应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展

新城疫病毒分子生物学毒力水平研究进展肖肖郑增忍王树双综述吴时友审校（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）新城疫病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＮＤＶ）属副粘病毒科副粘病毒属成员,由囊膜、核衣壳和核酸三部分组成,其基因组为１５Ｋｂ的单股...     

新城疫病毒弱毒株分子生物学特性的研究

于１９９６年从长春地区一养鸡场分离到一株新城疫病毒（ＮＤＶ长春株）,经过病毒生物学特性的研究表明该ＮＤＶ毒株为弱毒株。将ＮＤＶ长春株纯化培养后,提取病毒ＲＮＡ,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增Ｆ基因,并测定出Ｆ基因的全部核苷酸序列为１７５８ｂｐ,编码有５５３个氨基酸残基。与国内外发表的部分ＮＤＶ病毒的强毒株和弱毒株的相同序列进行比较,其核苷酸同源性在８８．２％￣９６．７％之间,氨基酸同源性在９０．１％￣９８．１％之间,并与所有弱毒株Ｆ蛋白裂解位点区（１１２￣１１７）氨基酸序列Ｇｌｙ－Ａｒｇ／Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ相同,从基因和分子水平上进一步证明ＮＤＶ长春株为ＮＤＶ弱毒株。     

新城疫病毒F48E9株L基因的克隆及鉴定

新城疫（ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起的一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状禽类急性、高度接触性、致死性传染病，对养禽业危害极其严重。ＮＤＶ病毒粒子含有６种结构蛋白ＮＰ、Ｐ、Ｍ、Ｆ、ＨＮ和Ｌ。其中Ｌ是高分子量的ＲＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶，它与ＮＰ、Ｐ共同参与病毒ＲＮＡ的转录与复制，形成有活性的ＲＮＡ。Ｌ蛋白分子量为２２０ＫＤ，其编码基因的长度几乎占整个病毒基因组的一半，在ＮＤＶ的复制过程中起着极其重要的作用，但由于其分子量巨大，对Ｌ蛋白功能的研究一直没有大的发展。目前所知Ｌ蛋白可能在病毒的转…     

应用重组杆状病毒表达NDVF糖蛋白和预防ND

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）和家蚕核型多体病毒（ＢｍＮＰＶ）构建的杂合杆状病毒表达了鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｄ２６株的融合（Ｆ）糖蛋白，将编码Ｆ蛋白的基因插入宿主范围扩展的改良杆状病毒表达载体，重组杆状病毒ＨｙＦ１２１感染的草地贪夜蛾（ｓｆ）细胞中，表达的Ｆ蛋白定位于细胞表面，ＨｙＦ１２１感染吞蛹后，用感染蚕蛹制取抗ＮＤＶ的亚单位疫苗，这种亚单位疫苗接种鸡后可抵抗ＮＤＶ强毒的攻击。     

应用生物素标记的NDV－cDNA探针检测感染尿囊液中NDV－RNA的初步研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＮＤＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体──Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后,即成ＮＤＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＮＤＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ,而不与ＩＢＤｖ－ｄｓＲＮＡ、ＡＩＢｖ－ｓｓＲＮＡ、ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ－ｄｓＤＮＡ,ＦＰＶ－ｄｓＲＮＡ及ＡＩＬＶ－ｄｓＤＮＡ发生交叉杂交反应。试验结果表明：尽管该探钎含有编码Ｆｏ蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把ＮＤＶ的强、弱毒株区分开。这说明ＮＤＶ强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对ＮＤＶ来说具有特异性,这就为ＮＤＶ的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。     

禽流感RT—PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法,应用此法对鸡胚培养ＡＩＶ尿囊液,ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩莠试验和电镜技术作了对比,特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）,传染性氏囊病病毒（ＩＢＤ     

表达ND病毒融合蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗对ND和MD…

将新城疫病毒（ＮＤＶ）的融合蛋白（Ｆ）基因或血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）基因插入到火鸡疱疹病毒（ＦＶＴ）的一个非必需基因中，构建了重组ＨＶＴ株。ＮＤＶ抗原的表达受来自劳斯肉瘤病毒的一种强启动子的调控。１日龄腹腔内（ＩＡ）接种表达ＮＤＶ融合蛋白的重组ＨＶＴ的鸡不仅产生免疫学反应，而且在２８日龄可抵抗嗜神经ＮＤＶ强毒株Ｔｅｘａｓ ＧＢ的致死性肌肉攻毒（保护率＞９０％）。表达ＮＤＶ ＨＮ的重组ＨＶＴ仅能提     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的…

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ     

禽副粘病毒I型结构蛋白分析

鹅副粘病毒ＹＣ９７分离株,鸡源Ｖ９８分离株以及新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８、ＬａＳＯｔａ和Ｃ３０毒株,鸽副粘病毒ＹＺＰＮＦ２分离株经鸡胚增殖纯化后,进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳,结果显示ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株在５６ｋＤ处比另外４个毒株多出一个条带。用单抗２０１０株进行Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ转印,结果该单抗只对ＹＧ９７和Ｙ９８２个毒株的５６ｋＤ条带反应,证明这２株病毒的结构蛋白与经典的新城疫病毒有     

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础

新城疫病毒毒力强弱的分子生物学基础宋长绪（广东省兽医研究所，广州５１０６４０）刘福安（华南农业大学，广州５１０６４２）新城疫病毒（ＮＤＶ）属于副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）副粘病毒属Ⅰ型（ＰＭＶ－１），为新城疫的病原。新城疫是极易传染的...     

核衣壳蛋白及“六碱基规则”在新城疫病毒复制中的作用

新城疫病毒 (ＮＤＶ)属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒属。是一种有囊膜的单股负链ＲＮＡ病毒 ,病毒ＲＮＡ包裹于核衣壳结构中 ,病毒粒子含有 6种结构蛋白核衣壳蛋白ＮＰ(ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎ)、磷蛋白Ｐ(ｐｈｏｓｈｏｐｐｒｏｔｅｉｎ)、基质蛋白Ｍ(ｍａｔｒｉｘｐｒｏｔｅｉｎ)、融合蛋白Ｆ(ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ)、血凝素＿神经氨酸酶ＨＮ(Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ＿Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ)和ＲＮＡ依赖的ＲＮＡ聚合酶Ｌ ,其中ＮＰ、Ｐ、Ｌ外加上几种细胞的蛋白组成转录复合体。转录复合体中的核…     

以鸡痘病毒为载体的新城疫病毒重组疫苗的免疫效力

构建了表达速发型新城疫病毒（ＮＤＶ）融合蛋白（Ｆ）和血凝素－神经氨酸酶（ＨＮ）糖蛋白的鸡痘重组病毒ＴＲＯＶＡＣ－ＮＤＶ。ＳＰＦ鸡免疫试验表明，一次注射得组病毒有使鸡产生大量血凝抑制（ＨＩ）抗体。并能维持８周以上，而且重凤苗能诱导对经肌肉和呼吸道途径攻击ＮＤＶ的免疫力。带母滞病毒（ＦＰＶ）的免疫力，但ＮＤＶ的特异性体液应签水平降低。     

鸽I型副粘病毒的分离和鉴定

用分离的对鸽有致病性的４株禽副粘病毒通过电镜观察、病毒中和试验和动物回归试验结果显示,病毒粒子呈球形,直径１００￣４５０ｎｍ,表面有纤突;能凝集鸡红细胞,血凝反应能被新城疫病毒（ＮＤＶ）和鸽Ｉ型副粘病毒（ＰＰＭＶ－１）阳性血情所抑制;接种１月龄乳鸽能使其发病,出现明显症状和病变并有死亡,接种１月龄ＳＰＦ鸡不发病;能在鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦｓ）上生长,并能产生细胞病变（ＣＰＥ）;对高温敏感,在５５℃     

新城疫病毒（昌黎株）F蛋白基因的克隆和序列分析

以鸡胚尿囊液繁殖的新城疫病毒（昌黎株）,经差速离心浓缩后,提取ＲＮＡ,参考国外发表新城疫病毒Ｆ基因序列,设计并合成了一对长度皆为２６ｂｐ特异性引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出ＮＤＶ昌黎株部分Ｆ基因序列,将其插入本室构建的ＦｐＫＳ（－）,进行序列测定。序列分析表明该部分Ｆ基因长度为８１０ｂｐ,编码２６７个氨基酸,有４个半胱氨酸残基和２个糖基化位点,裂解位点区（１１２－１１７）氨基酸序列为Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｋ－Ｒ－Ｆ,与所有强毒株在这一区域的序列（Ｒ／Ｋ－Ｒ－Ｑ－Ｒ／Ｋ－Ｒ－Ｆ）相符,证明ＮＤＶ昌黎株为强毒株。     

浅谈鸡新城疫

新城疫所引起的蛋鸡产蛋率下降、肉仔鸡的后期大批死亡在我国日益突出。可以说，鸡新城疫仍然是目前危害我国养鸡业的严重疫病。一、病原及变异新城疫病毒为副粘病毒科副粘病毒属的单股ＲＮＡ病毒，有囊膜。囊膜上有纤突，含Ｈ（血凝素）、Ｎ（神经氨酸酶）糖蛋白和Ｆ糖蛋白。ＨＮ糖蛋白能识别唾液酸受体，与受体结合（非特异性），促进细胞融合（特异性）。Ｆ糖蛋白前体Ｆ０无活性由宿主细胞蛋白酶水解分裂成亚单位Ｆ１和Ｆ２后具有膜融合活性，与新城疫病毒穿透细胞、溶解红细胞等致病作用有关。Ｆ糖蛋白的Ｆ１／Ｆ２多肽裂解位点（１…     

鉴别新城疫病毒弱毒株的抗多肽抗体制备

针对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）弱毒株Ｆ蛋白前体（Ｆ０）Ｆ２片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ＥＬＩＳＡ检测,该抗体与ＭＤＶ弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒（ＦＰＶ）,鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）,ＭＤＶ强毒Ｆ４８Ｅ８株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别ＮＤＶ弱毒株。     

新城疫病毒F48E9株病毒结构蛋白的分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、激光扫描技术、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和糖蛋白染色方法对新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ９株的结构蛋白进行了分析，结果表明，它具有ＮＤＶ的典型结构特征，与ＬａＳｏｔａ毒株相比无显著差异     

鹅副粘病毒的分类地位初探

对从病鹅体分离的禽副粘病毒（ＧＶＰ）ＹＧ９７株，经红细胞凝集（ＨＡ）和红细胞凝集抑制（ＨＩ）试验证明，与新城疫病毒（ＮＤＶ）存在着极大的相关性。参考ＮＤＶ的３个毒力指标－最小致死量致病鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）对ＹＧ９７株进行测定，表明其有与ＮＤＶ速发型类似的毒力，属强毒力的毒株。应用ＲＴ－ＰＣＲ技术对Ｆ基因重要功能区片段扩增后进行序列测定，并与多株已报道的ＮＤＶ相应片段进行序列比较，经遗传进化树分析后，初步判定其为禽副粘病毒－Ⅰ型，属基因Ⅶ型ＮＤＶ。     

用RT—PCR检测新城疫病毒的研究

用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测新城疫病毒（ＮＤＶ）。研究结果表明ＲＴ－ＰＣＲ可检测出Ｆ４８Ｅ９株、Ｌａｓｏｔａ株、Ⅰ系疫苗株、Ｌ株、ＳＹ１株等５株ＮＤＶ尿囊液为阳性,其敏感性可测至１０－３倍稀释尿囊液病毒。ＲＴ－ＰＣＲ还能直接检测出发病鸡气管中的ＮＤＶ。