白菜花药组织总RNA提取方法比较及其分析

以白菜花药组织为试材,利用异硫氰酸胍法和改良Tris-硼酸法提取花药总RNA。结果显示两种方法提取RNA的产量都较高,异硫氰酸胍法提取纯度低,但省时高效,适用于对模板要求低的RNA提取。而改良Tris-硼酸法提取花药RNA的产量高、质量好、纯度高,适用于mRNA差异显示及基因表达的Northern印迹等的RNA提取。     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.     

从红麻花药和花瓣中提取高质量总RNA的方法

红麻(Hibiscus cannabinus L.)花药和花瓣因含有较多的多糖、酚类等物质而较难提取高质量的RNA,本研究探索一种适用于红麻花药和花瓣高质量总RNA的方法以进行c DNA文库构建等后续试验。通过借鉴植物DNA的CTAB提取法,结合RNA的理化性质,在提取液中加入6%的β-巯基乙醇,并在开始裂解时加入1/10体积的5 mol·L-1 KAc和1/10体积的无水乙醇对去除多糖特别有效。结果显示,利用该方法得到的RNA质量高,条带清晰完整,检测OD260/280在1.8~2.1之间,OD260/230在2.0~2.6之间,产量为花药987.3 ng·μL-1,花瓣752.1 ng·μL-1。该方法提取的总RNA可直接用于m RNA纯化,c DNA文库构建及RTPCR等后续分子试验。     

文冠果败育花药和花粉发育的解剖学研究

通过对文冠果败育花药及花粉发育进行显微结构的观察,发现：败育花药缺少唇细胞;绒毡层细胞延缓解体;花粉外壁始终连续,且此处有某些物质填充,花粉内壁很厚;花粉细胞质中细胞器明显减少,淀粉粒数量少,这些异常现象影响花粉的正常发育。     

棉花总RNA的快速提取方法

介绍了一种适合于棉花各种组织的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点，且所提取的RNA样品质量较高，可直接用于cDNA合成、RNA dut blot等分子生物学操作。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。     

一种改进的苹果总RNA高效提取方法

在改进的CTAB提取法基础上,结合总RNA的LiCl沉淀法,摸索出了一套适合苹果组织总RNA提取和纯化的方法。该方法得到的苹果总RNA完整性好,纯度和得率高,且成本低,容易操作。解决了RNA易降解以及木本植物组织中多酚和多糖含量高导致的在提取过程中RNA被氧化和共沉淀从而导致RNA产率低的问题。     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法。[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法。[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8~2.0。将提取的叶片总RNA反转录成c DNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500 bp处。[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究。     

文冠果嫁接研究

[目的]研究影响文冠果嫁接成活率的主要因子,提高文冠果的嫁接成活率。[方法]对接穗采集地的温度、接穗保存时间、保存措施及嫁接手法进行了对比试验,[结果]接穗保存措施、嫁接人员操作技术和嫁接手法直接影响文冠果嫁接成活率。在一定时间和温度范围内,接穗保存时间和采集地温度对文冠果嫁接成活率影响不显著。[结论]为文冠果的选优繁优提供技术参考。     

文冠果造林技术研究

结合陕西省富县的生态环境特点,对文冠果造林技术进行了研究,结果表明,黄土高原文冠果造林宜采用＂阳向缓坡造林地＋鱼鳞坑整地＋轻蘸浆埂上栽植＋秋季截杆造林＂技术。该研究对文冠果在西北地区的推广应用具有重要的指导意义。     

文冠果的研究进展

综述了文冠果在繁殖技术、引种选育、生理学以及化学成分等方面的研究进展,提出了目前文冠果研究方面的不足.     

新疆木垒县文冠果物候特征研究

[目的]主要对新疆木垒县文冠果果园的25～35 a生文冠果果树生物学特性、文冠果的物候期、开花结果习性、果实类型、树体结构等进行观察研究。[方法]采用测量法测定文冠果生育状况,即每棵树的树体结构、果实种类、种子数量。用称重法测定种子重量和单株产量。[结果]因倒春寒、春季持续低温等气候因素的影响,文冠果树芽萌动期、芽膨大期等物候期出现明显的差异,但是果实成熟期和落叶期基本一致;该园文冠果果实类型有3种:结3裂果的树占总株数88%～90%;结3裂果、4裂果的树占7%～8%;结3裂、4裂、5裂果的树占3%～4%;采取修剪技术可使文冠果产量明显提高。[结论]木垒县文冠果种植园管理粗放,产量较低,果实质量也不高,因此应制定科学合理的栽培技术和管理措施。     

文冠果DNA提取及RAPD反应体系的优化

以山西省20个县的文冠果为材料,采用改良的CTAB法提取文冠果基因组DNA,并对文冠果RAPD分析的最佳反应体系进行优化。结果表明,文冠果RAPD分析的最适反应体系为:PCR扩增的总体积为20μL,包括30ng的模板DNA,10×PCR buffer 2μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,0.1mmol.L-1dNTP,Taq酶1U,不足的体积用超纯水补足。扩增程序为:94℃预变性120s,94℃变性30s,36.9℃退火45s,72℃延伸90s,45个循环后在72℃延伸300s,结束后在4℃条件下保存。在此最佳反应条件下,RAPD分析具有良好的稳定性和可重复性。     

文冠果人工林根际土壤真菌和根系内生真菌群落多样性1）

文冠果（Xanthoceras sorbifolia Bunge）根际土壤和根系内生真菌的多样性与土壤养分变化具有相关性。以人工文冠果林为研究对象,采集根际土壤和细根并提取DNA,采用Illumina Miseq高通量测序技术分析真菌rDNA的ITS1区域,同时测定了根际土壤的N、P和有机质等因子,以分析文冠果林根际土壤真菌和根系共生真菌与环境因子的关系。结果表明：①测序共获得clean reads有238．8104万个（土壤209．2113万个,根系295．9910万个）;在97％的相似度水平下,共获得1115个操作分类单元（ OTUs）：根际土壤真菌1028个,根系共生真菌514个,其中有59个OTUs鉴定为菌根真菌。在10～12年生林中,病原真菌数量较高,主要为镰刀菌属（ Fusa rium）、链格孢属（ Atl ernaria）及青霉属（ Penicillium）,可能与林地土壤肥力退化有关。②不同林龄文冠果根际土壤理化性质差异显著,1～2年生林土壤肥力较高,全氮、速效氮、全磷、速效磷质量分数分别为110．00、345．6、230．00、5．18 mg· kg－1,均高于5～7年生林和10～12年生林。随土壤肥力降低根内真菌OTUs个数递减。③1～2年生林根际土壤和根系内生真菌丰富度指数Chao1、均匀度指数ACE均最高。真菌群落多样性指数Simpson与全氮、速效磷质量分数呈正相关关系。可见,不同林龄文冠果人工林真菌群落存在差异,文冠果根际真菌群落与土壤环境因子之间具有相关性。     

文冠果无性繁殖技术的研究进展

综述了国内近30年在文冠果的嫁接繁殖、扦插繁殖、组织培养等繁殖技术方面的研究进展,分析现有的技术途径的效果,明确文冠果繁殖的技术中存在的问题,同时提出今后文冠果无性繁殖技术研究的重点和发展方向,为文冠果的研究和推广应用提供参考。     

干旱荒漠区文冠果扦插繁殖技术研究

[目的]探讨干旱荒漠区文冠果的扦插繁殖技术,为文冠果的扦插繁殖、驯化栽培及园林绿化应用提供理论依据。[方法]在干旱荒漠区以文冠果和ABT2号生根粉为试材,通过采用ABT2生根粉处理文冠果嫩枝插穗、硬枝插穗、根插插穗研究了ABT2生根粉不同质量浓度对文冠果嫩枝、硬枝、根插扦插生根率的影响。[结果]文冠果嫩枝扦插、硬枝扦插、根插均以ABT2生根粉质量浓度250 mg/L处理最好,扦插平均生根率分别为48.96%、35.00%、92.86%,根插生根率明显高于嫩枝扦插和硬枝扦插。[结论]在干旱荒漠区文冠果扦插繁殖以ABT2生根粉质量浓度250 mg/L处理插穗,采取根插为最好的繁殖方法。     

文冠果组织培养的玻璃化控制研究

以文冠果的茎段为材料,通过外植体取材、培养条件、细胞分裂素质量浓度、培养基中钙质量浓度4个方面控制文冠果组织培养中的玻璃化问题。结果表明:沙藏后的种子萌发的小植株的玻璃化程度较轻于多年生植株;玻璃化程度随着光照的增加而降低,最适光照为6 000 lx;随着细胞分裂素6-BA质量浓度的增加玻璃化程度加剧,其最适质量浓度为1 mg/L;随着钙质量浓度的增加玻璃化程度抑制,当钙质量浓度为880 g/L时,效果最为明显。综合以上4个方面,基本可以控制玻璃化对文冠果组培苗的影响,从而为文冠果组织培养的产业化提供了可能。     

分光光度法测定文冠果壳总皂苷含量研究

[目的]建立文冠果壳总皂苷含量的测定方法,以期推动废弃物文冠果壳综合利用。[方法]根据文冠果壳苷与香草醛-高氯酸作用后具有的特征吸收,确定最佳显色条件,用分光光度计测定文冠果壳苷的含量。[结果]测试波长为456nm,香草醛浓度5%,高氯酸体积0.8ml,反应温度80℃,反应时间30min。测定文冠果壳苷含量为0.24mg/g。[结论]该测定方法简单,可行。