖、多酚、果胶和黄酮类次生代谢物含量高的特点,在裂解液中加入一定量的PVP 和β-巯基乙醇,采用一步抽提一步纯化的方法,并对传统乙醇沉淀法进行改进,使其更利于对基因组 DNA 进行浓缩和纯化.在获得高质量 DNA 的同时,大大节约了提取时间和程序.经实验验证,该方法提取的 DNA 能满足酶切、连接等高精度分子实验要求.     

几种麻类作物及其近缘种植物总DNA的提取与鉴定

采用Pich和 Schubert 1993年发展的SDS方法，经适当改进后，成功地从苎麻、红麻、黄麻、青麻四种麻类作物及其近缘种植物中提取了细胞总DNA，并对其得率、质量和纯度进行了鉴定。所得的DNA可进行限制性内切酶消化、PCR扩增和RAPD分子标记。本研究发展的这一快速、简便、适于麻类作物及其近缘种植物的总DNA提取方法，将有助于在DNA分子水平研究麻类种质资源的遗传多样性。     

苎麻野生近缘种植物基因组DNA提取技术的改进

用CTAB法提取悬铃叶苎麻基因组DNA。针对悬铃叶苎麻中多糖、多酚、果胶和黄酮类次生代谢物含量高的特点，在裂解液中加入一定量的PVP和β-巯基乙醇，采用一步抽提一步纯化的方法，并对传统乙醇沉淀法进行改进，使其更利于对基因组DNA进行浓缩和纯化。在获得高质量DNA的同时，大大节约了提取时间和程序。经实验验证，该方法提取的DNA能满足酶切、连接等高精度分子实验要求。     

悬铃叶苎麻基因组DNA的六种提取方法比较

悬铃叶苎麻(Boehmeria tricuspis(Hance)Makino)是一种多年生草本植物,含有较多的多酚、多糖等次生代谢物质,这些次生代谢物质能够与基因组DNA结合从而影响其DNA的提取。本文以悬铃叶苎麻幼嫩叶片为试材,采用6种方法提取基因组DNA,并比较其提取效果,以期寻找到正确的、快速的、能够得到高质量的基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度仪、SSR-PCR扩增和限制性内切酶酶切等方法检测不同方法提取的全基因组DNA的质量和纯度。结果显示:采用方法 1(Tian Gen试剂盒)提取的溶液中含有杂质,DNA含量较少;方法 2(常规CTAB法)提取的DNA含有较多杂质;方法 3(硅胶-CTAB法)和方法 4(酚抽提-CTAB法)没有提取到DNA;方法 5(高盐预先去杂-CTAB法)得到的基因组DNA溶液含有较多的蛋白质或盐;方法 6(葡萄糖预先去杂-CTAB法)是唯一能获得高质量的基因组DNA,能够满足PCR、限制性内切酶酶切等分子实验对DNA的要求。本研究找到了一种通用、简单易行,成本低且安全的去除植物DNA提取过程中多糖等杂质的方法,为悬铃叶苎麻后续的其他分子生物学的研究奠定了基础。     

玉米DNA的小量快速提取

以玉米的幼叶为实验材料,用小量快速法提取玉米总DNA.提取的DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,结果发现DNA质量较好,所得的DNA可用于RAPD和DNA酶切等技术.此法具有提取速度快、DNA质量好和经济实用等优点,为玉米及其他植物DNA的提取提供了一个快速、简便的途径。     

高多糖含量植物--莲DNA的提取方法

提出一种适用于莲等高多糖含量植物叶片组织的DNA提取方法.用CTAB-free 缓冲液对叶片组织匀浆洗涤后再进行DNA提取,可有效克服多糖等次生代谢物质对提取的干扰,所得DNA的分子量达49kb,OD260/OD280比值为1.87±0.06,产率为230～320μg/(g*鲜重),可用于RAPD分析.     

CTAB法提取红麻总DNA技术优化与ISSR和SRAP扩增效果

红麻基因组总DNA的提取纯度,关系到新型分子标记ISSR、SRAP的PCR扩增效果。经反复实验,对CTAB法提取红麻总DNA技术进行了改进,即采集足量的红麻嫩叶、提取时加入β-巯基乙醇、提取过程中使用2.5%CTAB、最后用预冷的无水乙醇沉淀DNA。OD260/OD280比值检测结果为平均1.824,而且DNA得率也较高,证明用此法提取的DNA能完全满足ISSR和SRAP分析的要求和获得较理想的效果,本文还讨论了高质量DNA提取应注意的有关技术环节。     

两种辣木DNA提取方法比较

以辣木嫩叶为材料,分别通过改良CTAB和试剂盒法提取7个品系辣木的总DNA,结果表明,试剂盒法提取的辣木DNA在琼脂糖凝胶电泳中条带清晰,DNA纯度高,完整性好,且操作简单,快速,满足分子标记中模板的需要,解决了辣木提取中蛋白杂质多的问题。因此,在辣木分子标记实验中,选择试剂盒法提取辣木总DNA是较为适宜的。     

马铃薯S病毒的RT-PCR检测

根据马铃薯S病毒(PVS)的外壳蛋白基因序列,设计合成了一对寡核苷酸引物。以感染PVS的马铃薯组织和健康的组织为材料,对提取植物总RNA的两种方法进行了比较,并对总RNA的提取方法进行改进,获得了纯度较高,完整性较好的总RNA。以此为模板,进行cDNA合成及PCR扩增,从感病组织扩增得到一段长度约642bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康组织无此扩增产物。从而建立了检测PVS快速灵敏简便的新方法,在基因水平上为PVS的检测提供了新手段。     

花生DNA快速简便提取方法的研究

在花生新鲜针叶和干叶ＤＮＡ提取过程中,应用ｐＨ值较低,无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质,其中加入２％的β－巯基乙醇可有效地防止次生代谢物质使ＤＮＡ变色。提取出的ＤＮＡ样品产率在９２．６～２１６．３１ｎｇ／ｍｇ．ｆｗ,ＤＮＡ质量和纯度较高,２６０ｎｍ／２８０ｎｍ光密度比值在１．８～１．９之间。所得ＤＮＡ可直接用于限制性内切酶酶切,并可用于随机引物ＰＣＲ扩增。该方法为花生分子生物学研究提供基础。     

橡胶林土壤微生物2种DNA提取方法的比较

比较了橡胶林土壤微生物CTAB-SDS提取法和SDS提取法的效果。结果表明,2种提取方法均获得约 23.1kb的DNA片段,2种提取方法在颜色、提取量和纯度上存在较大差异。CTAB-SDS提取法提取DNA的纯度较好,不需要纯化可以直接用于PCR扩增、酶切等后续操作;SDS提取法提取的纯度低,不能直接用于PCR扩增。2种方法都适合橡胶林土壤DNA的提取,如果要求获得纯度高的DNA,CTAB-SDS提取法是最佳选择。橡胶林土壤微生物DNA的提取,推荐使用CTAB-SDS提取法。     

大麻基因组DNA提取方法的比较与优化

以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：SDS法＞CTAB法＞高盐低pH法＞碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：高盐低pH法＞SDS法＞CTAB法＞碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜.     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难.CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度.为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题.     

改良CTAB法用于提取红麻成熟叶片高质量DNA的研究

红麻处于光合高峰期的成熟叶片中的次生物质含量很高,给DNA的提取造成很大的困难。CTAB法能有效去除多糖杂质,但普通CTAB法用于红麻的DNA提取效果很不理想,为使CTAB法能更好地用于红麻的DNA提取,我们对此方法进行了改进,通过前处理除去大部分的杂质,减小了后续操作的难度。为了验证前处理是否会损失DNA,研究了液氮研磨对材料细胞的破碎程度问题,还讨论了DNA提取中的其它一些相关问题。     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18SRNA的亮度比约为2：1,D260／D280达1．9且得率较高,为380．5μg·g^-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

一种叶片直接用作PCR扩增的新方法及其应用

以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作PCR扩增的模板,并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高,重复性好,对待测植株的损伤小等特点,它无需高速冷冻离心机及相应的提取DNA的试剂,故试验成本低,检测所需的时间短。尤其是群体较大时,此种方法更是显得经济有效,利用此种方法在1 d内可检测300份样品。     

花生不同部位对提取DNA的影响

采用CTAB法和SDS法，分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA，所提DNA片段长度都在21 kb以上；同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异，产率差异极其显著，从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高，CTAB法中产率从128．5～498．5ng／mg，SDS法中产率从225．O～542．6ng／mg；两种方法中，相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著，产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA，采用RAPD方法，对19个花生品种的基因组进行扩增，结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。