禽源空肠弯曲杆菌ERIC-PCR分型及毒力因子研究

[目的] 通过对禽源空肠弯曲杆菌分子分型和毒力研究,了解禽源空肠弯曲杆菌在禽肉产品生产过程中的主要传播途径和携带的主要致病因子。[方法] 对从家禽养殖场、屠宰场等采集的720份泄殖腔拭子和禽肉表面拭子样品分离的311株空肠弯曲杆菌进行ERIC-PCR分型和16种毒力因子检测。[结果] 禽源空肠弯曲杆菌的分离率为43.19%;肉鸡生产链中空肠弯曲杆菌沿生产链传播,且有优势菌株型;90%以上分离菌株携带11种毒力基因。[结论] 肉鸡生产链中空肠弯曲杆菌存在水平传播现象,且没有外源性污染;16种毒力基因中,14种毒力基因的携带率均在50%以上。加强禽源空肠弯曲菌的监测是控制空肠弯曲菌的前提,对公共卫生具有重要意义。     

肉鸡空肠弯曲杆菌的监测与分析

本文对集约化肉鸡场空肠弯曲杆菌流行状况进行监测与分析。1 981份样品中,JM地区的肉鸡空肠弯曲杆菌阳性率为6.48%~7.48%,JZ地区的肉鸡空肠弯曲杆菌阳性率为9.45%~9.91%,JN地区的肉鸡空肠弯曲杆菌阳性率为14.6%~16.9%。17种抗菌药中,对36株肉鸡空肠弯曲菌分离株高度敏感的是:阿米卡星(86.1%)、链霉素(91.7%)、庆大霉素(94.4%)、卡那霉素(83.3%)、阿奇霉素(86.1%)、头孢噻肟(83.3%),另外有3种抗菌药对肉鸡空肠弯曲杆菌表现出较好的敏感性,分别是红霉素(61.1%)、氨苄西林(78.8%)、青霉素(69.4%),其它临床常用抗菌药对36株肉鸡空肠弯曲杆菌则表现出较强的耐药性。JM地区空肠弯曲杆菌分离株的耐药谱为7耐至10耐,JZ地区空肠弯曲杆菌分离株的耐药谱为8耐至12耐,JN地区空肠弯曲杆菌分离株的耐药谱为7耐至11耐。研究结果证明,不同地区肉鸡中空肠弯曲杆菌的流行和耐药状况呈现多样化。     

脂蛋白Cj0091执行空肠弯曲杆菌的黏附功能

美国爱荷华州立大学科研人员对空肠弯曲杆菌的脂蛋白功能进行了研究。DNA微阵列表明,空肠弯曲杆菌转录调控子CmeR,可抑制多药外排泵cmeABC的表达,激活3个基因操纵子(cj0089、cj0090、cj0091)表达编码脂蛋白。     

基于TaqMan探针的Real-time PCR定量检测空肠弯曲杆菌

空肠弯曲杆菌 (Campylobacterjejuni ,C .jijuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态 (Viablebutnonculturable ,VNC) ,所以传统的生化鉴定结果并不一定可靠 ,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。在本文基于LightCycler为平台 ,建立一种基于TaqMan探针的Real_timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时 ,发现所有空肠弯曲杆菌 (11株 )都呈阳性 ,所有其它弯曲菌 (3株 )和其它菌株 (5株 )都是阴性。整个检测过程 6 0min内可以完成 ,检测限度为5CFU ,标准曲线的相关系数为 0 .988。结果表明荧光定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法 ,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。     

应用SYBR Green I的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。     

猪、鸡间空肠弯曲杆菌感染分布状况的调查研究

目的:对入沪28个产地(河南开封、山东青岛、江苏南通、浙江金华、上海奉贤等地)的鸡、猪进行了空肠弯曲杆菌流行分布调查,了解空肠弯曲杆菌在不同动物种间的分布状况。方法:以空肠弯曲杆菌特异性的VS1基因为扩增目标片段,对2005～2007年间在上海市三家家禽市场和五家生猪屠宰场采集的2234(鸡1015份、猪1219份)盲肠内容物样品进行PCR检测。结果:鸡盲肠内容物检出空肠弯曲杆菌阳性的样品288份,平均阳性率为28.4%,猪盲肠内容物检出空肠弯曲杆菌阳性的样品420份,平均阳性率为34.4%。结论:28个产地的鸡、猪均有空肠弯曲杆菌感染,不同产地、种属其感染率和发病情况不同,经统计学分析显示,猪的感染阳性率显著高于鸡,上海市内(奉贤等地)来源的畜禽感染阳性率显著低于浙江金华、江苏海门、江苏张家港和江苏大丰等外省市地区。     

一种副猪嗜血杆菌新型分型方法——多基因位点序列分型

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)为革兰氏阴性菌,属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属,是猪副猪嗜血杆菌病的主要致病菌.应用多基因位点序列分型技术对副猪嗜血杆菌进行分型,具有简便快速、重复性强、分辨率较高、所得数据标准等优点.并且还可通过互联网实现实验室间数据共享及比较.通过试验对多基因位点序列分型(MLST)技术的原理、方法及结果进行了阐述.以期为副猪嗜血杆菌的分型提供参考.     

雪貂空肠弯曲杆菌的分离与鉴定

从试验用雪貂分离到一株弯曲杆菌,通过菌落、菌体形态、生化特征、培养特性等生物学特性和PCR方法对所分离菌株进行鉴定,分离株经空肠弯曲杆菌VS1基因特异性引物PCR扩增为阳性,测序结果显示与空肠弯曲杆菌序列同源性达100%,结合生物学特性和PCR结果确定所分离菌株为空肠弯曲杆菌,该菌的分离鉴定为雪貂微生物检测标准的建立提供了理论依据。     

禽源空肠弯曲杆菌的分离与双重PCR鉴定

以空肠弯曲杆菌保守基因mapA和hipO基因为靶基因,建立空肠弯曲菌的双重PCR方法,该方法只对空肠弯曲菌有特异性,对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等则不能扩增出特异性片段。利用该方法对从市场、养殖鸡和屠宰场的禽源空肠弯曲菌进行了分离和鉴定,平均分离率为35.8%,PCR鉴定结果与生化鉴定结果相一致,说明建立的双重PCR鉴定方法具有灵敏、特异的特点,可节省传统生化鉴定所耗费的时间,为空肠弯曲菌的检测提供新方法。     

国内外动物食品安全的最新动态

1英国食品规范管理局制定空肠弯曲杆菌危害管理机制英国食品规范管理局(FSA)正在呼吁加强食品安全管理,实行对空肠弯曲杆菌进行分子生物学的检测和溯源调查。在英国,空肠弯曲杆菌是引起     

生物发光技术监测家禽垫料中弯曲杆菌生长

<正>美国俄亥俄州农业研究与发展中心科研人员利用生物发光技术建立了一种简便、敏感、快速监测家禽各种饲养环境中弯曲杆菌的新方法。研究人员将携带发光基因(luxCDABE)的穿梭质粒插入空肠弯曲杆菌     

空肠弯曲杆菌特异性基因研究综述

空肠弯曲杆菌是人兽共患病原菌,对公共卫生安全和畜牧业,特别是养鸡产业造成一定危害。本文从基因研究的角度出发,对空肠弯曲杆菌的病原生长与流行病学特征、致病机理、致病基因、检测技术、耐药性、防治等方面的研究现状进行了综述,以期对我国空肠弯曲菌肠炎的防治工作提供借鉴。     

基于hipO基因的环介导等温核酸扩增技术检测食源性空肠弯曲菌

空肠弯曲杆菌是人细菌性胃肠炎的常见食源性致病菌之一,严重危害人类的健康,建立快速精准检测食源性空肠弯曲杆菌的方法,对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究建立了一种可视化、低成本基于hipO基因的环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测空肠弯曲菌的方法。该LAMP方法检测空肠弯曲菌CJFX01基因组DNA为阳性,而对肠出血性大肠杆菌O157:H7、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌、小肠结肠炎耶尔森菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等食源性致病菌和胸膜肺炎放线杆菌Aha01、副猪嗜血杆菌Ahh01、多杀性巴氏杆菌Ahm03、猪链球菌Ahs02、猪丹毒丝菌Ahe01、支气管败血波氏杆菌Ahb01等猪源致病菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP检测空肠弯曲杆菌的检测限为5.4×10¹ CFU/mL,而基于F3/B3引物对常规PCR的检测限为5.4×10⁶ CFU/mL,即LAMP检测空肠弯曲杆菌的灵敏度比常规PCR高100 000倍。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、可视化、低成本、特异性好和灵敏度...     

空肠弯曲杆菌病在食物链的传播路径

空肠弯曲杆菌是一种广泛分布的人兽共患病原体,它是发达国家细菌性胃肠炎的主要病原,系统发育研究显示,对人类有致病性的弯曲杆菌基因型最可能来自于非家畜来源。英国兰卡斯特大学采用多位点测序分型技术对1231个来自病人的空肠弯曲杆菌分离株进行了鉴定。他们模拟了空肠弯曲杆菌的DNA序列进化以及细菌在宿主和环境闻的传播情况。结果表明,高达97％的散发病例均归结于提供肉产品的农场动物。     

空肠弯曲杆菌耐药性及其主要相关基因初步分析

从307份鸡盲肠内容物样品中分离到47株空肠弯曲杆菌,并测定这些空肠弯曲杆菌耐药性,结果显示对喹诺酮类药(环丙沙星)耐药性为31.9%;对氨苄青霉素,克林霉素和红霉素耐药性较高,分别达到85.1%、83.0%和83.0%;而对痢特灵和庆大霉素则较为敏感,敏感度分别为85.1%和74.5%。有89.4%的菌株显示多重耐药性。利用MAMAPCR技术,对获得的47株空肠弯曲杆菌进行检测,结果显示对环丙沙星耐药的15株空肠弯曲杆菌均检测出其在gyrA基因257位发生点突变,30株对喹诺酮药物敏感的菌株均未检出。另外2株对环丙沙星耐药的菌株,有1株检测出点突变。     

江苏地区鸡源弯曲杆菌分离鉴定及耐药性研究

为了解江苏地区鸡源弯曲杆菌的流行和耐药状况,采集养殖场及农贸市场鸡泄殖腔棉拭子样品和超市鸡肉样品进行空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌的分离与鉴定,对分离菌株采用纸片扩散法检测其耐药情况。结果显示:泄殖腔棉拭子样品弯曲杆菌总分离率为38.68%(205/530),其中空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌阳性率分别为27.36%(145/530)和11.32%(60/530);鸡肉样品中弯曲杆菌总分离率为45.33%(68/150),其中空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌阳性率分别为30.00%(45/150)和15.33%(23/150)。所有样品空肠弯曲杆菌分离率极显著高于结肠弯曲杆菌(P0.01),就泄殖腔棉拭子样品而言,养殖场样品弯曲杆菌总分离率显著高于农贸市场样品(P0.05),泄殖腔棉拭子样品与鸡肉样品弯曲杆菌分离率无显著性差异(P0.05)。耐药检测结果显示,弯曲杆菌对9大类27种抗生素耐药率在80%以上的有6种,分别为头孢噻肟、头孢曲松、诺氟沙星、环丙沙星、甲氧苄胺嘧啶和克林霉素,所有菌株表现出多重耐药现象,耐药谱主要集中在12耐、13耐和14耐。研究表明,江苏地区鸡源弯曲杆菌流行普遍,分离菌株存在耐药现象且多重耐药情况较严重。     

鸡空肠弯曲杆菌病的诊治

弯曲杆菌病是由弯曲杆菌引起的家禽、野禽、哺乳动物及人类共患的一种重要传染病。空肠弯曲杆菌作为人类肠炎的病因,仅次于沙门氏菌和痢疾杆菌。禽类弯曲杆菌感染十分普遍,鸡弯曲杆菌病又称鸡弧菌性肝炎,是由空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌和鸥弯曲杆菌引起的细菌性疾病。其中空肠弯曲杆菌致病力最强,引起肝脏病变最严重,笔者现将遇到的鸡空肠弯曲杆菌病的诊治情况介绍如下。     

胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌毒力基因携带状况调查

为了了解胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌的毒力基因携带和流行情况,对胶东半岛不同来源的样品进行本菌的分离鉴定,用PCR法对分离菌株的14种毒力基因进行了检测。结果:胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌的平均分离率为45%。14种检测的毒力因子cia B、rac R、dna K、pld A、cdt A、cdt B、cdt C、neu B1、che W、grp E、che Y、fla A、peb1A cad F的检出率分别为96.26%、97.2%、100%、100%、76.64%、99.07%、99.07%、4.67%、99.07%、71.96%、98.13%、100%、99.07%和99.07%。结果表明,胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌毒力基因携带率高,不同毒力基因携带率差异大。所以,加强空肠弯曲杆菌毒力基因的监测,对公共卫生安全意义重大。     

鸡杆菌中国分离株RAPD分型方法的建立与应用

对9株鸡杆菌进行了血清分型,并应用8条随机引物对该9株鸡杆菌和3个参考菌株(1株巴氏杆菌、1株大肠杆菌和1株链球菌)共12株细菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究。结果显示,9株鸡杆菌分别属于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8条随机引物中有3条呈现良好的多态性和稳定性,可产生差异显著的指纹图谱。采用SPSS13.0软件分析了不同菌株间的遗传距离,并依此绘制出菌株间的亲缘关系树状图。12株细菌共分为4个聚类群,其中9株鸡杆菌位于同一聚类群中,且又可分为4个聚类亚群。3个参考菌株各自形成一个独立的聚类群。不同血清型的鸡杆菌菌株具有相似的指纹图,同一血清型的菌株指纹图存在差异。结果表明,RAPD基因分型是目前鸡杆菌分子流行病学调查及病原分离鉴定比较理想的方法之一。     

动物源性空肠弯曲杆菌耐药性地域差异性分析

从上海家禽批发市场采集鸡盲肠内容物样品,分离到47株空肠弯曲杆菌,从上海屠宰场采集猪盲肠内容物样品,分离到99株空肠弯曲杆菌,分别测定分析了这些空肠弯曲杆菌耐药性; 通过对不同产地鸡源空肠弯曲杆菌耐药性状况比较结果显示,江苏南通、江苏海门和浙江金华分离到的鸡源空肠弯曲杆菌对9种抗生素(见表1)都有不同程度的耐药性,对万古霉素、红霉素和氨苄青霉素的耐药性达到100%。江苏海门、上海崇明和浙江温岭、金华等地的菌株分别对克林霉素和氨苄青霉素显示了高耐药性,分别达到90%、100%;通过对不同产地猪源空肠弯曲杆菌耐药性状况比较结果显示,山东莘县分离到的猪源空肠弯曲杆菌对9种抗生素都有不同程度的耐药性,对万古霉素、红霉素、克林霉素和氨苄青霉素的耐药性达到80%以上。河南孟津和安徽淮北分离到的猪源空肠弯曲杆菌对除头孢拉定之外的8种抗生素都有不同程度的耐药性,对氨苄青霉素的耐药性达到100%。结果显示动物源性空肠弯曲杆菌耐药性存在明显的地域差异性。