猪胸膜肺炎放线杆菌血清型研究进展

猪传染性胸膜肺炎是当前养猪业的主要呼吸系统传染病之一 ,其病原菌是胸膜肺炎放线杆菌 ,血清型多。准确区分此病原菌的不同血清型是研制预防有效疫苗的前提。根据 NAD依赖性 ,本菌可以分为生物 I型和生物 II型 ;采用传统的血清学方法 ,本菌又分为 1 5个血清型。各种血清学方法仍是现阶段对胸膜肺炎放线杆菌开展血清型鉴定的主要手段 ,但不足之处是存在一定程度的交叉反应以及不能对新分离的病原菌进行分型。采用聚合酶链式反应对不同基因进行扩增 ,根据扩增结果进行血清型鉴定的基因分型方法 ,具有准确和特异的优点 ,并可以克服传统血清学方法的不足 ,已经逐渐成为胸膜肺炎放线杆菌研究中的新的分型方法     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清型的PCR鉴定

据胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）生物I型各血清型之间外毒素（apx）基因组结构差异,参考GenBank上已发表的4种毒素（apxⅠ/apxⅡ/apxⅢ/apxⅣ）的核酸序列设计了6对特异性引物,对APP的12个血清型进行多重PCR扩增,得出不同的特异性的扩增片段,得以准确鉴定APP生物I型中的9种血清型,但其中血清型2和8,血清型5、9和11仍未能区分。     

猪胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展

从分子质量、基因结构及致病机理等方面概述了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素ApxⅠ,ApxⅡ,ApxⅢ和ApxⅣ的基本特点和研究进展.比较并归纳了这4种溶血外毒素的异同点及在15种血清型中存在的特点.     

胸膜肺炎放线杆菌溶血外毒素研究进展

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(APP)引起的一种呼吸道传染性疾病.根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位不同,将胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型,不同血清型的菌株毒力大小不同,致病性也有强弱之别.研究发现与APP致病性有关的毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、溶血外毒素等,其中溶血外毒素是APP引起猪致病最主要的毒力因子,也是主要的保护性抗原.论文从猪传染性胸膜肺炎溶血外毒素的分子结构、致病机制、免疫原性几个方面对其进行综述,为获得以Apx为抗原制备减毒活疫苗提供参考资料.     

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布

胸膜肺炎放线杆菌血清型的地理分布吴硕显（上海动植物检疫局，２０００３２）胸膜肺炎放线杆菌（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ；Ａｐ）为猪胸膜肺炎的病原，曾称作副流嗜血杆菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）...     

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型

参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌血清型多重PCR研究

本研究建立了鉴定猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型的多重PCR方法,并对鲁西地区流行的APP血清型进行了鉴定.根据猪胸膜肺炎放线杆菌的外膜脂蛋白(OmlA)基因设计1对种特异性引物;并且根据血清1型、5型、7型荚膜多(cps)基因设计型特异性引物,建立检测血清1型、5型、7型的PCR方法.运用多重PCR对临床分离鉴定的89株APP进行血清型鉴定,结果表明建立的多重PCR检测方法特异性和敏感性良好,可作为猪传染性胸膜肺炎快速诊断和流行病学调查的重要手段.     

胸膜肺炎放线杆菌血清分型多重PCR方法的建立

胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneunoniae）旧称副溶血性嗜血杆菌或猪胸膜肺炎嗜血杆菌。根据NAD依赖性,App划分为两个生物型,依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）生长的生物Ⅰ型,无需NAD的生物Ⅱ型,致病菌主要为生物Ⅰ型。目前依据荚膜多糖（capsular polysaccharide,CP）和脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）的抗原性己分离鉴定出了15种血清型的App。已建立的多重PCR方法将10株参考菌株分为5个血清群。但该方法还未能区分血清2型和8型、     

猪胸膜肺炎放线杆菌的血清型分型及毒力因子研究进展

根据荚膜多糖和脂多糖抗原表位的不同，猪胸膜肺炎放线杆菌分为15个血清型，某些血清型问存在交叉反应，不同血清型甚至同一血清型不同菌株间的毒力大小不一样，致病性也有强弱之别。该菌的致病性与多种毒力因子密切相关，主要有外毒素、外膜蛋白、脂多糖、英膜多糖、转铁蛋白、脲酶等。本文综述了国内外对胸膜肺炎放线杆菌的几种主要毒力因子及血清型的研究进展。     

胸膜肺炎放线杆菌的主要毒力因子及其致病性研究进展

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneum oniae,APP)的毒力因子有很多,其中主要包括外毒素、脂多糖、荚膜多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、黏附素等,这些毒力因子都能引起胸膜肺炎的发生。1 APP的主要毒力因子及致病性1.1外毒素目前为止已经发现胸膜肺炎放线杆菌可以产生4种毒素。这些毒素都属于RTX(R epeat in structure Toxin)毒素家族,且不同血清型的APP所分泌的毒素种类不同,毒素的溶血性及细胞毒性也不同,因此可以作为分型的依据[1]。ApxⅠ和ApxⅡ具有溶血活性和细胞毒性作用,而ApxⅢ只有细胞毒性作用。ApxⅠ溶血活性强于…     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型PCR方法的建立及初步应用

为了建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分子鉴定方法,本研究根据胸膜肺炎放线杆菌从编码荚膜多糖的碱基序列设计1对引物,扩增特异性的720 bp核酸片段。结果表明,以APP为模板,均能扩增出与预期一致的1条720 bp核酸片段,所得PCR产物经测序,与Gen Bank已发表的胸膜肺炎放线杆菌血清型6型的同源性达99%以上。本研究建立了PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清6型分子鉴定方法,该方法的建立为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病的诊断和防治及鉴定提供了基础。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清2型PCR程序优化及分子鉴定

猪接触性传染性胸膜肺炎（porcine contagious pleuropneumonia,PCP）又称坏死性胸膜肺炎,是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。以急性出血性纤维素性肺炎和慢性纤维素性坏死性胸膜炎为主要特征。各种年龄、性别的猪对本病均易感,急性者死亡率高,慢性者常能耐过。猪传染性胸膜肺炎放线杆菌有15个血清型,不同血清型之间没有或仅有较弱的交叉保护作用,这给猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的诊断防治和免疫预防带来了很大的困难。因此建立一种快速血清型分子鉴定方法尤为重要。为了快速、简便的建立猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定的方法,本研究所从临床发病疑似病例猪肺脏和气管中分离到的放线杆菌,首先经过血清型鉴定,确定部分血清型为2型,为了确定血清型鉴定的准确性,在此基础上,采用分子鉴定的方法,对这些菌株进行鉴定,确定分离到的11株菌为猪胸膜肺炎放线杆菌血清2型。这为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分子鉴定及防治提供了理论依据,为今后临床血清型定型提供了一种简便方法。     

PCR specific for Actinobacillus pleuropneumoniae serotype 3

Serotypes 3 and 8 of Actinobacillus pleuropneumoniae, the aetiological agent of porcine pleuropneumonia, have been reported to predominate in the UK. Direct serotyping of isolates of the organism is typically determined by the immunological reactivity of rabbit serum to its surface polysaccharides, but the method has limitations, for example, cross-reactions between serotypes 3, 6 and 8. This study describes the development of a serotype 3-specific pcr, based on the capsule locus, which can be used in a multiplex format with the organism's specific gene apxIV. The pcr test was evaluated on 266 strains of A pleuropneumoniae and 121 strains of other organisms, including all the major respiratory bacterial pathogens of pigs. The test was highly specific and sensitive and should be useful for differentiating strains of serotypes 3, 6 and 8, and in seroprevalence and epidemiological surveys in regions where serotype 3 is prevalent, such as the UK.     

水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2 005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鍪定,同时根据水牛G3PDH基因设计,2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率.结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24).该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用.     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR诊断方法的建立与应用

根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ基因设计1对引物，扩增特异的650bp棱酸片段，建立了应用PCR检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法。特异性试验结果表明，12个血清型的放线杆菌参考菌株均能扩增出650bp特异性的核酸片段，而大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪肺炎支原体、伤寒沙门氏菌和支气管败血性波氏杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明，PCR的最低检出限量为500个放线杆菌。利用建立的PCR检测方法对22株从山东省不同地区分离的疑似胸膜肺炎放线杆菌菌株进行检测．结果14株为阳性。对感染猪病变组织的检测结果表明，病变部位不同，胸膜肺炎放线杆菌的检出率不同，其中以扁桃体的检出率最高。     

胸膜肺炎放线杆菌血清8型自转运黏附素基因的克隆测序及功能预测分析

为研究胸膜肺炎放线杆菌(APP)三聚体自转运黏附素(TAAs)的功能,以GenBank登录的APP血清5b型自转运黏附素基因5'端的3875bp序列设计引物,通过PCR的方法首次获得APP血清8型运黏附素N端的基因序列片段,测序结果与已知血清型的基因序列和氨基酸推导序列分别进行比对,结果表明与血清7型自转运黏附素N端同源性达到93%,氨基酸推导序列同源性达到97%;与血清5b型自转运黏附素N端同源性达到92%,氨基酸推导序列同源达到100%.经软件分析获得的序列含有与细菌的黏附、聚集和侵入密切相关的Hep_Hag基序,应用马克斯-普朗克研究所的在线分析TAAs的基序和蛋白域的软件daTAA,进行预测并证明所得序列为TAAs,并且具有完整的N段头部序列,有重要功能区具有良好的抗原性.比对的结果为寻找研究APP的定植基序和毒力因素提供了重要基础.     

血清3型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离与鉴定

2005年3月,广东省惠州市某猪场发生了一起疑似猪传染性胸膜肺炎放线杆菌引起猪只死亡的病例,经细菌分离培养、生化鉴定、PCR、血清学鉴定,确诊该病原为血清3型猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。     

胸膜肺炎放线杆菌的实时荧光PCR检测

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的危害养猪业的五大疾病之一。至目前为止App共报道有2个生物型15个血清型。所有型都可能致病，但有显著差异。使用血清学方法监测猪传染性胸膜肺炎有其局限。一些猪细菌分离培养阳性，但血清反应仍为阴性，对这些猪群只能使用病原分离进行确诊。亚临床感染及处于潜伏期的动物，     

Real—time PCR和PCR方法快速检测犬细小病毒

为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的Real-time PCR方法.通过灵敏度对比试验,证实Real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著提高.通过对大量不同采样部位样品的检测证实,本研究建立的Real-time PCR和PCR方法具有较高的可靠性,并可显著提高CPV的阳性检出率.