马传贫病毒结构蛋白分子生物学研究进展

马传贫病毒为正链ＲＮＡ病毒 ,具有反转录病毒特有结构。病毒ＲＮＡ基因组两端是完全相同的重复区 (Ｒ区 ) ,在 5′Ｒ下游是 5′独特区 (Ｕ5 ) ;3′端Ｒ区上游是 3′独特区 (Ｕ3)。基因组上游的Ｒ -Ｕ5和下游的Ｕ3-Ｒ构成了病毒基因组两端的非编码区。非蛋白编码区均较短 ,大小分别为Ｒ 78ｎｔ,Ｕ5 36ｎｔ,Ｕ32 0 7ｎｔ。两端非编码区中间是三个较大的开放阅读框架 ,分别编码病毒三个主要结构蛋白ＧａｇＰｏｌ和Ｅｎｖ。其顺序从 5′到 3′端依次是 :ｇａｇ[ｇｒｏｕｐａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎ]基因编码的群特异性抗原蛋白 ,表达…     

马传贫病毒与人免疫缺陷病毒的形态结构比较

马传贫病毒(EIAV)和人免疫缺陷病毒(HIV)同属于反转录病毒科的慢病毒属成员。目前,反转录病毒科包括七个属:哺乳动物B型肿瘤病毒属;哺乳动物C型反转录病毒属;禽C型反转录病毒属;D型反转录病毒属;泡沫病毒属;HTLV-BLV属和慢病毒属。在慢病毒属中主要包括有:梅地-维斯纳病毒、马传贫病毒、牛免疫缺陷病毒、山羊关节炎-脑炎病毒、人免疫缺陷病毒和猴免疫缺陷病毒等。它们是一组形态结构相关的病毒群。EIAV与HIV在病毒分类学上具有特殊的亲缘性。     

马传贫病毒的基因组成及其结构模型

自1976年 Howardp 等人建议将马传贫病毒(EIAV)划归反录病毒科的慢病毒亚科以来,人们对该病毒的形态结构、基因组成和蛋白序列分析都进行了大量研究。这些结果表明:EIAV 同慢病毒亚科的其它成员,如人的免疫缺陷综合症病毒(HIV)和维斯纳病毒之间,无论在形态学、血清学关系、基因组成和序列同源性等方面都有相似之处。     

应用固相免疫放射分析检查马传贫病毒抗体的研究

参子固相免疫放射分析(SPRIA)试验的各成分的适宜条件是:固相载体抗原浓度为200～300μg/m1;马传贫阳性、阴性血清及被检样品为1:100稀释;~(125)Ⅰ-兔抗马血清 IgG 的适宜工作浓度为1000万 cpm/ml.检查了马传贫弱毒疫苗接种马以及牛白血病等疾病阳性血清证明,SPRIA 具有高的敏感性和特异性.     

豫西地区减蛋综合征病毒基因组酶切图谱分析

从豫西地区发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒 (EDSV) ,经非免疫鸡胚增殖后 ,用差速离心法纯化和蛋白酶 K法抽提 ,得到全长约 34.3kb的 EDSV基因组。分别以 Hind 、Bam HI、Eco RI及 Bam HI Eco RI对 EDSV -g DNA进行限制性酶切 ,分别得到 10、4、4和 7个片段。用 10 g/ L琼脂糖凝胶电泳酶切样品并以凝胶成像系统对酶切片段的大小和分子量进行测定。将这些结果与 NE4、WPDV2 0 5、AV-12 7标准株及 B8/ 78株基因组 DNA由相同酶切的结果进行比较 ,发现豫西地区 EDSV与AV- 12 7和 B8/ 78较为相似 ,但也存在微小差别 ,与其他毒株的差别较大     

潜伏感染期猪伪狂犬病病毒基因组甲基化预测及图谱测定

为研究DNA甲基化在PRV潜伏感染中的作用,本研究首先对PRV全基因组甲基化状态进行预测,再采用亚硫酸氢盐PCR测序的方法检测急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域的甲基化状态。结果显示,急性期及潜伏感染期IE180及EP0启动子区及转录起始位点附近区域均存在散在的甲基化位点,并未发现广泛的甲基化区域,与预测结果一致。结果表明,潜伏感染期间PRV基因组发生甲基化的可能性很小,进而可知DNA甲基化在PRV潜伏感染过程中未起到关键的作用。     

应用冷冻蚀刻技术对马传贫病毒的形态结构的研究

关于马传贫病毒的形态结构,我们已经用“超薄切片法”、“负性染色法”、“抗原抗体复合物的免疫电镜法”、“扫描电镜的临界点干燥法”等进行了研究。通过这些技术方法可以得出:马传贫病毒的形态近似球形,     

家蚕核型多角体病毒lef5基因对病毒基因组复制和转录调控的影响

lef5是杆状病毒的核心基因之一。构建家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef5基因敲除型病毒lef5-ko-Bacmid和补回型病毒lef5-re-Bacmid,研究lef5基因在BmNPV的基因组DNA复制及各时期基因转录调控中的作用。透射电子显微镜下观察lef5-ko-Bacmid转染BmN细胞后不能产生具有侵染活性的病毒粒子(BV)。荧光定量PCR(qPCR)发现lef5基因缺失对病毒基因组DNA的复制没有明显影响,但会导致病毒各时期基因的转录水平显著下降。进一步通过检测由BmNPV多角体蛋白基因(polh)启动子驱动的荧光素酶活性变化,明确lef5基因对polh基因启动子的调控作用,结果表明lef5基因对polh基因启动子有显著的正调控作用。研究结果提示,lef5基因缺失后不影响BmNPV基因组DNA的复制,但会影响病毒早期、晚期、极晚期基因的转录表达。     

马传贫病毒阿根廷株接种中国马病理变化的观察

对接种 EIAV 阿根廷毒株的10匹马进行了病理解剖,病理组织和病毒抗原分布的观察。结果表明,接种阿根廷毒马出现黄染,出血素质、实质脏器肿大与渐进性坏死,胸腺萎缩、出血与水肿,股骨红髓区扩大与稀薄,铁逆转,淋巴样细胞反应,网内系活化与增生,免疫器官中的巨噬细胞及肝脏的库氏细胞有病毒抗原存在等 EIA 共有的证病性病理变化。同时,在接种阿根廷毒的马也观察到出血性素质变化不十分严重;脏器淋巴结肿大、出血、水肿十分明显,而体表淋巴结不明显;85%病例髋结节区出现褥疮样皮下缺损;80%病例各器官,尤其脏器淋巴结髓质区、门区小梁动脉内皮下层显著水肿,甚至闭锁管腔,动脉周围大面积结缔组织增生,水肿;在肾脏,90%病例弓状动脉周围大面积增生,水肿的结缔组织附近尚见有贫血梗死样的大灶性细尿管坏死;部分小动脉,尤其内皮下水肿不明显的小动脉内皮细胞胞浆中有病毒抗原存在。这些特殊的病理变化是辽毒,wyoming 毒或云南毒接种马未曾观察到的。本文就这些共性和特殊性病变产生的原因,引起的结果,及其与防制的关系等进行了讨论。     

马传贫病毒弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体变化规律研究

为研究马传贫病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体的动态变化规律,本研究通过将表达EIAV囊膜蛋白重组质粒(pcDNA-env),与表达EIAV主要结构基因gag-pol的包装质粒(pUK-gag-pol)、表达荧光素酶的转移载体(pONY8.1)共转染293T细胞,制备了EIAV假病毒粒子(EIAV-Env)。在此基础上,利用该假病毒对2匹EIAV疫苗免疫马在免疫后6个月内不同时间点的中和抗体进行检测。即将EIAV疫苗免疫马血清通过连续4倍稀释,与EIAV-Env共孵育1 h后接种ELR1-293T细胞,36 h后通过检测细胞内荧光酶活性计算不同血清样品的中和抗体滴度。结果显示,EIAV疫苗免疫马血清可以特异性地中和EIAV-Env。EIAV疫苗免疫马后,随着时间的增加其体内中和抗体滴度逐渐升高,在6个月时能够达到最高值,这提示中和抗体可能与EIAV疫苗体液免疫成熟相关。本研究为进一步深入EIAV及其疫苗诱导体液免疫保护机制的研究提供了相关的实验依据。     

猪细小病毒基因组特性的研究

<正>猪细小病毒(PPV)属于细小病毒科细小病毒属的成员。猪细小病毒病是由PPV引起的以胚胎和胎儿感染及死亡而母体本身无明显症状的一种母猪繁殖障碍性传染病。1967年,Carteright等对猪的不孕、流产、死产等进行病原学研究时首次报道了本病,并从猪的流产胎儿中分离到PPV。目前,此病在世界范围内广泛流行,是造成母猪繁殖障碍的主要病因之一。探究猪细小病毒的基因组特性对临床上防治该病毒的感染起到了至关重要的作用。最近30多年来,猪群中一直使     

马传贫病毒ELISA抗原有效成份分析及免疫学活性测定的研究

对21批马传贫病毒ELISA抗原样品,以SDS-PAGE进行组分分析及分子量测定表明,虽抗原批次不同,组分数亦不完全相同,但分子量范围却均在13600～110500道尔顿之间。通过酶联免疫电传移印渍技术(EITB)确定抗原的有效成份证明,有免疫学活性的蛋白主要是28600道尔顿组分,其次是13600道尔顿的组分。而马传贫病毒ELISA抗原免疫学活性与28600道尔顿组分的相对百分含量显著相关(P<0.01)。用特异的糖蛋白染色技术分析糖蛋白的组分表明,分子量为78000～8100及57000～5900道尔顿的两个组分呈阳性反应,但在EITB中没有表现出明显的免疫学活性。     

马传贫病毒阿根廷株接种中国马病理变化的观察

对接种ＥＩＡＶ阿根廷毒株的１０匹马进行了病理解剖，病理组织和病毒抗原分布的观察，结果表明，接种阿根廷毒马出现黄染，出血素质，裨脏器肿大与渐进性坏死，胸腺萎缩，出血与水肿，股骨红髓区扩大与稀薄，铁逆转，淋巴样细胞反应，网内系活与增生，免疫器官中的巨噬细胞及肝脏的库氏细胞有病毒抗原存在等ＥＡ共有的证病性病理变化，同时，在接种阿根廷毒的马也观察到出血性素质变化不十分严重；脏器淋巴结肿大，出血，水肿十分明     

减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析

Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ａ Ａ２ 株纯化 Ｄ Ｎ Ａ 经 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 ＰｓｔⅠ和 Ｓｐｈ Ⅰ水解后, 分别提取 Ｄ Ｎ Ａ 片段并克隆至ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ Ｓ（ ＋ ） 和ｐ Ｇ Ｅ Ｍ３ Ｚｆ （ ＋ ） 载体, 构建了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 全基因文库。根据 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 片段和基因组 Ｄ Ｎ Ａ 电泳迁移率计算, Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 基因组大小为３２９ｋｂ , 通过克隆片段酶谱鉴定, 杂交建立了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 限制性内切酶 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓｐｈ Ⅰ的物理图谱。     

Nipah病毒基因组序列

最近 ,马来西亚的科学家报道了曾在 1998～ 1999年间在马来西亚暴发并引起 10 5人死亡的 Nipah病毒 (Nipah virus,Ni V)2个分离株的基因组序列。这 2株病毒的基因组都是由 182 46个核苷酸组成 ,而且 2株病毒基因组之间只有 4个核苷酸不同。Nipah病毒的基因组比 Hendra病毒长 12个核苷酸 ,但 2种病毒基因组的前导和尾随序列 (leader and trailer sequence)长度、基因起始和终止信号、P基因编辑信号以及对核蛋白、磷蛋白、基质蛋白、融合蛋白和 RNA聚合酶等基因推导的氨基酸序列都非常接近 ,但与副粘病毒亚科中的其他成员有着明显的不同N…     

两种抗艾滋病药物对马传贫病毒的体外抑制作用

探讨了抗艾滋病病毒药物3′-叠氮3-脱氧胸腺嘧啶核苷及三氮唑核苷在马传贫病毒(EIAV)-驴胎皮肤细胞培养系统中对EIAV的抑制作用。通过细胞病变观察及培养物病毒抗原活性的测定表明,上述两种药物对EIAV有明显的抑制作用。