华南地区牛结节性皮肤病病毒全基因组测序及分析

为了对2020年我国华南地区牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)疫情进行溯源调查，本研究采用商品化检测试剂盒和透射电镜对2份华南地区疑似感染的牛皮肤结节组织样本进行鉴定，利用高通量测序技术进行病毒全基因组测序，并对其进行序列比对、遗传进化和病毒重组分析。qPCR检测结果显示2份样本均为牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)阳性，电镜观察到典型LSDV病毒粒子形态，将其命名为China/GD02/2020株和China/GX01/2020株，获得全基因组序列上传GenBank获得登录号分别为OM803091和OM803092。对病毒全基因组序列比对及遗传进化分析显示GD02和GX01株的核苷酸相似性达到99.99%,并与2020年中国台湾、中国香港和越南的LSDV分离株处于进化树的同一小分支，且均归属为重组病毒。病毒重组分析表明2株病毒的主要亲本为南非疫苗株(Neethling vaccine LW 1959),次要亲本为摩洛哥从牛分离的田间株(LSD/KSGP 0240/Morocco/2017)和南非野毒株(Ne...     

牛结节性皮肤病诊断方法研究进展

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)引起的急性、亚急性传染病。我国于2019年8月在新疆伊犁地区首次确诊该病。快速准确检测是防控该病的关键。目前,应用常规PCR、实时荧光定量PCR、高分辨率熔解曲线分析、环介导等温扩增等分子检测方法,已实现了LSDV与其同属不同种病毒的通用检测和鉴别检测以及LSDV野毒株与疫苗株的区分;应用病毒中和试验、酶联免疫吸附(ELISA)和蛋白印迹试验(WB)等免疫学方法,可进行羊痘病毒属的特异性抗原与抗体检测,而对于LSDV特异性抗体检测方法尚有待研究。LSD作为一种新传入我国的外来动物疫病,有必要运用快速准确的分子或免疫学检测方法加强监测。本文概述了LSD诊断方法研究进展,为我国LSD诊断技术研发提供参考。     

牛结节性皮肤病病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用

牛结节性皮肤病(lumpy skin disease, LSD)是近年来我国新出现的一种牛传染性疾病。本研究根据LSD病毒(LSDV)的LSD022基因保守区域,设计出引物和探针,经过反应条件优化,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,测试了其敏感性、特异性和重复性。结果发现,本方法敏感性达到15 copies/μL,不与其他牛病病毒和山羊痘弱毒疫苗AV41发生反应,变异系数均小于3%。用本方法和OIE推荐的普通PCR方法检测发病牛场94份临床样品,LSDV检出率分别为62%和37%,其中阳性样品2种方法检测符合率为96.7%,说明本方法敏感性、特异性和重复性较好,可用于LSDV检测。     

牛结节性皮肤病流行调查及防控措施

牛结节性皮肤病(LSD)是一种由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的牛全身性感染疾病,临床上以皮肤出现结节为显著特征.该病的易感动物为各品种牛,严重影响牛的正常生产发育.2020年7月百色市乐业县和田林县相继发生LSD疫情,本文梳理了这两起疫情的发病原因、流行状况及疫情处置经验,提出通过采取监测排查、扑杀无害化处理、消...     

牛结节性皮肤病及其检测方法研究进展

2019年8月,我国首次在新疆地区确诊牛结节性皮肤病(lumpy skin disease,LSD)。为加强对LSD的认知,继而及早制定监测与防控措施,本文概述了该病的病原学、临床症状、免疫应答等,分析了近些年该病的检测方法,提出尽早建立标准诊断技术,对防疫人员及养殖者开展培训和宣传,建立疫苗储备等建议,以期为我国防控LSD提供技术支持。     

牛疙瘩皮肤病病毒ORF132基因的克隆及其原核表达

为原核表达牛疙瘩皮肤病病毒(LDSV) ORF132并对该基因进行生物信息学分析,本研究采用PCR扩增LSDV的ORF132基因,将其亚克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒pGEX-LSDV-ORF132.生物信息学分析表明,LSDV的ORF132与Neethling vaccine LW1959株LW132、NI-2490株LSDV132和NW-LW株LD132的相应推导氨基酸同源性分别为100％、100％和94.4％,与山羊痘病毒、绵羊痘病毒相应推导氨基酸的同源性为20.7 ％～36％.SDS-PAGE和western blot分析表明,pGEX-LSDV-ORF 132在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导主要以包涵体形式存在,其重组蛋白大小约为48.95ku,并且与特异性抗体具有抗原反应活性.     

牛结节性皮肤病病毒研究进展

牛结节性皮肤病(LSD)在全世界范围内均有流行和记载,对我国养牛业构成了严重的威胁。接种疫苗是目前防控LSDV最有效的方法,其中减毒活疫苗在许多国家均有使用。近年研究表明,LSDV活疫苗的使用会造成疫苗重组病毒的流行,接种后会引起动物不同程度的不良反应。对LSDV的病原学特征、分离鉴定方法、流行病学的情况、检测方法以及LSDV疫苗的研究进展进行了阐述,以期为牛结节性皮肤病的免疫预防以及鉴别诊断提供研究思路。     

牛结节性皮肤病病毒感染MDBK细胞后转录组差异表达分析

旨在探索牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus,LSDV)与宿主细胞的相互作用,采集了具有典型临床症状的牛皮肤病变组织,接种MDBK细胞进行病毒分离,采用透射电镜观察病变组织及病毒感染后的MDBK细胞,同时对感染后24 h的MDBK细胞进行转录组学分析,筛选差异表达基因并将其按功能分类,分...     

中国山羊痘弱毒疫苗AV41株基因组分子标记的比较分析

为鉴别我国山羊痘病毒(GTPV)弱毒疫苗AV41株与牛结节性皮肤病病毒(LSDV)野毒株,运用生物信息学方法将AV41株基因组全序列与GenBank中已发表的LSDV、GTPV和绵羊痘病毒(SPPV)基因组进行比较,筛选AV41株基因组分子标记.采用我国不同厂家来源的AV41株疫苗测序验证分子标记相关序列,并与我国LS...     

黄牛结节性皮肤病的分子诊断及防控措施

近年在云南多地流行一种以皮肤广泛性结节为特征的牛传染病，部分患牛出现死亡，给养殖户造成重大经济损失。为尽快采取有效防控措施，有必要明确是否为结节性皮肤病病毒(LSDV)感染。本研究从红河州某黄牛养殖场采集11份病牛及康复牛的皮肤结节组织样本，针对LSDV基因组5′端基因设计特异性引物进行PCR扩增，随后对扩增产物采取TA克隆、DNA测序及在线比对分析。结果显示，有2份样品扩增得到与预期大小相符的基因片段，该序列与GenBank收录的LSDV参考毒株同源性为98.0%～100.0%。结果证实该牛场发生牛结节性皮肤病，随后建议养殖户给未染疫牛紧急接种绵羊痘疫苗，取得良好的防控效果。     

Molecular characterization and phylogenetic analysis of lumpy skin disease in Egypt

Lumpy skin disease (LSD) is an infectious viral disease affecting cattle, cause severe economic losses. In the last few years, the disease is widely distributed in many countries in the Middle East, including Egypt. This study aimed to determine the genetic character of LSDV circulating in some governorates in Egypt and its relation with other LSDVs and vaccine strains in GenBank. A total of 50 skin nodules and 50 blood samples were collected from clinically affected cattle to detect LSDV using PCR targeting the P32 gene. The positive samples were characterized using PCR targeting the GPCR gene. The amplified products of four samples detected in the skin nodule of cattle from Alexandria and Kafr ElSheikh governorates were sequenced, and the phylogenetic tree was constructed. Out of 100 analyzed samples, 70 samples were positive for LSDV by PCR assay. In addition, the sequence alignment of the obtained LSDV strains detected in the Alexandria governorate showed high similarity to the LSDV genome (MN995838). In contrast, LSDV strains from Kafr ElSheikh governorate revealed high similarity and the previous Egyptian strain (MG970343), which was isolated from cattle in Sharkia governorate in 2016. Also, the phylogenetic analysis confirmed that one of the LSDV strain (LC601598) from Alexandria is closely related to the LSDV of Menofia/Egypt/2019 (MN271722), while another one (LC601597) is closely related to vaccine strains of LSDV. Moreover, the LSDV strains from Kafr Elsheikh showed closely related to previous LSDV strains isolated from Menofia (MG970343) and Dakahlia (KP071936) governorates and clustered with other LSDV strains in a distinct cluster. This information is for understanding the epidemiology of LSDV and supporting the establishment of an efficient control program for the disease.     

牛结节性皮肤病及其病原检测方法研究进展

牛结节性皮肤病(LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的一种传染病.该病起源于非洲,在撒哈拉和马达加斯加呈地方流行,欧美国家鲜有发生,我国境内尚无牛结节性皮肤病.在疫病流行的非洲等地区和国家,该病的检测技术主要有病原分离鉴定、常规血清学检测和分子生物学检测.对于没有该病发生的地区和国家,有学者应用有交叉反应的同...     

牛结节性皮肤病病毒实验室检测方法研究进展

牛结节性皮肤病(LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的以发热、消瘦、皮肤水肿、局部形成坚硬的结节或溃疡、淋巴结肿大等为主要特征的急性、亚急性传染病.本病目前尚无特效治疗药物,疫苗接种是当前主要的防控措施,但我国目前并没有针对该病的疫苗,因此建立快速准确的检测方法显得尤为重要.本文从该病的病毒分离和鉴定、血清学...     

牛结节性皮肤病的流行与防控

牛结节性皮肤病(LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(LSDV)引起的一种牛急性、亚急性病毒性传染病,临床主要表现为发热,皮肤出现结节,母牛流产、产奶量下降,公牛不育。文章对牛结节性皮肤病的病原学、流行病学、临床症状及病理变化、诊断、防控措施等方面进行了较全而的阐述,以期为该病的诊断和防控工作提供参考。     

新疆伊犁州首起牛结节性皮肤病疫情的诊断及处置

2019年8月,在新疆伊犁州察布查尔县、伊宁市、霍城县的牛群中发现牛皮肤上长满大小不等的肿胀结节,伴有体温升高等临床症状,并有1头牛死亡。随后专家赶赴现场开展临床诊断和流行病学调查。根据病牛临床症状和剖检变化,初步判定为牛结节性皮肤病(LSD);采集发病牛样品,包括各种皮肤结节和血清,并采集肺脏、脾脏、淋巴结等脏器,送至省级实验室开展病原学、血清学检测,同时送至国家外来动物疫病研究中心确诊。省级实验室荧光PCR检测显示,发病牛样品为LSD病毒核酸阳性;ELISA检测显示,有16份牛血清LSD病毒抗体阳性。经国家外来动物疫病研究中心检测,送检的疑似病料确诊为LSD病毒核酸阳性,这是我国首起LSD疫情。通过做好疫源追踪、消毒灭源、疫情解封风险评估,同时在新疆伊犁州使用山羊痘疫苗紧急免疫防治LSD,后期持续临床监测显示没有新的疫情发生。     

The isolation of lumpy skin disease virus and bovine herpesvirus-4 from cattle in Egypt

Lumpy skin disease (LSD) virus (LSDV) was isolated for the first time from cattle in Egypt in 2 disease outbreaks. Bovine herpesvirus-4 (BHV-4) and LSDV were detected in a pooled sample from the first outbreak (Suez). Only LSDV was isolated from the second outbreak (Ismalia). The capripoxviruses were identified as LSDV by neutralization with specific antiserum and by their ability to produce generalized LSD in experimentally inoculated cattle.     

牛结节性皮肤病疫苗研究进展

牛结节性皮肤病可对病畜皮肤造成永久性损害，并会导致产奶量下降、生长发育迟缓、公畜不育和孕畜流产等严重后果，对经济生产具有重要影响。目前尚无治疗该病的特效药，使用安全有效的疫苗是防控该病传播的重要手段。牛结节性皮肤病弱毒活疫苗在许多国家已被成功用于该病的防控，除此之外，由于牛结节性皮肤病病毒与山羊痘病毒及绵羊痘病毒在基因组序列上的高度相似性，山羊痘病毒弱毒活疫苗和绵羊痘病毒弱毒活疫苗在许多地区也被用于该病的防控。牛结节性皮肤病病毒编码基因较多，目前尚未发现基因缺失疫苗和亚单位疫苗具有好的保护效果。近年来灭活疫苗在实验室研究中取得了较大进展，但仍需进一步大规模临床试验以证明其有效性。此外，牛结节性皮肤病病毒作为一种痘病毒，已被证明是表达多种病原微生物抗原的有效载体之一。笔者主要总结了当前牛结节性皮肤病疫苗的研究进展，对弱毒疫苗、灭活疫苗、基因缺失疫苗和亚单位疫苗的使用情况、保护效果及研究方向等方面进行了综述，以期为牛结节性皮肤病疫苗的研发和疫病的防控提供新的思路和见解。