产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌分离株的生物学特性研究

对发酵黄芪样品中分离的1株产纤维素酶解淀粉芽胞杆菌的生物学特性进行了检测,试验结果表明,菌株在10℃~60℃环境均能生长,最适生长温度为35℃~40℃。pH5.0~8.0培养基均适宜菌株生长,其中最适pH为6.0。在37℃环境200r/min振荡培养的生长曲线在0~4h为延迟期,4h~12h为对数期,12h~24h为稳定期,24h以后为衰亡期。细菌37℃培养32h开始产生芽胞,在培养72h时芽胞形成率达到80.67%。菌株对多数抗菌药物敏感,且安全性良好。该菌株适应性强,生长条件较为宽松,这为其开发应用提供了依据。     

2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒素B_1的效果

旨在研究2株枯草芽孢杆菌协同降解黄曲霉毒B1(AFB1)的作用。将2株枯草芽孢杆菌进行生理生化特性鉴定和16SrRNA序列测定后,以AFB1降解率为依据,分别进行优化培养并观察协同降解作用。结果表明:菌株K-3优化条件为装液量50mL/250mL、温度37℃、4%接种量、初始pH7.0、发酵周期48h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为88.07%(P<0.05);菌株K-TM装液量为50mL/250mL、温度37℃、6%接种量、初始pH7.0、发酵周期60h,150r/min振荡培养,对AFB1降解率为84.81%(P<0.05);K-3、K-TM按体积1∶2组合,对AFB1协同降解率达到88.43%。本研究为益生菌在降解黄曲霉毒素中的应用奠定理论基础及试验依据。     

解淀粉芽胞杆菌SSY2分离鉴定及其拮抗霉菌特性研究

为了分离出可拮抗玉米常见霉菌的芽胞杆菌,通过分离、培养和形态学特征方法,从黑龙江齐齐哈尔地区玉米种植地土壤样品分离芽胞杆菌,通过平板对峙试验检测分离菌对黄曲霉菌、黑曲霉菌、卷枝毛霉菌、链格孢菌等指示菌的拮抗作用,通过生理生化鉴定和分子生物学方法鉴定分离菌,测定其安全性和药物敏感性。结果表明,筛选到革兰阳性芽胞杆菌1株,鉴定为解淀粉芽胞杆菌,编号为SSY2。该菌对黄曲霉菌、黑曲霉菌、卷枝毛霉菌、链格孢菌均具有较强的抑制作用,在测定的16种临床常用抗生素中仅对氨曲南和林可霉素表现为耐药,对其他抗生素均表现为敏感。急性毒性试验和慢性毒性试验结果表明该菌株安全性良好。分离的解淀粉芽胞杆菌具有安全、抑霉菌作用强、抑菌谱广等优点,在生物脱霉及生物饲料添加剂领域具有潜在的开发价值。     

布拉酵母菌对黄曲霉毒素B1脱毒特性研究

本试验研究了不同菌体预处理、不同浓度菌体、不同作用时间、不同pH环境对布拉酵母菌脱除黄曲霉毒素B₁(AFB₁)效果的影响。结果发现,布拉酵母菌脱除AFB₁的主要机理是吸附作用;与2 mol/L HCl 121 ℃处理30 min相比,100 ℃处理30 min更有利于布拉酵母菌对AFB₁的脱毒;强酸性和偏碱性的环境也利于布拉酵母菌对AFB₁的脱毒。     

解淀粉芽胞杆菌的安全性分析

评价对鲟源嗜水气单胞菌具有优良拮抗效果的解淀粉芽胞杆菌G1的安全性,以期推动其在水产养殖中的应用进程。通过特异PCR法检测了菌株G1的毒力基因,并采用纸片法分析了其对水产药物的耐药性,观察了其对小鼠和草鱼的毒力。结果表明,菌株G1不含有溶血素基因、肠毒素T基因、肠毒素FM基因;对诺氟沙星、恩诺沙星、新霉素、复方新诺明、甲氧嘧啶、链霉素、氧氟沙星、庆大霉素、复合磺胺等9种水产常用药物以及呋喃唑酮、环丙沙星、氯霉素、红霉素等4种水产禁用药物高度敏感;对四环素中度敏感。此外,菌株G1在105 cfu/g～109 cfu/g注射剂量下对小鼠和草鱼无致病性,对小鼠和草鱼的LD50大于109 cfu/g,为无毒菌株。     

解淀粉芽胞杆菌固态发酵当归培养基的研究

为筛选和优化解淀粉芽胞杆菌固态发酵当归培养基,以当归多糖含量为指标,采用单因素试验对当归固态发酵培养基成分筛选,采用响应面分析试验对培养基组分进行优化。结果显示,在所筛选成分中,最适宜菌株发酵的固态培养基成分为当归、黄豆粉、碳酸钙和水。优化的固态发酵培养基各组分含量分别为:当归320.914 g/L、黄豆粉109.918 g/L、碳酸钙1.532 g/L、水544.159 mL/L,37℃发酵培养72 h,固态发酵物中的多糖质量分数达24.91 mg/g。结果表明,优化的当归固态发酵培养基适宜解淀粉芽胞杆菌生长,易于多糖的释放,所筛选的发酵培养基原材料符合固态发酵产业化生产条件要求。     

黄曲霉毒素的生物脱毒研究进展

黄曲霉毒素是一种真菌次级代谢产物,广泛存在于霉变的食品或饲料中,具有极强的肝脏毒性,是诱发肝脏癌变的毒素之一。本文介绍了微生物对黄曲霉毒素B₁的吸附和降解作用,综述了近年来食品和饲料中黄曲霉毒素B₁的微生物脱毒研究及应用进展。     

降解AFB1的枯草芽孢杆菌S1分离与鉴定

【目的】筛选出能够高效降解黄曲霉毒素（aflatoxin,AF）的菌株,并对其降解活性及残留毒性进行检测,以期为黄曲霉毒素B₁（alflatoxin B₁,AFB₁）污染防治提供参考。【方法】采集耗牛、绵羊等草食性动物粪便和养殖场霉变饲料,以AFB₁的结构类似物香豆素为唯一碳源筛选降解AFB₁效率最高的菌株,并对其进行形态学、生理生化和16S rDNA鉴定。取AFB₁与适量筛选菌株的发酵液混合,使AFB₁的浓度为1 μg/mL,37℃、150 r/min培养,测定培养不同时间AFB₁降解率;应用差速离心法分别制取上清液、菌悬液和菌体,将菌体超声裂解后制得胞内液,测定不同组分对AFB₁的降解率;对上清液分别进行蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理,检测处理后上清液AFB₁降解率;分别用不同浓度的饱和硫酸铵沉淀处理上清液,检测AFB₁降解率;应用7 ku透析袋对上清液进行浓缩,检测AFB₁降解率,从而判断菌株活性成分的性质和分布。将鸡肝细胞分为AFB₁组、AFB₁-菌株组、菌株组和空白对照组,用实时荧光定量PCR检测各组鸡肝细胞中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosisi factor alpha,TNF-α）和Bcl-2-associated X蛋白（Bax）基因的相对表达量。【结果】经初筛和复筛,从编号为S₁的绵羊粪便样品中分离出1株菌株,其降解AFB₁的活性最高,降解率可达60.36%。菌株S₁在LB固体培养基上培养12 h,可观察到淡黄色不透明菌落,表面光滑,有隆起,镜检革兰氏染色呈阳性,杆状。16S rDNA基因进行PCR扩增并进一步测序分析,其序列与LC55966.1的同源性为100%。综合16 S rDNA序列分析和生理生化结果鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌发酵液与AFB₁（1 μg/mL）反应4、12、24、48和72 h,降解率分别达到10.98%、25.36%、46.24%和52.65%和80.84%。上清液AFB₁降解率显著高于菌悬液和胞内液（P<0.05）。热处理后,上清液的AFB₁降解活性降低,而经蛋白酶K和SDS处理后降解活性基本丧失。用不同浓度饱和硫酸铵处理的上清液AFB₁降解率差异不显著（P>0.05）,而经透析浓缩后的上清液AFB₁降解率显著高于硫酸铵处理的上清液沉淀蛋白（P<0.05）。在鸡胚胎肝脏原代细胞上,与AFB₁组相比,AFB₁经枯草芽孢杆菌S₁降解后诱导IL-6、TNF-α以及Bax的表达量均显著降低（P<0.05）。【结论】筛选到1株枯草芽孢杆菌S₁,其具有较高的降解AFB₁的活性,其降解活性主要来自于培养液上清中的蛋白质;AFB₁经降解后其毒素显著降低。     

蒙脱石对黄曲霉毒素B1体外吸附效果评估

试验评估蒙脱石对黄曲霉毒素B1(AFB1)的体外吸附效果,探究AFB1浓度、蒙脱石有效含量及添加量、pH值、吸附时间及吸附温度对蒙脱石吸附AFB1的影响.试验制作高(98.8 μg/kg)、低(48.9 μg/kg)两种不同浓度的AFB1污染饲料,将5种不同有效含量的蒙脱石以3种添加量添加到带毒饲料中吸附AFB1,加入...     

解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性试验

为评估1株产纤维素酶的解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性,本试验对其进行了急性毒性、慢性毒性、细菌易位、代谢产物及药敏等安全性试验。急性毒性试验分为高剂量组（1.30×10¹⁰ CFU/mL）、中剂量组（0.90×10¹⁰ CFU/mL）、低剂量组（0.65×10¹⁰ CFU/mL）和生理盐水对照组,一次性灌服后观察14 d,处死存活小鼠,剖检。慢性毒性试验分为高剂量组（0.65×10¹⁰ CFU/mL）、中剂量组（0.65×10⁹ CFU/mL）、低剂量组（0.65×10⁸ CFU/mL）和生理盐水对照组,各组灌服1次/d,连续灌服30 d。结果表明,急性毒性试验小鼠的精神、食欲、行为、粪便等均未见异常,试验鼠全部存活,剖检未见病理变化;慢性毒性试验小鼠均无异常临床变化,剖检小鼠也未见病变,高、中、低剂量组及对照组间小鼠增重、饲料利用率、血液学指标、血液生化指标及脏器系数均差异不显著（P>0.05）;解淀粉芽孢杆菌SSY1菌株在小鼠体内未发生易位,氨基脱羧酶、吲哚试验均为阴性,在测定的24种常用药物中,除林可霉素耐药外,菌株对其余23种药物均敏感。试验证实,解淀粉芽孢杆菌SSY1株的安全性良好。     

Evaluation of Safety of Bacillus amyloliquefaciens SSY1

In order to determine the safety of Bacillus amyloliquefaciens SSY1, we carried out the acute toxicity, chronic toxicity, bacterial translocation, product of metabolism and drug susceptibility test. Acute toxicity test in high dose groups (1.30×10¹⁰ CFU/mL), middle dose group(0.90×10¹⁰ CFU/mL), low dose group (0.65×10¹⁰ CFU/mL) and normal saline control group. After the acute toxicity test, the mice were sacrificed 14 days after the observation. Chronic toxicity test of each group was administered once a day for 30 d, chronic toxicity test in high dose groups (0.65×10¹⁰ CFU/mL), middle dose group (0.65×10⁹ CFU/mL), low dose group (0.65×10⁸ CFU/mL) and normal saline control group. The results showed that all mice were without exception phenomenon, the spirit, appetite, behavior and feces and so on, no pathological changes were found on the acute toxicity test. Chronic toxicity test of the mice were no abnormal clinical changes, and there were no pathological changes. Body weight and feed utilization rate of mice, hematology, blood biochemistry indexes and viscera coefficient difference were not significant (P>0.05);Bacillus amyloliquefaciens SSY1 strain did not occur translocation in mice, amino acid decarboxylase and indole test were negative, among the 24 kinds of commonly used drugs, the strains were sensitive to 23 kinds of drugs except the cillimycin. This experiment proved that Bacillus amyloliquefaciens SSY1 had good security.     

石榴枯萎病菌拮抗菌B110的分离鉴定

本研究从云南建水石榴园、蒙自石榴园采集的土样中分离筛选到对石榴枯萎病菌有较强拮抗活性的芽孢杆菌,其中菌株B110对石榴枯萎病菌的室内抑制率为65.88%,研究表明菌株B110能在石榴根际稳定定殖,具有潜在生防价值。结合菌株B110的培养性状、菌落形态观察、生理生化特性分析(Biolog系统)及gyrB基因序列分析,将菌株B110初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。     

不同氨化处理黄曲霉毒素B_1脱毒效果及其对奶牛瘤胃体外发酵的影响

试验旨在研究不同氨化处理对黄曲霉毒素B_1(AFB_1)的脱毒效果及其对奶牛瘤胃体外发酵的影响。本研究分为两个试验。试验一:对人工感染2 550μg/kg AFB_1的玉米和大米混合物(1∶3)进行氨化处理,分为对照组(Ⅰ组,未处理)和试验组Ⅱ(0.1Mpa,1h)、Ⅲ(0.1 Mpa,2h)、Ⅳ(0.1 Mpa,3h)、Ⅴ(0.2 Mpa,1h)、Ⅵ(0.2 Mpa,2h)、Ⅶ(0.2Mpa,3h)、Ⅷ(0.3Mpa,1h)、Ⅸ(0.3Mpa,2h)、Ⅹ(0.3Mpa,3h)组,每组3个重复,测定不同氨化处理的AFB_1的脱毒效果及混合物的营养成分。试验二:研究氨化处理AFB_1对奶牛体外发酵指标的影响。试验设对照组(Ⅰ组,未处理)和试验组Ⅱ(0.3Mpa,1h)、Ⅲ(0.3Mpa,2h)、Ⅳ(0.3Mpa,3h)组,每组3个重复,测定体外发酵2、4、8、12、24和48h的产气量、发酵液pH、体外干物质降解率(IVDMD)、氨态氮(NH3-N)和挥发性脂肪酸(VFA)。结果显示:在试验一中,试验组粗蛋白质(CP)含量均显著高于对照组(P<0.05);Ⅹ组(0.3 Mpa,3h)AFB_1含量显著低于其他组(除Ⅶ组外)(P<0.05)。在试验二中,Ⅳ组(0.3 Mpa,3h)发酵液pH显著低于对照组(P<0.05),体外发酵产气量、挥发性脂肪酸、氨态氮含量和体外干物质降解率(除48h外)均显著高于对照组(P<0.05),而Ⅱ(0.3Mpa,1h)和Ⅲ组(0.3Mpa,2h)组效果不明显。综上所述,氨化处理能够显著降低样品中AFB_1含量,提高CP含量,改善瘤胃发酵,其中0.3Mpa、3h处理效果最佳。     

解淀粉芽孢杆菌抑菌作用及在养猪业中的应用

随着生猪产业的快速发展,肠道健康问题备受关注。病原微生物感染和各种应激造成猪腹泻、肠道功能紊乱,甚至导致猪死亡。通过使用微生态制剂等营养调控因子可以缓解这些问题。在前人的研究中,从解淀粉芽孢杆菌中分离纯化了多种有效抑菌物质,并明确了其中部分物质的组成结构,为进一步阐明解淀粉芽孢杆菌对细菌和真菌抑制能力提供了理论基础。本文结合解淀粉芽孢杆菌抑菌机理,对其在养猪业中的应用情况进行综述,为开发解淀粉芽孢杆菌作为益生素的应用价值提供参考。     

猪肠道中产蛋白酶解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及其酶学性质的初步研究

试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能。结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为：40℃、pH 7.0,Ca²⁺和Mn²⁺对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g。结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择。     

Screening and Identification of Protease-producing Bacillus amyloliquefaciens from Pig's Intestines and the Preliminary Study of Its Enzymatic Properties

A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca²⁺ and Mn²⁺ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion.     

黄曲霉毒素B_1与M_1对小鼠肠道细菌多样性的影响

试验旨在研究黄曲霉毒素B_1与M_1(AFB_1与AFM_1)对小鼠肠道细菌多样性的影响。选取体况良好的4周龄ICR(CD-1)雄性小鼠40只,随机分成4组,每组10个重复,每个重复1只小鼠,其中AFB_1组小鼠每只每天灌胃0.3mg/kg体重AFB_1,AFM_1组小鼠每只每天灌胃3.0mg/kg体重AFM_1,AFB_1+AFM_1组每只每天灌胃AFB_1与AFM_1的混合溶液,其中AFB_1终浓度0.3mg/kg体重,AFM_1终浓度3.0mg/kg体重,以上3组毒素溶剂均为1.0%二甲基亚砜水溶液。对照组小鼠每只每天灌胃1.0%二甲基亚砜水溶液。每只灌胃剂量均为200μL,每天09∶00灌胃一次,连续灌胃28d。灌胃结束后,处死并解剖小鼠,收集结肠内容物,采用16SrRNA测序的方法对肠内容物细菌多样性进行测序分析。结果显示:在细菌群落的门水平、科水平及属水平,与对照组相比,3个毒素处理组小鼠肠道内容物细菌优势菌群均未发生明显排序变化(P>0.05),但不同的毒素处理仍造成了不同分类水平下细菌菌群丰度的显著变化:与对照组相比,AFB_1组及联合灌胃组小鼠肠内致病菌或条件致病菌,如Facklamia、Staphylococcus、Corynebacterium属细菌丰度显著升高(P<0.05);而AFM_1组与对照组相比未见显著差异(P>0.05)。综合试验结果,AFB_1单独作用或与AFM_1联合作用可诱导小鼠肠道内致病菌或条件致病菌细菌增殖,改变肠道健康微生物区系,损伤肠道微生物屏障功能。     

解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及其对嗜水气单胞菌抑制作用研究

本试验从鲫鱼肠道中分离到1株芽孢杆菌,经生物学特性测定及16S rRNA测序分析,鉴定该分离菌株为高产蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(命名为JX001).对该分离菌进行嗜水气单胞菌体外抑菌试验,结果发现有明显的抑菌圈和抑菌带,说明该分离菌对嗜水气单胞菌具有较强的抑制作用,在养殖水中加入分离菌JX001可防止嗜水气单胞菌的暴发;同时分离菌JX001在生长代谢过程中产生大量的蛋白酶,可有效地促进蛋白质水解,用于蛋白质饲料的降解.