血管紧张素转换酶2在维持肠道稳态中的作用

血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先克隆出的人类血管紧张素转换酶(ACE)的同源基因,是肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键调节因子,其主要通过水解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)生成血管紧张素1-7[Ang(1-7)]从而发挥舒张血管、抗炎、抗增殖等作用。近期研究发现,ACE2不仅对心血管和肾功能等具有明显的调控作用,对抑制肠道炎症、维持肠道稳态、保护肠道健康等同样具有积极的影响。当前对ACE2在肠道健康领域的研究较少。论文就ACE2通过影响肠道微生态对维持肠道稳态作用的研究进行综述,为发掘ACE2的新功能提供参考。     

血管紧张素转换酶及其与血压关系的研究进展

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)是血压最重要的调节系统之一。血管紧张素转换酶(ACE)位于这个系统的中心，是RAS活性的限速酶，ACE基因被认为是高血压病的候选易感基因。近些年来，随着分子生物学技术的发展和对该酶的深入研究，ACE受到人们的广泛关注，被认为是调节RAS功能和血压的关键物质。     

乳酸菌发酵对血管紧张素转换酶抑制肽功能特性的影响

研究乳酸菌发酵血管紧张素转换酶抑制肽对其功能特性的影响。结果表明：血管紧张素转换酶抑制肽经乳酸菌发酵后提高了血管紧张素转换酶抑制活性，其中以鼠李糖乳杆菌发酵后的活性最高，为97．83％；血管紧张素转换酶抑制肽对乳酸菌的生长有促进作用，以双歧杆菌活菌数量提高最大，鼠李糖乳杆菌次之；乳酸菌对致病性大肠杆菌有明显的抑制作用，血管紧张素转换酶抑制肽经乳酸菌发酵后对致病性大肠杆菌的抑制作用优于发酵乳，以鼠李糖乳杆菌的抑制作用最强，其抑菌圈直径高达24mm。     

白羽肉鸡血管紧张素转换酶2(ACE2)全基因克隆及序列信息分析

血管紧张素转换酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)作为血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的重要一员,对鸡ACE2的研究尚没有开展。本研究以白羽肉鸡为研究对象,从白羽肉鸡空肠组织中扩增出ACE2基因编码区的特异性片段,TA克隆到pMD-19T载体并转到大肠杆菌DH5α感受态细胞,对生长出的单菌落进行蓝白斑筛选、菌液PCR、酶切验证后测序,对所得序列进行了生物信息学分析。结果:本研究明确了ACE2在白羽肉鸡体内有存在,分布表达有组织特异性,在消化系统及肾脏有较高表达。并且首次成功克隆了白羽肉鸡ACE2全基因序列,共包括2,444个核苷酸,编码808个氨基酸残基,同源性及遗传进化结果一致。该基因编码ACE2蛋白属不稳定、亲水性蛋白,蛋白信号肽序列位于第1-17aa之间,蛋白跨膜螺旋预测为I型跨膜蛋白。研究所得序列已上传GenBank(基因序列号为MK560199),为ACE2在肉鸡及禽类方面的研究提供了基础资料。     

中国麻鸭血管紧张素转化酶2(ACE2)的基因克隆及基因结构的序列解析

血管紧张素转化酶2（ACE2）被发现以来，其病理生理功能，特别是作为SARS、COVID-19等冠状病毒侵入细胞的功能性受体，显示了巨大的潜能，明确其在不同物种的基因序列及结构可为冠状病毒感染机制研究提供依据。本研究以中国麻鸭为研究对象，利用RT-PCR和Western blot检测ACE2在中国麻鸭各组织中的表达，然后用PCR技术，扩增出中国麻鸭ACE2基因的完整ORF序列，再TA克隆至pMD-19T载体中进行测序，对所得序列进行生物信息学解析。结果证实，ACE2在中国麻鸭心、肝、肺、肾等组织中均有表达。基因克隆结果显示，该中国麻鸭ACE2基因的CDS序列全长为2 435 bp，编码805个氨基酸残基，与人ACE2核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为66.2%和66.4%，且处在不同进化树分支上。通过对与SARS病毒S蛋白结合有关的18个关键氨基酸残基分析发现，中国麻鸭除第330和353位氨基酸外，其余均与人不相同。结构分析发现，中国麻鸭ACE2为Ⅰ型跨膜蛋白，有多处N-糖基化位点。研究首次获得中国麻鸭ACE2基因的完整ORF序列及相关基础资料，所得序列已上传GenBank并被成功收录，研究结果为开展ACE2在鸭上的功能研究提供了理论依据。     

κ-酪蛋白遗传多样性对血管紧张素Ⅰ转换酶抑制肽活性的影响

牛奶中蛋白质是生物活性肽的来源之一，这些肽在酪蛋白和乳清蛋白的消化过程中产生。因此，本试验主要研究牛奶中不同的κ-酪蛋白基因型A、B、C、E、F1、F2、G1、G2、H、I和J中活性肽对血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）抑制活性的影响。通过分析肛酪蛋白基因型的氨基酸序列来测定ACE抑制肽的活性。测定了已知的生物活性肽活力和其它一些κ-酪蛋白基因型巾其它肽的活性。结果表明，κ-酪蛋白基因型B和基因型C中的ASP（ACE抑制肽）的IC50（半数抑制浓度）值为242．3，     

绵羊乳酪蛋白血管紧张素转换酶抑制肽的制备与鉴定

以绵羊乳酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶水解制备生物活性肽,研究酶解时间对酶解产物水解度和血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制率的影响,利用液相色谱-质谱联用技术对水解产物进行分析和鉴定,筛选具有潜在ACE抑制作用的生物活性肽.结果表明:酶解时间达到300 min时,水...     

酶解蚕蛹蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的工艺优化

采用碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白,制备血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,是蚕蛹蛋白深度开发的途径之一。以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶解温度、酶解pH和加酶量等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性影响程度由大到小依次为酶解pH、酶解温度、加酶量。获得碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度50.8℃,酶解pH 9.0,加酶量3 500 U/g。在此条件下,蚕蛹蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达96.67%,验证值为96.49%±1.75%,IC50值为0.102 mg/mL,预测模型可靠性高,可应用于蚕蛹ACE抑制肽的酶法制备。     

蚕蛹不同溶解性蛋白的营养学评价及酶解物对血管紧张素转换酶的抑制活性

分别对缫丝蚕蛹中的水溶性和碱溶性蛋白组分进行营养学评价,为高效开发蚕蛹食品提供依据;通过蚕蛹蛋白酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)的体外抑制活性试验,探讨蚕蛹蛋白作为天然降压药品原料的利用潜力。营养学分析表明:蚕蛹蛋白水溶性和碱溶性组分中的氨基酸种类齐全,且必需氨基酸占总氨基酸的质量分数分别为41.2%和39.2%,明显高于WHO推荐的氨基酸组成模式(>36%);蚕蛹水溶性蛋白有第1～第4限制性氨基酸(依次为亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和苏氨酸),而蚕蛹碱溶性蛋白仅有第1和第2限制性氨基酸(依次为蛋氨酸+胱氨酸、异亮氨酸),2种溶解性蛋白的生物效价均较低,在开发利用中,应补充限制性氨基酸或与其它蛋白搭配使用,以提高产品的营养价值。体外ACE抑制活性试验表明,蚕蛹的水溶性蛋白和碱溶性蛋白的碱性蛋白酶酶解产物均具有较强的ACE抑制活性,IC50值分别为0.121、0.113 mg/mL,2种蛋白有可能成为降血压肽生产原料。     

猪DNM2基因克隆、序列分析与组织表达谱研究

本研究旨在对猪发动蛋白2（dynamin-2,DNM2）基因进行克隆和生物信息学分析,并探讨DNM2基因在猪不同组织中的表达情况。利用RT-PCR结合RACE方法克隆猪DNM2基因cDNA部分序列,与猪表达序列标签进行拼接,获得猪DNM2基因cDNA全长,并对其进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR检测DNM2基因在猪不同组织中的表达情况。结果表明,猪DNM2基因的开放阅读框（open reading fram,ORF）为2 616 bp,共编码871个氨基酸。DNM2相对分子质量为98 071.30,等电点（pI）为7.04;无信号肽和跨膜结构域,即该蛋白不属于分泌蛋白;DNM2蛋白的二级结构预测发现,构成α-螺旋、β转角、无规则卷曲、延展链的氨基酸数量分别为361、53、335和122个。多重分析结果显示,猪DNM2基因与牛、人、小鼠、大鼠的序列同源性分别为92.6%、91.8%、88.6%和89.3%;进化树分析表明,DNM2基因在物种间具有较高的保守性,不同物种间DNM2基因序列的差异符合物种间的进化性。实时荧光定量PCR结果显示,DNM2基因在脾脏中表达量较高,在乳腺、腿肌、输卵管、卵巢和子宫中表达量均较低。本研究结果为今后深入研究DNM2基因的生物学功能奠定了基础。     

鸡肉质鲜味特性相关基因的克隆及序列分析

本研究对泰和乌骨鸡、隐性白羽肉鸡腺苷琥珀酸裂解酶基因的cDNA进行了克隆,并对序列进行了分析,共发现有6处碱基突变249 G→A(TH)、717 C→G(TH)、985 A→G(TH)仅在泰和乌骨鸡中出现;992 T→C(RW)、1400 C→T(RW)仅在隐性白羽肉鸡中出现;而在泰和乌骨鸡和隐性白羽肉鸡中均检测到突变1179 A→C(TH,RW).其中985 A→G(TH)、1400C→T(RW)处突变导致两处氨基酸突变Thr→Ala(305)、Ala→Val(443),其它4处碱基突变均为同义突变.另外对几种脊椎动物Adsl基因核苷酸序列水平、蛋白质水平同源性进行了比较分析.     

Cloning,Sequence Analysis and Tissue Expression of Porcine DNM2 Gene

This study was aimed to clone porcine dynamin-2(DNM2) gene and analyze the gene structure using bioinformatics methods, the DNM2 gene mRNA level in different tissues was also investigated. We got the DNM2 gene cDNA sequence through stitching the expressed sequence tags (EST) and partial cloned sequence of DNM2 gene using RT-PCR and RACE methods. The mRNA level of porcine DNM2 gene in different tissues were detected with Real-time quantitative PCR. The results showed that DNM2 gene included an 2 616 bp whole length open reading frame (encoding 871 amino acids). DNM2 had a relative molecular mass of 98 071.30 and an isoelectric point (pI) of 7.04,and there was no signal peptide and transmembrane domain, therefore, it did not belong to the secretory protein. The DNM2 second structure contained α-helix (361 amino acids), β-sheet (53 amino acids), random coil (335 amino acids) and extended chain (122 amino acids). The sequence multi-aligned results showed that porcine DNM2 gene shared 92.6%, 91.8%, 88.6% and 89.3% of similar nucleotide sequence with that of cattle, human, mouse and rat, respectively. The phylogenetic analysis showed that DNM2 gene was highly conserved among species. Real-time quantitative PCR results indicated that the expression level of DNM2 gene was relatively higher in spleen while that was relatively lower in breast, leg muscle, fallopian tube, ovary and uterus. This research could provide the basis for the further study of the biological function of DNM2 gene.     

鸡Smad4基因克隆、生物信息学及组织表达分析

试验旨在克隆鸡Smad4基因，并对其进行生物信息学和组织表达分析。以苏禽3号优质黄羽肉鸡为试验对象，使用RACE技术扩增并克隆了鸡Smad4基因全长序列，对其进行生物信息学分析，构建系统进化树，并利用实时荧光定量PCR检测了Smad4基因在鸡各组织中的表达情况。结果显示，鸡Smad4基因全长序列包含17 bp的5'UTR、1 842 bp的开放阅读框和466 bp的3'UTR，有11个外显子和10个内含子，mRNA序列全长2 325 bp，可编码613个氨基酸。系统进化树显示，鸡Smad4与其他鸟类聚为一类。生物信息学分析显示，Smad4蛋白分子质量为65.43 ku，理论等电点为10.04，为亲水蛋白；含有2个保守结构域：MH1和MH2；二级结构由α-螺旋（18.11%）、延伸链（17.29%）和无规则卷曲（64.60%）组成。组织表达分析表明，Smad4基因在鸡的心脏、肝脏、空肠、卵巢中均有较高表达，而在胸肌中不表达。本试验成功获得了鸡Smad4基因全长序列，并初步研究了其组织表达规律，为进一步研究Smad4基因在鸡繁殖活动中的分子机制提供了理论依据。     

Molecular Cloning,Sequence Analysis and Tissues Expression Profile of Part of Mink Toll-like Receptors (TLRs) Genes

The present study was aimed to explore the potential role of Toll-like receptors (TLRs) on the mink immunity, and accumulate alternative genetic material for the mink breeding for disease-resistant.Four pairs of primers were designed according to ferret TLR sequences in GenBank to obtain the sequences of TLR genes (TLR4, TLR6, TLR7 and TLR8) of mink and then performed bioinformatics analysis of these sequences.In addition, the expression of TLR4 and TLR7 genes in various tissues in young and adult minks were analyzed by RT-PCR. Sequence homology analysis showed that mink had higher homology with carnivora (ferrets, polar bear, panda, walrus, seals, dog, tiger and cat) which had the nearest perimeter in the phylogenetic tree.Tissue expression analysis showed that TLR4 and TLR7 were widely and differently expressed in variety tissues of mink.Interestingly, the expression of TLR4 and TLR7 in young mink were much higher than that in adult mink.     

水貂部分Toll样受体(TLRs)基因的分子克隆、序列分析及组织表达分析

试验旨在研究Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)在水貂抗病毒免疫中的作用机制,并为抗病育种积累可供选择的基因素材。本试验以雪貂TLRs基因为参考序列设计4对引物对水貂TLR4、TLR6、TLR7及TLR8进行分子克隆,并对所得序列进行生物信息学分析,进一步利用半定量RT-PCR技术分析TLR4和TLR7基因mRNA在不同年龄水貂各组织中的表达情况。结果表明,水貂TLRs与食肉目动物(雪貂、北极熊、大熊猫、海象、海豹、犬、老虎和猫)具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近;组织表达分析表明TLR4和TLR7在检测的组织中广泛表达且表达量存在差异,相比成年水貂,仔貂各组织中TLR4或TLR7基因表达量更高。     

四川草科IL-15 cDNA的克隆与序列分析

根据GenBank上登录的鸡白介素15（IL-15）基因序列,设计合成一对特异性引物,以ConA诱导的鸡脾淋巴细胞提取的总RNA为模板进行RT—PCR扩增,并克隆到pMD18-T载体测序。测序结果表明,四川草科鸡IL-15开放阅读框（ORF）由564个核苷酸组成,编码187个氨基酸,与GenBank中公布的鸡白介素15基因进行比较,核苷酸和氨基酸同源性为98．6％-99．5％。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有亲水性,有很强的抗原性,共有3个潜在的N-糖基化位点,可能存在3个蛋白激酶C磷酸化位点,存在2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。     

猪Lbx2基因的克隆、序列分析及表达

试验利用PCR扩增猪Lbx2基因组序列,通过克隆测序寻找基因中的突变位点,采用半定量RT-PCR分析猪不同组织中Lbx2基因的表达情况。结果显示,Lbx2基因在肝脏、肾脏和脾脏中微弱表达,在肌肉组织中不表达;通过比较不同物种氨基酸序列,结果发现猪Lbx2与牛、猩猩、犬进化关系较近;此外,在猪Lbx2基因组中发现5处突变位点,其中1个缺失突变(缺失11 bp)位于基因启动子区,另外4个单核苷酸突变分别位于第1外显子和内含子中。该试验结果为下一步Lbx2基因的功能研究奠定了基础。     

鸡贫血病病毒长春株VP3基因的克隆及序列分析

采用PCR扩增方法成功克隆了鸡贫血病病毒（CAV）长春分离株的VP3基因，并进行了核苷酸序列测定，通过与TK5803、SJ1株进行序列比较，发现长春分离株VP3基因与TK5803仅有1个碱基差异，而氨基酸序列完全相同，与山东SJ1株有3个碱基差异和3个氨基酸差异。