翠雀内生真菌分离鉴定及分布特性研究

旨在探明有毒植物翠雀的内生真菌种类,作者采用表面消毒法分离,运用形态学鉴定,采用ITS序列构建系统进化树,确定了其内生真菌的种类。结果显示,从翠雀植物中分离得到22种内生真菌,将其根据亲缘关系进行系统进化分析,主要分为Ⅰ和Ⅱ两大种群,分属于6纲、6目、6科、7属,其中,链格孢属真菌（Alternaria sp.）为优势菌（占分离菌株数的31.82%,主要分布于花和叶中）,内生真菌在花中分布最普遍（占分离菌株数的40.91%）,其次,为叶（31.82%）、根（22.73%）和茎（4.55%）。结果表明,翠雀内生真菌在不同组织中的分布普遍性不同。     

毛序棘豆内生真菌分离鉴定及系统进化分析

为探明毛序棘豆中内生真菌的种属及种群分布情况,对采集于甘肃省通渭县毛序棘豆样品,运用表面消毒法消毒样品后进行内生真菌分离,采用形态学和ITS序列分析技术对所得菌株进行种属鉴定,并通过MEGA5.05软件进行系统进化分析。结果显示,从毛序棘豆(根、茎、叶)中共分离得到内生真菌29株,经鉴定,分属于4纲、5目、6科、10属;其中茎的分离率(39.13%)最高,根(23.91%)次之,叶(11.11%)最少;而链格孢属(Alternaria sp.)和镰刀菌属(Fusariumsp.)是毛序棘豆内生真菌的优势菌属,其相对分离频率分别为27.59%和17.24%;木霉菌属(Trichodermasp.)为毛序棘豆内分布最广泛的菌属,在根、茎、叶中均有分布;将所得菌株作系统进化分析,并根据其亲缘关系远近分为Ⅰ和Ⅱ两大种群。本试验结果表明,毛序棘豆内生真菌数量、种类与种属分布存在明显组织差异,茎是内生真菌侵染和定植的主要部位且真菌多样性最高。     

箭叶橐吾内生真菌分离鉴定及组织分布特性研究

为探明有毒植物箭叶橐吾（Ligularia sagitta）的内生真菌种类及其组织分布特性，本试验对植物样品进行表面消毒后分离其内生真菌，采用形态学和内转录间隔区（Internal transcribed spacer，ITS）序列分析技术对分离到的菌株进行种属鉴定并构建系统进化树。结果显示，从箭叶橐吾中分离到21株内生真菌，属于3纲、3目、7科、9属。根据亲缘关系，将其主要分为种群I[以柄孢壳菌属（Podospora sp.）为代表]和种群II[以交链孢霉属（Alternaria sp.）为代表]，其中交链孢霉属和柄孢壳菌属均占分离菌株的19.05%，为其优势菌属，主要分布于花和叶。箭叶橐吾的内生真菌在花中分布最普遍（占分离菌株的42.86%），其次为叶（占分离菌株的38.10%）、茎（占分离菌株的14.29%）和根（占分离菌株的4.76%）。结果表明，内生真菌在箭叶橐吾中的分布存在明显组织差异。     

披针叶黄华中2种生物碱单体的分离与鉴定

披针叶黄华含有多种生物碱类物质,这类物质是引起动物披针叶黄华中毒的毒性成分,但其也具有祛痰、止咳等药理作用。目前,披针叶黄华所含的生物碱种类已被广泛报道,而关于该植物中生物碱单体提取、分离方面的研究报道较少。该试验采用柱层析分离法,从披针叶黄华总生物碱中提取到2种结晶,进一步应用薄层层析、气相—质谱联用和红外光谱法对获得的结晶进行了鉴定,最终确定结晶Ⅰ为黄华碱,推测结晶Ⅱ为四氢脱氧阿艮亭碱。结果表明,该试验采用的方法简便、可靠,能够成功地对披针叶黄华所含的生物碱单体进行分离、纯化和鉴定,为进一步研究2种结晶的生物学活性提供了技术基础。     

露蕊乌头内生真菌的分离与鉴定

为探明甘肃露蕊乌头内生真菌的种类与种群分布情况,对甘肃天祝的露蕊乌头样品采用表面消毒法进行内生真菌分离,用形态学和ITS序列分析技术对分离得到的菌株进行种属鉴定,并通过MEGA 5.05软件进行系统进化分析.结果表明,露蕊乌头内存在丰富的内生真菌,从其茎、叶、根、花和种子中分离得到的内生真菌共33株,经过鉴定,分别属于...     

披针叶黄华碱成分分析研究

目的:研究披针叶黄华碱的种类及含量。方法:采用超声波辅助甲醇浸提法、硅胶柱层析分离结晶技术从披针叶黄华全草粉中分离生物碱,利用GC-MS对总碱和结晶进行分析测定。结果:分离获得生物碱结晶Ⅰ、结晶Ⅱ,总碱中含有7种喹诺里西啶类生物碱,其中结晶Ⅰ为黄华碱,结晶Ⅱ为金雀花碱。结论:本试验为进一步研究披针叶黄华碱的生物活性提供了理论依据。     

藏沙蒿内生真菌分离鉴定与系统进化分析

为了探讨西藏藏沙蒿内生真菌种类与种群分布情况,对采集自西藏曲水的藏沙蒿样品表面消毒后进行内生真菌分离,并采用形态学和ITS序列分析技术对分离到的菌株进行种属鉴定,通过MEGA7.0软件进行系统进化分析。结果表明,藏沙蒿内存在丰富的内生真菌,从其根、茎、叶和花组织中共分离到48株真菌,总相对分离频率为85.42%。其中镰刀菌属(Fusarium sp.)在上述组织内均存在,分布最为广泛,而链格孢菌属(Alternaria sp.)在藏沙蒿植株内分离频率最高,是藏沙蒿内生真菌的优势菌属。研究结果可进一步丰富蒿属植物内生真菌的多样性,也为藏沙蒿内生真菌次生代谢产物的研究奠定了基础。     

超声波辅助提取披针叶黄华碱的工艺优选研究

采用超声波辅助甲醇浸提法对披针叶黄华碱进行提取,并设计正交试验对提取工艺进行优化,筛选披针叶黄华碱的最佳提取工艺条件。结果表明,优选工艺为甲醇浓度70%、固液比（g/m L）1∶20、超声时间60 min、超声功率500 W和超声温度60℃,最高提取率达1.195%。超声波辅助甲醇浸提法是提取披针叶黄华碱的有效方法,提取工艺科学合理,可以作为披针叶黄华碱的最佳提取方法。     

不同管理措施对高寒草甸群落结构和披针叶黄华空间分布格局的影响

本研究以青藏高原高寒草甸的披针叶黄华（Thermopsis lanceolata）为研究对象，比较了放牧（GT）、围封（FT）和“围封+施肥+划破+补播”综合管理（CT）3种管理措施对披针叶黄华空间分布格局和植物群落结构的影响。结果表明，CT处理的披针叶黄华重要值低于FT和GT处理；CT处理的香农指数和均匀度指数显著高于FT和GT处理（P<0.05）；FT和CT处理的披针叶黄华株数显著少于GT处理（P<0.05）；在CT和FT处理中披针叶黄华空间分布格局表现为聚集分布（0~10 m尺度）；而GT处理中披针叶黄华种群表现为聚集分布（0~6.5 m尺度）、随机分布（6.5~7.5 m尺度）和均匀分布（7.5~10 m尺度）。综上所述，在高寒草甸应采取“围封+施肥+划破+补播”综合措施防控披针叶黄华的爆发，促进毒杂草型退化草地的恢复。     

野生型斜茎黄芪内生真菌分离鉴定及苦马豆素分析

为探明青海野生型斜茎黄芪(Astragalus adsurgens)是否存在产苦马豆素内生真菌,本试验采用植物组织表面消毒法对斜茎黄芪内生真菌进行分离培养,运用形态学观察和内部转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列分析鉴定分离获得的内生真菌种属,并构建系统发育树,应用薄层层析法对斜茎黄芪和优势菌发酵液中的苦马豆素进行检测。结果显示,从斜茎黄芪中共分离出26株菌株,分属于5纲、5目、7科、7属,4株未定属。其中由根中分离的链格孢菌属(Alternaria sp.)是斜茎黄芪的优势菌属,分离率为23.08%。从薄层层析结果可以看出,斜茎黄芪和优势菌发酵液中均未检测到苦马豆素。上述结果表明,野生型斜茎黄芪不属于疯草类有毒植物,这为该植物的后续资源化利用提供重要理论依据。     

Isolation,Identification and Distribution Characteristics of Fungal Endophyte in Delphinium grandiflorum L.

In order to explore the species of endophytic fungi from a poisonous plant, Delphinium grandiflorum L. In this experiment, surface disinfection was used for separation, morphological identification was used, and phylogenetic tree was constructed using ITS sequence to determine the species of endophytic fungi. The results showed that 22 species of endophytic fungi were isolated from D. grandiflorum L., they were mainly divided into two groups according to their phylogenetic relationship, belonging to 6 classes, 6 orders, 6 families, and 7 genera. Among them, Alternaria sp. was the dominant species (accounting for 31.82% of the isolated strains, mainly distributed in flowers and leaves), endophytic fungi are most commonly distributed in flowers (accounting for 40.91% of the isolates), followed by leaves (31.82%), roots (22.73%) and stems (4.55%). The results indicated that the distribution of endophytic fungi in D. grandiflorum L. is different in different tissues.     

甘南草原不同退化草地植被和土壤微生物特性

为研究草地退化对植被和土壤微生物的影响,本试验以甘南州碌曲县高寒草地为研究对象,调查研究不同退化程度草地植被特征,并测定土壤微生物呼吸、土壤微生物量碳、土壤微生物代谢熵及土壤微生物群落结构变化。结果表明：随着草地退化程度的加重,高寒草地植物种类减少,优势植物种类发生变化,植被高度、盖度、植株数、鲜草产量下降;土壤基础呼吸和诱导呼吸、土壤微生物量碳及土壤代谢熵等指标均有不同程度的下降;土壤总磷脂脂肪酸（Phospholipid fatty acid,PLFA）、土壤细菌、放线菌含量减少,真菌含量增多,土壤微生物群落结构发生变化,压力指数增高;植被与土壤微生物各指数呈一定的相关性。本研究说明高寒草地退化过程中植被演替与土壤微生物变化密切相关。     

药用植物柽柳内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

为探明药用植物柽柳内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征,通过组织块法对内生真菌进行了分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌、黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定其抑菌活性。结果显示,从柽柳不同组织器官中分离出18株内生真菌,茎部最多,根部次之,叶部最少;经形态学初步分类鉴定归于2个目,3个科,7个属;有11株菌对2种或多种植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的61.1%,有8株内生真菌只对金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,占分离菌株总数的44.4%;活性内生真菌菌株TCEFL001分别对枸杞黑果病菌、小麦全蚀病菌以及金黄色葡萄球菌具有明显抑制作用,属于组丝核菌属。药用植物柽柳具有较为丰富的内生真菌资源,其开发和利用值得进一步探究。     

甘肃棘豆内生真菌种群多样性

将采集于青海省祁连县甘肃棘豆的茎和叶部表面消毒后分别置于黑暗和光照条件以及PDA和BDA 2种培养基上进行内生真菌分离纯化,采用形态学和分子生物学分析技术鉴定种属,并计算多样性指数。结果显示,629块植物样品中共分离到内生真菌433株,分属9个科15个属28种,不同的培养条件下优势菌属不同;多样性指数计算结果显示,香农-维纳指数（H）为1.99,均匀度指数（E）为0.60,辛普森指数（D）为0.257。结果表明,采集于青海省祁连县的甘肃棘豆内生真菌多样性比较丰富,可为今后深入探讨甘肃棘豆内生真菌遗传多样性奠定基础,并为产苦马豆素目标菌株的筛选,提供丰富的内生真菌后备菌株。     

宁夏白芨滩国家级自然保护区苦豆子内生真菌多样性及生态分布

为探索宁夏干旱荒漠区苦豆子（Sophora alopecuroides L.）内生真菌的多样性及区系组成,为苦豆子内生真菌的合理开发和利用提供理论依据。从宁夏白芨滩国家级自然保护区不同植被和土壤类型的6个样区采集苦豆子样品30份,采用组织匀浆法从植株的根、茎、叶和种子中分离内生真菌,根据培养性状、菌落、孢子等形态特征,结合rDNA-ITS序列分析对菌株进行鉴定;根据内生真菌的相对频率、物种多样性指数、丰富度指数和相似性系数分析其区系组成特点。结果表明,从30份样品中共分离得到内生真菌213株,分别属于19个属,其中镰刀菌属（Fusarium）、链格孢属（Alternaria）和茎点霉属（Phoma）为优势属。苦豆子内生真菌的分布具有一定的组织特异性,根部的内生真菌数量高于其他部位,茎部内生真菌多样性指数最高。植被类型中,沙生植被草原（样区Ⅴ）分离的内生真菌物种多样性指数最高,而荒漠草原（样区Ⅲ）最低。荒漠草原（样区Ⅰ）和沙生植被草原（样区Ⅴ）内生真菌群落有密切的相似性。可见,苦豆子蕴含丰富的内生真菌资源,其内生真菌具有很高的宿主特异性,且分布受生境影响。     

青藏高原不同海拔梯度黄花棘豆内生真菌多样性研究

为了分析不同海拔梯度黄花棘豆（Oxytropis ochrocephala）内生真菌的多样性及群落结构,进而为调控其主要成分-苦马豆素产量提供新的途径。本试验采用高通量测序技术测定青藏高原不同海拔梯度（2 512,3 005,3 490,3 977和4 493 m）黄花棘豆中内生真菌的ITS序列,观测真菌多样性和群落组成随海拔升高的变化情况,并运用CANOCO 5.0软件对真菌优势群落与植物营养和土壤环境因子间的关系进行冗余分析（Redundancy analysis,RDA）。结果表明：不同海拔梯度植物营养成分及土壤理化性质间均差异显著;从5个海拔梯度的黄花棘豆的样本中获得3615854条ITS序列,在97%序列相似性基础上可划分为750个分类单位（Operational Taxonomic Units,OTUs）。真菌群落的丰富度（Chao1）指数以海拔4 493 m最高,为254.10,而多样性（Shannon）指数以海拔3 005 m最高,为3.05。子囊菌门（Ascomycota）和担子菌门（Basidiomycota）是青藏高原黄花棘豆内生真菌的优势类群。RDA分析结果显示,真菌优势类群与海拔、粗灰分和土壤有机碳呈极显著相关（P<0.01）,与氮、磷和无氮浸出物呈显著相关（P<0.05）。海拔、植物营养及土壤养分含量均会影响黄花棘豆内生真菌多样性。     

二月兰种带真菌分离与鉴定

种带真菌是植物病害的重要传播途径,本研究以重要绿肥作物二月兰（Orychophragmus violaceus）为研究对象,通过室内分离培养、形态学和分子学鉴定,旨在明确二月兰种带真菌种类,探讨其种带真菌与田间病害发生的相关性。试验结果获得二月兰种带真菌5属7种,分别为链格孢属链格孢菌（Alternaria alternata）,芸薹生链格孢（A. brassicicola）,细极链格孢（A. tenuissima）,附球菌属黑附球菌（Epicoccum nigrum）,镰刀菌属变红镰刀菌（Fusarium incarnatum）,哈氏霉属顶孢哈氏霉（Harzia acremonioides）,细基格孢属（Ulocladium sp.）真菌;其中芸薹生链格孢是导致田间二月兰叶斑病的病原。通过高通量测序得到二月兰种带真菌25属30种,包括常见致病菌芸苔链格孢、十字花科白粉菌（Erysiphe cruciferarum）、孔状短小茎点霉（Phoma exigua var. exigua）、粉红单端孢（Trichothecium roseum）和大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）等。可见,二月兰种带真菌多为常见致病菌,应进一步开展其致病性研究,关注种带真菌与田间病害发生的相关性,据此研发防治技术。