纳米氧化锌对小鼠B16黑素瘤细胞生长和分化的影响

为评价纳米氧化锌(Zn O NPs)在皮肤病治疗和化妆品应用方面的生理毒性,以小鼠B16黑素瘤细胞为细胞模型,研究15、30、90 nm下Zn O NPs对B16细胞的体外生长和分化的影响及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理分别作阴性、阳性对照。结果表明,15、30 nm,体相Zn O NPs处理与B16细胞共培养作用3 d,当Zn O NPs为4μg/m L以下时,Zn O NPs并未明显抑制细胞生长,引起细胞死亡;当Zn O NPs浓度大于8μg/m L时,明显抑制细胞生长。随着Zn O NPs浓度增加,细胞体积变小,细胞间隙变大,黏附性降低,细胞变圆,从培养瓶底脱落死亡。Zn O NPs诱导细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)、酪氨酸相关酶相关蛋白2(TYRP-2)的mRNA表达量升高,导致细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成水平增高,促进了B16黑素瘤细胞的分化。相同Zn O NPs浓度下,15 nm Zn O NPs比30、90 nm Zn O NPs作用明显。     

天麻素对B16黑素瘤细胞黑色素形成的影响

[目的]探讨天麻素对体外培养的B16鼠黑素瘤细胞黑素合成的影响及其作用机制。[方法]选择不同浓度的天麻素作用于体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞,测定细胞黑素生成量,通过测定天麻素对蘑菇酪氨酸酶活性的影响,初步探讨天麻素影响黑色素形成的机制。[结果]当浓度大于15 mmol/L时,天麻素能抑制B16黑素瘤细胞黑色素形成和酪氨酸酶活性,且呈浓度依赖性。天麻素对蘑菇酪氨酸酶的半抑制浓度(IC50)为(69.37±9.22)mmol/L,对酪氨酸酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制,抑制常数Ki=(123.8±20.2)mmol/L,提示天麻素可能通过抑制酪氨酸酶活性抑制B16细胞黑色素的形成。[结论]天麻素可作为一种潜在的色素障碍性疾病治疗药物。     

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。     

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果 湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）,且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。     

大蒜提取物对B16F10细胞内黑色素生成的抑制作用

采用MTT法测定大蒜提取物、二胜肽和六胜肽3种物质对B16F10细胞活力的影响,且在非毒剂量下,分别评价此3种物质对B16F10细胞黑色素生成和细胞形态的影响;在单因素试验基础上,采用正交试验设计大蒜提取物、二胜肽和六胜肽组合物中各组分的用量,检测组合物对B16F10细胞黑色素生成抑制率的影响,并利用Western blot检测最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP–1和TRP–2表达的影响。结果表明：0.00~2.50 μg/mL的大蒜提取物、0.00~4.00 μg/mL的二胜肽或六胜肽对B16F10细胞的细胞活力和细胞形态均没有显著影响;大蒜提取物在0.00~2.50 μg/mL、二胜肽和六胜肽在0.00~4.00 μg/mL内呈剂量依赖性的抑制黑色素的生成;当大蒜提取物、二胜肽、六胜肽质量浓度分别为2.50、1.00、0.50 μg/mL时的组合物抑制黑色素的生成作用效果最佳;该最佳组合物对黑色素合成相关蛋白TYR、TRP–1和TRP–2的表达具有明显的抑制作用,表明组合物抑制黑色素的生成与TYR、TRP–1和TRP–2蛋白水平的降低有关。     

茶叶提取物的美白作用及其机理研究进展

茶叶是一种可以保健和预防人体疾病的健康食品,具有广泛的生物活性成分。整理归纳了近几年国内外茶叶美白功效的文献,从黑色素的合成过程、美白作用调节机理和茶叶提取物的美白作用三方面进行了综述,提出动物实验、病理学及毒理学等方面研究是未来开发茶叶提取物美白产品的研究方向,展望了茶叶美白产品的前景。     

非小细胞肺癌与p16基因CpG岛异常甲基化的关系

目的 :探讨非小细胞肺癌中抑癌基因 p1 6的失活机制 ;方法 :采用甲基化特异性 PCR( MSP)法检测 30例非小细胞肺癌肿瘤组织、30例癌旁组织及 3例正常肺组织中 p1 6基因外显子 1的 Cp G岛异常甲基化情况。结果 :非小细胞肺癌中有 1 2例 ( 4 0 % )肿瘤组织检测到 p1 6基因 5’端 Cp G岛异常甲基化 ,而癌旁组织及正常肺组织均未检测到 p1 6基因的异常甲基化 ,两者之间差异有显著性 ( P<0 .0 0 1 )。结论 :p1 6基因 5’端 Cp G岛异常甲基化与非小细胞肺癌的发生发展有关 ,可能是该基因在非小细胞肺癌中的主要失活机制。     

槐豆黄酮提取物对酪氨酸酶活性抑制作用的研究

酪氨酸酶是生物合成黑色素细胞的主要限速酶。通过抑制酪氨酸酶的活性来控制黑色素的生成,可以达到美白效果。结合传统的碱提酸沉法和微波法对槐豆中的黄酮物进行深度提取,测定在不同浓度黄酮提取物对酪氨酸酶活性的影响。研究证明槐豆中黄酮提取物对酪氨酸酶的活性存在抑制作用,且随浓度的增加和时间的增长,抑制作用逐渐增强,最高抑制率可达到77.40%。结果表明槐豆在皮肤美容和医学研究等方面有潜在的应用价值。     

茶叶中EGCG对高脂大鼠的降脂作用研究

[目的]研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高脂大鼠血脂调节作用。[方法]采用高脂大鼠模型,设正常对照组（I组,喂基础饲料）、模型对照组（Ⅱ组,喂高脂饲料）、试验组（Ⅲ、Ⅳ组,喂高脂饲料,并每日分别灌喂0．5、1．0g／kg的EGCG）,连续喂饲30d,测定其血清中TC、TG、HDL．C和LDL—C含量。[结果]Ⅲ、Ⅳ试验组TC、LDL—C含量极显著低于Ⅱ组（P〈0．01）Ⅲ、Ⅳ组TG含量显著低于Ⅱ组（P〈O．05）;Ⅲ、Ⅳ组HDL．C含量较Ⅱ组变化不明显;IV组HDL—C含量略有升高,但差异不显著;Ⅲ、Ⅳ组AI值极显著低于Ⅱ组（P〈0．01）。[结论]EGCG具有降血脂作用。     

精氨酸双糖苷对黑色素瘤B16细胞的作用及其机制初步研究

研究精氨酸双糖苷（Arginyl-Fructosyl-Glucose,AFG）抑制黑色素瘤B16细胞的增殖及诱导凋亡作用,并初步探讨了其Bcl-2、Caspase-3、Bax信号通路的作用机制。培养黑色素瘤B16细胞,配制1,2.5,5,10,25,50,75,100μmol/L的精氨酸双糖苷作用于黑色素瘤B16细胞,48 h后利用CKK-8法检测精氨酸双糖苷对B16细胞增殖影响;采用LDH检测给药后细胞乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）表达水平;用Hoechst33258荧光染色法观察精氨酸双糖苷对B16细胞凋亡形态的影响;采用RT-PCR和Western Blot法分析精氨酸双糖苷对B16细胞Bcl-2、Caspase-3、Bax mRNA和蛋白表达的影响。结果表明：随着给药浓度的增大和培养时间的增加,精氨酸双糖苷对B16细胞的抑制率增加,48 h后抑制率达到平台期。50,75,100μmol/L浓度的精氨酸双糖苷抑制效果最佳,B16细胞存活率显著降低（P<0.05,P<0.01）,可明显观察到B16细胞凋亡;RT-PCR和Western ...     

儿茶素EGCG对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用研究

试验对Caco-2细胞膜上蔗糖酶和麦芽糖酶这两种α-葡萄糖苷酶活性进行不同培养时间检测,并以儿茶素单体EGCG作为抑制剂,探究其对Caco-2来源的蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制效果。结果表明,Caco-2细胞培养18 d后膜表面具有较高活性的蔗糖酶和麦芽糖酶,可用于进行α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选。儿茶素EGCG具有蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性,抑制IC50分别为31.08μg/m L和36.44μg/m L。     

非小细胞肺癌中MAGE-3蛋白的Western Blot分析

目的：观察黑素瘤抗原-3(MAGE-3)蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达。方法：用Western blot方法对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-3蛋白的表达情况进行研究。结果：3种人肺癌细胞系均表达MAGE-3蛋白;56例NSCLC标本中,28你表达MAGE-3蛋白,而相邻正常肺组织均不表达MAGE-3蛋白。结论：MAGE-3蛋白在NSCLC中有较高比率的表达．有望以该抗原作为适宜靶点对NSCLC患者进行免疫治疗。     

细胞松弛素B对猪卵母细胞去核的影响

适宜的细胞松弛素B(CB)浓度可提高卵母细胞的成功去核率。将有明显第一极体排出的卵母细胞放入含有3.5×10-3、5×10-3、6.5×10-3、7.5×10-3mg.ml-1CB的NCSU37成熟培养液中孵育30min,采用盲吸法去核,将去核后的卵母细胞置入含5×10-3g.ml-1的Hoechst33342培养液中染色15min,用荧光显微镜检验去核率。结果表明:CB处理组去核率显著高于对照组(P<0.05)。不同浓度梯度处理组中,CB浓度过低(3.5×10-3mg.ml-1)或过高(7.5×10-3mg.ml-1)都使去核成功率(54.44%,51.46%)下降,溃破率(28.21%,34.11%)增高,与5×10-3、6.5×10-3mg.ml-1组的去核成功率(75.83%,73.83%)、溃破率(9.86%,11.62%)差异显著(P<0.05),且5×10-3mg.ml-1组的去核成功率高于6.5×10-3mg.ml-1组,差异不显著(P>0.05)。证明5×10-3mg.ml-1浓度的CB有利于第一极体和核质的吸出,同时可降低细胞膜撕裂,胞质破溃流出,获得较高的去核效率。     

EGCG与杨梅素相互作用对茶汤色泽呈现的影响

【目的】探究EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)与杨梅素的相互作用对绿茶茶汤色泽呈现的影响。【方法】以茶叶中主要的多酚类物质EGCG和杨梅素作为研究对象,将单独的EGCG、杨梅素以及EGCG与杨梅素混合母液分别溶于pH 5.0磷酸缓冲液,在100℃水浴中热处理10h,观察其颜色变化,采用色差仪、紫外分光光度计检测3种溶液的颜色变化规律,并根据溶液的色度值结合动力学方程,建立3种溶液颜色变化的动力学模型。【结果】光谱及色度变化结果显示:EGCG与杨梅素混合母液的色泽变化较其单独母液明显,从淡黄色变成红色;EGCG与杨梅素的相互作用能加深色度的变化,且两者均对混合母液的黄变、红变起作用。互作试验表明,杨梅素能加速EGCG黄变、红变的趋势,EGCG对杨梅素色泽变化有辅助作用。结合颜色动力学分析结果表明,在色泽变化中杨梅素对混合母液的红变起到主要作用,EGCG对混合母液的黄变起到主要作用。【结论】EGCG与杨梅素对色泽变化存在互作效应。     

竹笋醇提取物对酪氨酸酶活力的影响

用L-酪氨酸和邻苯二酚作底物,以曲酸、熊果苷为对照,测定不同种、不同季节竹笋笋肉、笋壳醇提取物对酪氨酸酶单酚酶和双酚酶活力的抑制作用。结果表明:麻竹笋肉醇提物浓度为1.0 mg/ml时对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用最大,抑制率为45.97%,与0.1 mg/ml曲酸相接近,高于0.1 mg/ml熊果苷;醇提物对酪氨酸酶单酚酶的抑制作用从强到弱依次是:麻竹笋肉毛竹春笋肉麻竹笋壳毛竹春笋壳毛竹冬笋壳毛竹冬笋肉雷竹笋壳雷竹笋肉。麻竹笋壳醇提物浓度为1.0 mg/ml时对双酚酶的抑制作用最大,抑制率为30.05%,高于0.08mg/ml熊果苷和0.08 mg/ml曲酸;醇提物对双酚酶的抑制作用从强到弱依次是:麻竹笋壳麻竹笋肉毛竹春笋壳毛竹冬笋壳毛竹冬笋肉雷竹笋壳毛竹春笋肉雷竹笋肉。     

EGCG对水牛卵母细胞体外成熟的影响

[目的]探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对水牛卵母细胞体外成熟质量与早期胚胎发育能力的影响,为优化水牛体外胚胎生产体系及提高其体外胚胎生产效率提供参考.[方法]在水牛卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度的EGCG,以排出第一极体为细胞核成熟标志,观察卵母细胞核成熟情况,检测MⅡ期卵母细胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)含量,并统计经孤雌激活及体外受精后早期胚胎的发育情况.[结果]在体外成熟液中添加10~20 μmol/L EGCG有利于水牛卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展,卵丘扩展指数(CEI)分别为2.49%和2.42%,卵母细胞成熟率(59.31%和50.98%)显著高于未添加EGCG的CK组(P<0.05,下同),MⅡ期卵母细胞的GSH含量(3.21和3.25 pmol/枚)也显著高于CK组;添加20~30 μmol/L EGCG可显著降低水牛MⅡ期卵母细胞的ROS水平.以体外成熟培养获得的水牛MⅡ期卵母细胞分别进行孤雌激活及体外受精,结果发现以在体外成熟液中添加10μmol/LEGCG的效果最佳,其对应的卵裂率和囊胚发育率均显著高于CK组.[结论]EGCG可用于优化水牛卵母细胞体外成熟体系,能有效提高卵母细胞的成熟率和体外发育潜力,且以水牛体外成熟液中添加10μmol/LEGCG的效果最佳.     

白藜芦醇和EGCG联用对小鼠骨骼肌抗氧化能力的影响

【目的】研究白藜芦醇（Resveratrol,RES）和表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-Gallate, EGCG）联合使用对小鼠骨骼肌抗氧化能力影响的机制,为开发能通过提高畜禽骨骼肌抗氧化能力进而改善肉品质的新型、绿色、安全的饲料添加剂提供理论依据。【方法】将体重18～22 g的清洁级昆明种小鼠40只,随机分为4组,即二甲基亚砜（DMSO）对照组（CK）、RES组、EGCG组和RES+EGCG联用组,每组10只,采取灌胃的方式对应给药,剂量为每天400 mg/kg,连续给药28 d后测定小鼠骨骼肌中抗氧化酶活力指标,并通过荧光定量PCR方法测定小鼠骨骼肌中抗氧化相关基因的表达量。【结果】RES和EGCG联用小鼠的采食量、体重和脏器指数无显著影响（P>0.05）。与CK相比,RES组、EGCG组及RES+EGCG组血清和肌肉中丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05,下同）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力显著升高,小鼠腓肠肌中GSH-Px、超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和核...     

茶多酚对鼠胎儿成纤维细胞凋亡的影响

为探究茶多酚(Tea polyphenols,TP)对体外培养鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibrolast,MEF)凋亡的影响。在MEF细胞培养液中添加质量浓度为0、10、40、70、100和150μg/mL的TP,分别培养24、48、72和96h,使用MTT法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝,MTT法)检测细胞活力;细胞培养72h,以RT-PCR检测B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B cell lymphoma leukemia-2,Bcl-2)、和Bcl相关的蛋白X(Bcl-as-sociated X protein,Bax)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)的相对表达量。MTT结果表明:TP质量浓度为40μg/mL时细胞密度略高于其他组,但是没有显著差异(P0.05);质量浓度为100μg/mL时,对MEF的生长产生抑制作用(P0.05),细胞形态没有发生明显变化;当质量浓度为150μg/mL时对细胞生长抑制作用明显(P0.05),从形态观察细胞出现调亡;通过反转录结果表明,对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3基因的分子转录水平没有影响(P0.05),表明质量浓度高于100μg/mL TP对MEF生长产生抑制作用,但对Bax基因、Bcl-2基因和Caspase-3转录分子机制无影响。     

鼠茅草间作对茶园土壤及茶叶品质成分的影响

【目的】解析茶园间作鼠茅草对土壤营养成分、土壤微生物群落结构以及茶叶品质成分的影响,为鼠茅草间作改良茶树种植生态环境,提升茶叶品质提供数据支撑。【方法】以间作鼠茅草2年的茶园土壤和茶叶鲜叶为试验材料,清耕茶园为对照,对茶园表层土壤pH、有机质、矿质营养成分等进行测定;运用16S、ITS高通量测序技术分别对土壤细菌和真菌种群结构进行测定分析;茶叶品质成分采用Agilent-7890B气相色谱仪进行检测。【结果】在茶园间作鼠茅草2年后,茶园土壤pH提高0.29,土壤有机质含量增加16.46 g·kg^-1;另外,有效磷、速效钾、铵态氮、硝态氮等在鼠茅草间作的茶园土壤中有不同程度的增加,其中有效磷是清耕茶园的5.88倍。鼠茅草间作茶园土壤全氮含量高于清耕茶园,全磷、全钾、全钠含量均低于清耕茶园。有效锌、有效铁、有效铜和阳离子交换量在鼠茅草间作茶园土壤中的含量均高于清耕茶园。鼠茅草间作茶园土壤细菌数量增加,真菌数量减少。有机质分解相关放线菌门细菌和子囊菌门真菌在鼠茅草间作茶园土壤中的相对丰度增加。鼠茅草间作茶园与清耕茶园茶叶鲜叶中共鉴定出259个茶叶代谢物组分,其中20种代...