松材线虫对马尾松的致病性及其早期诊断试验

本试验通过从枯死松树分离繁殖的松材线虫 Bursaphelenchus xylophilus 接种3～4年生马尾松苗,观察到接种株第45天开始出现外观症状,三个月内接种株相继枯死。在枯死株中分离出大量松材线虫,表明松材线虫对马尾松具有明显的致病性。试验还通过酸性品红染色追踪树液流,观察到松材线虫侵染早期,其松脂管的薄壁细胞受破坏,松脂从松脂管渗漏至周围的管胞中,使水溶性染剂不能着色而出现白斑,树液移动受阻。而对照株中染剂可在植株管胞中自由移动,不会产生白斑,松脂流动只限于松脂管内。而在这段时间接种株和对照株外观上生长正常,并无明显差异。因此,通过酸性品红染色追踪树液流,观察植株根茎横切面白斑的出现可作为早期诊断马尾松松材线虫病的一种方法。     

松材线虫自然侵染后对不同松树组织结构的影响

 利用滑走切片技术从显微水平研究松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）在自然状态下入侵,对马尾松（Pinus massoniana）和黑松（Pinus thunbergii）显微结构的影响。结果表明,马尾松和黑松的组织结构在感病初期即表现出病变特征,并随感病时间推移病变加剧。马尾松在感病初期皮层薄壁细胞开始木质化,伴有细胞破裂并融合成空腔;至感病中期周皮的栓内层细胞、皮层薄壁细胞以及韧皮部薄壁细胞均发生木质化,细胞内含物增多,甚至形成层细胞也发生一定程度的木质化现象,树脂道因周围细胞破裂而变形;至感病晚期,木材以外所有部分完全被木质化、大量细胞破裂。黑松发病症状与马尾松大致相同但发病时间稍晚,发病程度也较轻,这可能是因为两者对松材线虫病的抗性强弱有差异。同一时期的组织病理学特征在空间上也存有差异,这与松材线虫入侵的位置及其在树体内的分布有关。     

松材线虫对黑松一些生理生化指标的影响（英文）

 松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。本文对接种松材线虫后3~4年生黑松茎部的一些生理生化指标的变化进行了研究。结果显示,接种线虫后,松苗的可溶性糖含量降低,在病情发展中期和后期比早期降低更显著。松苗的可溶性蛋白质和抗坏血酸含量逐渐降低,游离氨基酸含量也降低。松树茎部的可溶性蛋白质含量可用于病害的早期诊断。此外,对这4个生理生化指标在病害致病机理中的作用进行了讨论。     

不同地理种群的松材线虫对马尾松的致病力差异

本文对我国主要病区及日本的４个松材线虫地理种群,对４～６年生马尾松的致病力进行了研究。结果表明,江苏和广东种群对马尾松的致病力较强,感病指数皆为０．９４,而安徽和日本种群的致病力较弱,感病指数分别０．７５和０．６９。     

日本松材线虫和南京松材线虫对雪松和马尾松的致病性研究

用来自日本的木质包装材料上截获的松材线虫和南京松材线虫进行对雪松Ｃｅｄｒｕｓｄｅｏｄａｒａ和马尾松Ｐｉｎｕｓｍａｓｏｎｉａｎａ的致病力试验，发现日本松材线虫能使４～５年生雪松苗２０％发病，１０％左右枯死，而南京松材线虫则没有致病力；１０年生雪松对两种松材线虫具有高度抗性。这两种松材线虫都能使马尾松中度感病和１０％左右的枯死     

马尾松松材线虫病与松材蓝变相关性研究

 研究表明:松材线虫引起的马尾松(Pinus massoniana)病树死亡后期,必然有蓝变(Blue-stain)现象。松材蓝变程度与松树树干部位相关性不大。但是,对于同一棵树,若蓝变程度高,则每一部位的蓝变程度都比较高;若蓝变程度低,则每部位的蓝变程度可能都比较低。蓝变程度与松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的含量也没有正相关关系。在松材线虫病木的检疫过程中,松木蓝变仅可以作为松材线虫病的参考指标。     

黑松13个抗病家系对松材线虫的抗性反应及组织病理学观察

 为评估自日本引进的抗性黑松对松材线虫(Pine Wood Nematode,PWN)的抗病性,选用3个不同来源的PWN强毒和中强毒虫株采用皮接法接种,对1.5年生的黑松13个优良家系进行抗病性测定。结果表明,引进的黑松大部分家系对3个PWN虫株都表现出一定的抗病性,但针对不同虫株,抗病各家系间差异明显,其中有7个家系(3、4、5、6、9、11和12号)表现良好。同时,为探讨引进黑松家系感染PWN后的组织病理反应,对12号抗性家系进行组织病理学研究。观察表明,松材线虫在抗性黑松和普通黑松中的纵向扩散速度差别不明显,但其在抗性黑松内的横向扩散速度比在普通黑松内要慢,且抗性黑松体内木射线细胞和围绕树脂道泌脂细胞的薄壁细胞,出现病变要比普通黑松晚;在接种后同一时间取茎段的同一部位发现,抗性松苗组织解剖结构及细胞的病变和破坏程度要比普通松苗轻。     

马尾松(Pinus massoniana)感染松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)的研究

 1987-1988年在江苏南京-镇江松材线虫疫区内采(征)集143份自然枯死或濒死马尾松样本,在94份(65.7%)样本中查见松材线虫。有关林分中马尾松的病枯情况不一,在句容桥头一下蜀一线、江宁汤山和六合方山等处有过相当多的马尾松发病死亡。表明松材线虫是当地马尾松自然枯死的主要原因。人工测定了无黑松林区5年生浙江富阳马尾松苗及混栽黑松林区4-5年生江苏马尾松苗对两种松材线虫分离物的反应,结果指出,供试松苗都表现中度感染或高度感染,并有20%或70-80%的病枯株。接种林间马尾松,初步证实马尾松对松材线虫的抗性随树龄变化。1-2年生马尾松苗高感松材线虫,病枯株率高达85.7%;树龄25年以上的成材树病枯株率约30%;而10年左右的幼树则无一发病死亡。     

牡丹皮、黄连、大黄提取物对松材线虫生理代谢的影响

对3种中草药黄连、牡丹皮、大黄的乙醇提取物毒杀松材线虫作用机制进行了初步研究。测定了其对线虫体内总糖和蛋白含量的影响, 处理前后线虫体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和乙酰胆碱酯酶（AChE）酶活性变化和丙二醛（MDA）含量变化, 处理前后SOD、CAT、GSH-Px和AChE表达量变化; 并用松枝水培试验测定3种提取物对松材线虫病害的防控效果。结果表明, 提取物处理后线虫体内总糖及蛋白含量显著下降, 线虫体内糖及蛋白质的代谢受到干扰; 线虫体内SOD、CAT、GSH-Px酶活性提高, POD活性显著下降, MDA含量升高, 表明线虫体内氧化与抗氧化作用失衡, 细胞功能受到极大影响; AChE活性被抑制, 表明线虫的神经系统受到破坏, SOD、CAT、GSH-Px和POD表达量与酶活性变化基本一致。松枝水培试验表明中药提取物能够有效控制松材线虫病害发生。综上, 3种提取物引起的松材线虫体内众多生理指标的改变是造成线虫死亡的主要原因。     

松材线虫Hsp70基因的克隆与原核表达

 热激蛋白70(Hsp70)是已知热休克蛋白家族中最重要的-种, 它在细胞内的大量表达可以明显改善细胞的生存能力, 提高对环境胁迫或伤害的耐受性。采用RACE-PCR技术, 从松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)中克隆了Hsp70基因的全长cDNA序列(共2 061 bp)(GenBank登录号为:DQ785812)。其编码-个分子量为70 kD的642个氨基酸的蛋白序列, 含有3段Hsp70家族的签名序列。同源性分析表明, 氨基酸序列与其它真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性, 并与秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)热激蛋白70家族中的hsp-1基因编码的氨基酸序列更为相似。因此, 将克隆的松材线虫Hsp70基因命名为Bx-hsp-1。构建了-个原核表达载体Bx70pEASY-E1, 当IPTG终浓度为0.4~0.8 mmol/L时, 能诱导表达融合蛋白。Bx-hsp-1基因的克隆和表达, 将为松材线虫的生态适应性机理研究奠定基础。     

20-(S)-喜树碱7-C-取代衍生物的合成及杀松材线虫活性研究

为研究喜树碱(CPT)类化合物的杀线虫活性,以喜树碱为原料,经烷基化、氧化、酯化等步骤合成了13个7-C-取代的20-(S)-喜树碱衍生物,其中化合物 14 未见文献报道,所有衍生物的结构经红外光谱(FT-IR)、核磁共振氢谱(1H NMR)和液-质联用(LC-MS)等分析手段进行了表征。采用浸渍法测定了化合物对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的毒杀活性。结果表明:与母体化合物喜树碱相比,7-C-取代的20-(S)-喜树碱衍生物具有更强的杀线虫活性,其中化合物7-苄基喜树碱、7-甲酰基喜树碱、7-苯甲酰氧甲基喜树碱在24 h的致死中浓度(LC50值)分别为2.28、2.21和1.37 mg/L,明显高于母体化合物喜树碱的LC50值12.18 mg /L。     

Development of a water-soluble preparation of emamectin benzoate and its preventative effect against the wilting of pot-grown pine trees inoculated with the pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus

Water-soluble preparations have been investigated to develop a trunk injection agent based on the poorly water-soluble anti-nematode emamectin benzoate. Following tests on the phytotoxicity of some solvents and solubilizers and demonstration of the ability of some solubilizers to dissolve emamectin benzoate in water, acetone + methanol was selected as the solvent and Polysorbate 80 as the solubilizer. This water-soluble preparation of emamectin benzoate prevented the wilting of pot-grown 4-year-old trees of the Japanese black pine, Pinus thunbergii, artificially inoculated with the pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, at a dose of 20 g emamectin benzoate per cubic metre of pine tree.     

Susceptibility evaluation of Picea abies and Cupressus lusitanica to the pine wood nematode (Bursaphelenchus xylophilus)

Pine wilt disease (PWD), recently introduced into Europe, is caused by the pine wood nematode (PWN) Bursaphelenchus xylophilus and is a devastating illness that affects mainly pine trees. It is known that the PWN is capable of infecting other conifers; however, there is currently no information on which other plant species may be susceptible to PWD. In this study, the potential susceptibility of two common species of European forests, Picea abies and Cupressus lusitanica, to PWN was assessed through the monitoring of visual external symptoms, dimension and localization of the nematode population in stems, quantification of total chlorophyll, total soluble phenolics and lignin, at 7, 14, 21 and 28 days after inoculation. The degree of susceptibility was established through the comparison of symptoms with Pinus pinaster, a well‐known PWN host. Furthermore, the stem ultrastructure of P. abies, C. lusitanica and Pn. pinaster was analysed by scanning electron microscopy. The results suggest that P. abies and C. lusitanica are resistant to PWN, and that lignin biosynthesis in these species is affected at an early stage of the infestation. Nevertheless, P. abies seems to be a compatible host that could act as a repository for PWN.     

三株芽胞杆菌菌株对松材线虫低温存活与繁殖的影响

为明确细菌在松材线虫生态适应性中的作用,本研究选择与致病相关的松材线虫伴生细菌GD1、马尾松内生细菌GD2以及具有杀松材线虫活性的湿地松内生细菌NJSZ-13为试验对象,测定经这3株芽胞杆菌菌株3个浓度低温驯化10、15和20 d后,在冷冻条件下松材线虫强毒虫株AMA3、中毒虫株AA3和弱毒虫株YW4的存活率和繁殖量。结果表明:低温驯化15 d和20 d后3株菌株对不同毒力线虫的活力影响较驯化10 d后的更显著。在低温驯化15 d、-20℃冷冻处理1 h后,5×10⁶CFU/mL浓度菌株GD1处理下,虫株AMA3、AA3和YW4的存活率分别为77.22%、83.68%和84.26%,与对照差异显著;5×10⁵CFU/mL浓度菌株GD1处理下,虫株AMA3、AA3和YW4的存活率分别为75.76%、80.67%和81.50%,与对照差异显著。5×10⁶CFU/mL和5×10⁵CFU/mL浓度菌株GD2处理下,与GD1处理组结果相似,菌株NJSZ-13处理组则与菌株GD1和GD2的结果相反。低温驯化15...     

局部根区水分胁迫下钙对冬小麦生长及养分吸收的影响

以小偃22为材料,采用Hoagland营养液进行分根培养试验,研究了局部根区水分胁迫下,钙对冬小麦幼苗生长及养分吸收的影响。设置2个钙水平处理(正常供钙和不供钙)、3种水分处理(正常水分、局部根区水分胁迫和全部根区水分胁迫),共6个处理。结果表明:不论是否水分胁迫,缺钙处理冬小麦幼苗的株高、主根长、生物量、叶绿素相对含量(SPAD值)、相对含水量及地上部N、P、Ca含量和根系N、P、K、Ca含量均显著低于正常供钙处理(P0.05)。正常供钙条件下,局部根区水分胁迫使株高增加4.4%,正常水分、局部根区水分胁迫和全部根区水分胁迫的植株生物量分别为1.54、1.66 g·株-1和0.97 g·株-1,比缺钙处理分别高19.4%、25.8%和4.3%;全部根区水分胁迫下,冬小麦的株高及主根长均显著降低。缺钙条件下,植株对N、P、Ca等养分的吸收显著降低。正常供钙条件下,正常水分、局部根区水分胁迫和全部根区水分胁迫处理地上部全氮含量分别为36.54、36.65g·kg-1和32.70 g·kg-1,比缺钙处理分别高9.5%、6.5%和6.9%;全磷含量分别为7.48、7.51 g·kg-1和6.54 g·kg-1,比缺钙处理分别高3.0%、13.1%和22.7%;全钙含量分别为8.35、8.37 g·kg-1和5.53 g·kg-1,比缺钙处理分别高26.5%、24.4%和19.7%。结果说明钙显著影响冬小麦幼苗生长发育和养分利用,钙可促进局部根区水分胁迫下冬小麦幼苗的生长及其对养分的吸收,缓解全部根区水分胁迫的抑制效应。