玉米灰斑病研究方法：Ⅰ玉米灰斑病菌孢子的培养

为了明确玉米灰斑病菌的产孢条件,将玉米灰斑病菌接种到马铃薯蔗糖（PSA）、燕麦番茄碳酸钙（OTCA）、玉米叶粉碳酸钙（MLPCA）、燕麦粉（OA）、粗面粉(CWPA)等5种培养基上,于25 ℃下培养,测定该菌生长速度、产孢时间和产孢量。结果表明,菌丝在上述培养基上生长速度均较慢,每天平均生长0.33 mm左右,其中以在OA和PSA上生长速度相对较快。基于上述结果,构建了玉米灰斑病菌孢子培养的二级分段培养法,即将菌丝块接种于加有10～15粒直径为5 mm玻璃珠的马铃薯蔗糖（PS）液体培养基三角瓶里,在25 ℃,180 r/min条件下振荡培养15 d,形成菌丝悬液,再取菌丝悬浮液涂布在MLPCA 培养基上,避光培养13 d左右,可获得大量供接种的分生孢子。长期光照促进菌丝生长,不利于孢子的形成,而长期黑暗不利于菌丝生长,但有利于孢子的形成。     

MB和CMC液体培养基对禾谷镰孢产孢水平的影响

禾谷镰孢分生孢子定量接种是研究作物抗禾谷镰孢的必要手段?本试验利用绿豆(mung bean, MB)与羧甲基纤维素(carboxylmethyl cellulose, CMC)液体培养基在相同条件下培养禾谷镰孢, 比较两种培养基对禾谷镰孢产孢效率的影响; 并用两种培养基诱导分生孢子制成相同浓度孢子悬浮液, 对75个玉米家系进行人工接种鉴定, 检测不同培养基所产分生孢子致病性差异?结果表明, CMC培养基诱导分生孢子增长率(k2=1.125)大于MB培养基诱导增长率(k1=0.844)?在培养第14天, MB培养基诱导获得的分生孢子平均浓度为2.51×105个/mL, CMC培养基诱导的为3.62×105个/mL, 比MB培养基诱导多44.22%?用两种培养基诱生的孢子进行田间接种, 玉米穗腐病发病程度无明显差异?CMC培养基具有产孢快?孢子浓度高的优点, 是一种适宜禾谷镰孢分生孢子诱生的高效液体培养基?     

硫酸铜对柑橘和山麦冬炭疽病菌的影响

在PDA培养基培养条件下,研究不同浓度的CuSO4对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌生长状况、产孢量、孢子萌发率的影响。试验结果表明,与对照组相比,1 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响最大,完全抑制了这两种病菌的生长和产孢;0.2 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响也非常明显,不仅较大程度地抑制了这两种病菌的生长和产孢,而且使这两种孢子的萌发率均低于19%;0.1 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响较大;0.02 g/mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的影响较小。由此可以初步得出,0.2 g/200mL CuSO4 5H2O对柑橘炭疽病菌和山麦冬炭疽病菌的抑制效果显著,可以作为抑制这两种病菌的临界浓度。     

利用响应面法优化非致病性尖孢镰刀菌FJAT-9290固体发酵培养基

为优化生防菌非致病性尖孢镰刀菌菌株FJAT-9290的固体发酵培养基配方,以农业副产物——微生物发酵床养猪垫料和麸皮作为基础培养基,采用单因素试验考察麦粒、蔗糖和硝酸钠对菌株产孢量的影响,通过Box-Benhnken试验设计和响应面分析法,建立以产孢量为响应值的多元二次回归模型,确定菌株固体发酵的最优培养基配方。结果表明,建立的模型差异极显著(P0.0001),可以用该模型来拟合试验。菌株FJAT-9290在垫料和麸皮质量比17:3的基础培养基上,其他成分的最佳添加量分别为麦粒39.14%、蔗糖2.97%和硝酸钠0.30%,采用该优化组合的菌株平均产孢量可达2.48×10~8孢子/g。响应面结果也表明,各因素对产孢量的影响结果排序为麦粒蔗糖硝酸钠,其中蔗糖和硝酸钠两因素的交互作用最显著。     

稻曲病菌薄壁分生孢子制备的影响因素分析

本文研究了培养基、温度、振荡速度等因素对稻曲病菌Ustilaginoidea virens薄壁分生孢子产孢量的影响。结果表明,稻曲病菌薄壁分生孢子在培养第7天基本达到最大孢子量;该菌最适宜产孢的培养基为马铃薯煮汁,在煮汁中添加蔗糖可大幅提高产孢量;适宜的产孢温度为26~28℃;静止培养不利于产孢,振荡培养有利于产孢,并表现为转速越高产孢量越多;光照条件对产孢量没有影响。     

应用均匀设计法筛选稗草病原菌产孢最佳配方培养基

 筛选生防菌最佳产孢培养基是高效、大量生产生防菌孢子的基础。应用均匀设计法结合二次多项式回归分析,从众多因素中筛选出稗草病原菌弯孢菌(Curvularia lunata)和互格交链孢菌(Alternaria alternata)最佳产孢培养基组分,建立多元二次回归数学模型。弯孢菌最佳产孢组分为胡萝卜、芹菜、欧芹、水芹、莴苣、蔗糖和Vc;互格交链孢菌最佳产孢组分为胡萝卜、芹菜、水芹、莴苣和蔗糖。根据回归模型计算理论(拟和)产孢值。比较实测产孢量和理论产孢值,结果表明,稗草病原菌的实测产孢量和回归模型拟合产孢值非常接近,拟合误差小。说明采用均匀设计法从众多因素中筛选培养基最佳成分是可行的。     

假隔链格孢SF-193的产孢特性及其分生孢子对空心莲子草的致病力

为了探明SF-193的产孢特性,选取了8种产孢培养基,研究分别在自然光、黑光灯和黑暗的条件下对SF-193产孢的影响程度。试验结果表明,在黑光灯连续照射11d后,SF-193在PCA、CA、SNA、Czapek和组织煎汁5种培养基上有少量分生孢子产生,而在其他3种琼脂培养基上不产生分生孢子。PCA培养基中马铃薯与胡萝卜比例为1：5时,SF-193在9d后产孢量最大,10×10倍显微观察约60个孢子/视野;当CA培养基中的胡萝卜含量提高至80%左右时, SF-193在3d后达到最大产孢量,10×10倍显微观察约300个孢子/视野。研究了黑光灯照度与胡萝卜含量对SF-193产孢的影响。结果表明,在黑光灯照度为195～210lx、胡萝卜含量约为0.8g/ml时,SF-193在25℃培养6d后产孢量最大,约为6.5×10^5个孢子/ml。SF-193的分生孢子在田间对空心莲子草的致病力测定结果表明,经孢子浓度10^4个孢子/ml处理后,空心莲子草的病情指数为67.7。     

瓶式平板培养制备稻曲病菌薄壁分生孢子

利用三角瓶装纳马铃薯琼脂培养基制备稻曲病菌薄壁分生孢子。结果发现,瓶装培养基的体积与产孢量无关。各菌株在瓶式培养平板上均能正常形成后代孢子。瓶式培养比常规培养皿平板培养具有更高的产孢效率。产孢平板上产生的孢子收取后,菌落继续培养,新形成的孢子数量大幅下降。由于三角瓶能高效避免污染,因而认为瓶式培养是制备稻曲病菌薄壁分生孢子的理想技术。     

顶孢霉Ahy1营养条件的初步研究

顶孢霉(Acremonium hansfordii)在PDA、淀粉琼脂、查彼氏、萨氏培养基和萨氏蛋黄培养基上培养,萨氏培养基和萨氏蛋黄培养基有利于菌落生长和产孢,菌落直径和产孢量显著高于其他处理,分别为7.77 cm和7.07 cm,19.02×103、25.87×103个孢子;葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、肌醇、甘油、麦芽糖8种碳源中葡萄糖、蔗糖有利于菌落的生长和产孢,菌落直径分别为7.73 cm和7.60 cm,产孢量分别为25.96×103、25.79×103个,显著高于其他处理;蛋白胨、硝酸钠、硝酸钾、氯化铵、硝酸铵、尿素6种氮源中,蛋白胨有利于菌落的生长和产孢,菌落直径为7.60 cm,产孢量为25.91×103个,显著高于其他处理。     

三种杀菌剂对牡丹红斑病病菌分生孢子形成和萌发的影响

为筛选防治牡丹红斑病的杀菌剂,采用涂布平板法测定了多菌灵、戊唑醇、嘧菌酯对病菌分生孢子形成和萌发的影响。结果表明:3种杀菌剂对病菌孢子萌发均有很强的抑制作用,浓度越高,抑制作用越强,以嘧菌酯最强,1μg/mL浓度处理其孢子萌发率低于10%,5μg/mL处理孢子完全不能萌发;3种杀菌剂均可显著抑制病菌芽管的伸长生长,1μg/mL处理下孢子萌发24 h后芽管长度均不足10μm,5μg/mL处理对芽管伸长的抑制率达到90%;3种杀菌剂可使分生孢子及芽管发生畸形,多菌灵的致畸作用最强,0.1μg/mL处理即表现出明显的致畸作用,而戊唑醇致畸作用较弱;嘧菌酯和戊唑醇对病菌产孢结构形成和分生孢子产生数量有强烈的抑制作用,0.05μg/mL浓度下即完全不产孢,但多菌灵在0.05μg/mL浓度下则促进病菌产孢结构形成及产孢量增加。表明3种杀菌剂均可作为保护剂在病害发生前期喷施,但在流行期应尽量使用嘧菌酯和戊唑醇,以减少病菌再侵染数量。     

花生褐斑病菌培养基筛选及生理性状和致病性研究

 花生褐斑病菌(Cercospora arachidicola Hori)在花生秆培养基上的产孢量优于前人推荐的3种培养基。在6种供试培养基中,菌丝生长量则以前人推荐的花生叶斑病尾孢菌培养基最大。培养过程中,不同光照处理对病菌生长和产孢不敏感;不同温度处理产孢量有显著差异。2%葡萄糖液有促进孢子萌发作用。病菌经人工培养不失其致病性。     

青海省樱桃叶斑病菌生物学特性及室内药剂毒力测定

为明确青海省樱桃叶斑病菌链格孢Alternaria alternata的生物学特性及筛选出对其防效最佳的药剂,本研究采用菌丝生长速率法和孢子计数法研究了不同培养条件对该病原菌菌丝生长和产孢量的影响,并用菌丝生长抑制率法对9种杀菌剂进行室内毒力测定。结果表明,菌丝生长和产孢的最适培养基分别为马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基,最适温度为25℃, 最适氮源为蛋白胨,最适碳源分别为肌醇和乳糖,最适pH分别为6~8和6~7,24 h持续黑暗处理更有利于菌丝生长和产孢。9种化学药剂对病原菌均有不同程度的抑制作用,其中250 g/L嘧菌酯悬浮剂抑菌效果最好,EC50为1.258 mg/L。该研究结果可为青海省樱桃叶斑病的防治提供理论依据。     

三类杀菌剂对牡丹腔孢叶斑病菌生长和发育的影响

腔孢叶斑病是牡丹生产上出现的一种新病害,近几年在洛阳及菏泽牡丹种植园危害越来越重。为了筛选防治该病的化学药剂,本文采用菌丝生长速率法测定了3类8种杀菌剂对病菌菌丝生长的抑制活性,采用涂布平板法测定了多菌灵、戊唑醇及嘧菌酯对病菌孢子萌发和芽管伸长的影响,并在含药平板上测定了3种药剂对病菌产孢量的作用。结果表明:三唑类药剂对病菌菌丝生长的毒力最强,EC50为0.020~0.096μg/mL,且戊唑醇对孢子萌发和产孢也有很强的抑制活性,在0.1μg/mL时孢子即不能萌发;甲氧基丙烯酸酯类药剂对菌丝生长的毒力较强,EC50为0.408~0.939μg/mL,嘧菌酯对芽管伸长和产孢量均表现出很强的抑制活性,10μg/mL时,芽管几乎不再伸长,对产孢的抑制率可达到99%以上;而苯并咪唑类药剂对菌丝生长的毒力较弱,EC50为12.167~30.104μg/mL,多菌灵对孢子萌发的抑制作用弱,100μg/mL时孢子萌发率仍达到90%以上,对产孢的抑制作用也较弱,为63.02%。根据药剂对病菌生长和发育各阶段的影响,生产中应采用适宜的施用方法:戊唑醇和嘧菌酯可作为保护剂在病害发生前期喷施,也可作为治疗剂在病害发生流行期应用,但为防止抗药性菌株的出现,两者应当轮换或复配使用。     

禾长蠕孢菌稗草专化型固体发酵产孢培养基及其工艺条件的研究

禾长蠕孢菌稗草专化型（Helminthosporium gramineum Rabenh. f. sp. echinochloae,HGE）是一株稗草生防潜力菌,为了获得该生防菌大量孢子用于田间试验,本文研究了其固体发酵产孢最佳培养基配方及其培养条件。通过试验筛选确定了固体发酵培养基所需碳源及其浓度、氮源及其浓度以及底物基质,适合HGE菌孢子生产的培养基最佳组合为：以珍珠岩为底物基质,在其中添加4%米粉、1%豆粕粉、0.2%Na3PO4.12H2O、0.1%MgSO4.7H2O。同时确定了适合HGE菌孢子生产的培养条件：培养基最适含水量为40%,最佳接菌量为8%菌悬液,25℃静置培养11 d,培养期间用黑光灯12 h循环光照。按优化后培养条件放大培养HGE菌,获得最高产孢量可以达到1.5×107孢子·克-1干物质。温室生测结果显示优化条件生产的HGE菌孢子对稗草防效可达80%以上。     

球孢白僵菌对两种植物病原镰孢的拮抗作用

体外测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana对两种棉花病原镰孢——棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium f.sp.vasinfecturn和棉花红腐病菌Fusarium verticillioides的拮抗作用。平板对峙培养时,两种镰孢的生长均受到明显抑制。不同含孢量的球孢白僵菌对两种镰孢的抑制效果不同,且抑制率与孢子浓度成显著的线性量效关系;在接种量为6×107孢子.mL-1时,对两种菌的抑制率均达到90%以上,对红腐病菌的抑制率稍高。白僵菌代谢液对两种植物病原菌也表现出抑菌作用,并且抑制率与代谢液浓度呈显著的线性量效关系。综上述,球孢白僵菌对两种镰孢拮抗作用的机制主要涉及营养和空间竞争以及抗生作用,其中抗生作用对拮抗作用的贡献更大。对抗生性代谢液的初步分析发现,醇沉后的上清液冻干粉经4种有机溶剂浸提后,无明显的抑菌作用;而向培养基中添加球孢白僵菌多糖和蛋白粗提物均能显著抑制两种镰孢菌的菌丝生长。因此,抑菌活性物质主要是大分子的多糖和蛋白。     

金龟子绿僵菌CQMa117的营养要求与培养特性初探

金龟子绿僵菌大孢变种Metarhizium anisopliae var.major菌株CQMa117是新分离到的一株对天牛有良好杀虫活性的绿僵菌菌株。通过单因素试验,测试不同温度、pH、碳源、氮源及无机盐类对CQMa117菌株生长和产孢的影响,确定了蔗糖、葡萄糖、可溶淀粉、蛋白胨、尿素、硫酸铵以及Cu^2＋、K^＋、Ca^2＋是菌落生长和产孢的最适碳源、氮源和无机盐类;培养基初始pH6.0、培养温度25℃是菌株的最适产孢条件。通过碳源、氮源及无机盐3个较优水平的正交试验,确定菌株最适合的产孢固体培养基为：1000ml固体培养基中加入10.0g蔗糖、2.5g尿素、5.0g酵母膏和0.001%Cu^2＋,可使CQMa117菌株产孢量比基础培养基增加30.2%。     

不同浓度增效剂对金龟子绿僵菌、黄绿绿僵菌和球孢白僵菌产孢的影响

生防菌作为一种重要的生物杀虫剂,被开发成多种制剂应用于农林害虫的防治;微生物制剂的生产成本高、耗时长,极大影响其生产效率。本试验通过液固两相发酵法筛选出提高金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae、黄绿绿僵菌Metarhizium flavoviride和球孢白僵菌Beauveria bassiana产孢量的最优增效剂浓度。结果表明0.1%浓度增效剂对金龟子绿僵菌的促产孢作用达最大化,浓度达4.48×10⁹孢子/g;黄绿绿僵菌的最适增效剂浓度为0.05%,浓度达2.75×10⁹孢子/g;当增效剂浓度小于0.1%时利于黄绿绿僵菌的产孢,增效剂高于0.1%时抑制产孢;而球孢白僵菌的产孢量与增效剂浓度正相关,最大浓度达7.41×10⁹孢子/g。在真菌液体发酵过程中添加产孢增效剂,有效提高了真菌产孢量,缩短了真菌培养周期,为提高真菌制剂生产效率、节约成本提供理论支持。     

影响链格孢菌生长及产孢的因子

在实验室研究了影响稗草病原真菌链格孢生长及产孢的因子.链格孢菌可在较宽的温度范围内生长、繁殖;连续黑暗、空气充足条件下有利于产孢;该菌在4种不同的植物产品上培养可产生大量的孢子,最多的无芒稗籽上每克干物质产孢量达3.59×108个,这些培养物在首次产孢收获后均可直接培养作二次产孢利用.固体(菌块)和液体(菌悬液)接种培养物均能成功产孢.但培养量大时液体接种优于固体接种,产孢量与接种菌悬液浓度呈正相关.     

5种常用农药与生防菌球孢白僵菌的相容性研究

为研究农药与生防真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana BBON01的相容性,测定了5种常见农药噻虫啉、四氯虫酰胺、双丙环虫酯、氯虫苯甲酰胺和咯菌腈对球孢白僵菌孢子萌发、菌丝生长及产孢量的影响。结果表明:亚致死浓度和次亚致死浓度的双丙环虫酯对孢子萌发无影响;致死浓度、亚致死浓度和次亚致死浓度的双丙环虫酯,次亚致死浓度的噻虫啉对菌丝生长无影响;致死浓度、亚致死浓度的双丙环虫酯,次亚致死浓度的噻虫啉和四氯虫酰胺对产孢量无影响;而上述药剂的其他试验浓度以及其他供试药剂的各试验浓度对球孢白僵菌的孢子萌发、菌丝生长及产孢量均具显著抑制作用。综合比较得出,供试药剂中与球孢白僵菌相容性最佳的是双丙环虫酯,在其致死浓度、亚致死浓度、次亚致死浓度下,孢子萌发率分别为91.67%、95.00%、96.33%,菌落直径分别为5.97、5.90、6.03 cm,产孢量分别为13.82×10⁷、13.74×10⁷、13.93×10⁷个孢子/m L。研究结果可为田间混用球孢白僵菌与农药防治病虫害提供参考。     

线虫内寄生真菌明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)的营养研究

 明尼苏达被毛孢(Hirsutella minnesotensis)是中国大豆胞囊线虫重要的内寄生菌,本研究采取固体和液体2种培养方法测定了6种天然培养基、20种碳源、19种氮源和9种维生素对其生长、产孢和孢子萌发的影响。结果表明:H. minnesotensis在酵母葡萄糖琼脂(Yeast dextrose agar,YDA)培养基上生长最快,在麦芽浸膏琼脂(Malt extract agar,MEA)培养基上产孢最好,胰化大豆琼脂(Tryptic soy agar,TSA)培养基既不适合生长,也不适合产孢。在碳氮源研究中,Melibiose在固体培养基上显著促进H. minnesotensis气生菌丝生长,Glycogen是液体培养和孢子萌发最好的碳源。H. minnesotensis在以Casein为氮源的培养基上气生菌丝最多,Peptone是H. minnesotensis液体培养最好的氮源,大多数的氮源可以促进H. minnesotensis孢子萌发,但L-Cystine抑制孢子萌发,且在固体培养中不能被H. minnesotensis利用。维生素对H. minnesotensis的生长、产孢和孢子萌发有一定的促进作用。