绿色介质在L-丙氨酸催化不对称Aldol反应中的应用及理论研究

以线性氨基酸L-丙氨酸为催化剂,PEG-400∶H2O(3∶2)为反应体系,室温下直接催化环己酮与不同R基取代的芳香醛进行不对称Aldol反应,产物具有良好的对映选择性(68%ee~96%ee)。该方法操作简单,环境友好,催化剂易回收循环利用,利用过渡态理论结合烯胺机理对环己酮与4-溴苯甲醛反应中的过渡态分子构型(TS、SR-anti、TS-RS-anti)进行了理论研究,并在BL3YP/6-311G(2d,2p)理论水平下经IRC计算证明其构型的合理性。     

手性胶束中不对称诱导的结构效应

为了探讨手性胶束中的不对称诱导机理，研究了手性表面活性剂及受物的结构对反应的对映体选择性影响．结果表明，表面活性剂适当位置（如铵基的α－位）有羟基存在，可得到较高的光学产率，增长表面活性剂或硫醚中烷基的链长，一般有利于手性胶束的不对称诱导．     

手性胶束中不对称诱导的结构效应

为了探讨手性胶束中的不对称诱导机理，研究了手性表面活性剂及受物的结构对反应的对映体选择性影响。结果表明，表面活性剂适当位置（如铵基的α－位）有羟基存在，可得到较高的光学产率，增长表面活性剂或硫醚中烷基的链长，一般有利于手性胶束的不对称诱导。     

微乳液凝胶固定化脂肪酶立体选择性研究

以消旋布洛芬与正辛醇不对称酯化反应为指示反应，手性高效液相色谱分析法为检测跟踪手段，对微乳液凝胶固定化脂肪酶的立体选择性进行了初步表征。研究表明，用微乳液凝胶固定化后的脂肪酶，在保持较高催化活性的条件下，仍能表现出较高的立体选择性。在低转化率下，能得到高对映体过量值的S-构型布洛芬正辛酯。     

脂肪酶不对称水解兽药中间体对甲砜基苯丝氨酸乙酯的初步研究

对脂肪酶不对称水解对甲砜基苯丝氨酸乙酯进行研究,确立了对甲砜基苯丝氨酸乙酯酶促不对称水解的最适条件。微水有机溶剂体系为叔丁醇,脂肪酶为Novzyme 435。并以此为基础确定了最适的催化拆分条件:底物浓度为2.5 mg·mL-1,酶添加量为2.0 mg·mL-1,摇床转速为160 r·min-1,反应介质水含量为0.2%,微水相pH值为8.0,反应温度为30℃。Zn2+的加入能加快底物的转化率,但同时严重影响E值。在最适条件下反应192 h,DL-苏式-对甲砜基苯丝氨酸乙酯的底物对映体过量百分数由最初的35.13%上升到了92.54%,所对应的底物转化率为68.62%。     

大米蛋白酶水解条件及水解度对合成类蛋白的影响

观察了胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解米渣蛋白的条件及其水解度对合成类蛋白反应的影响。结果表明:胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解大米蛋白的最适温度分别为50℃、60℃和60℃,最适起始pH值分别为10.0、11.0和1.0,底物浓度分别为7%、5%和5%,E/S为1%、3%和7%,水解时间为4 h;该条件下,3种酶水解大米蛋白的水解度分别为54.0%、71.4%和57.3%,氮收率分别为56.3%、73.8%和58.1%;随着水解时间的延长,胰蛋白酶和胃蛋白酶水解产物中肽类组分变化小,而碱性蛋白酶水解产物中小分子的组分显著增加;大米蛋白水解产物的水解度对类蛋白反应的产率有显著影响,以胃蛋白酶为类蛋白合成酶时,大米蛋白的胰蛋白酶、碱性蛋白酶和胃蛋白酶水解产物的水解度分别在54.0%、71.4%和69.1%时,合成类蛋白的产率最高,分别为2.6%、17.5%和15.2%。     

手性农药的对映体拆分及选择性环境行为研究进展

手性农药进入环境后其对映体的环境行为表现出差异性,研究手性农药的对映体结构及选择性环境行为对发展高效低风险农药具有重要意义。对国内近10年来结晶拆分法、酶拆分法、液液萃取拆分法、化学拆分法、色谱拆分法等方法在手性农药对映体拆分中的应用,以及手性农药在水体、土壤、动植物体等手性环境中的选择性环境行为研究进展进行了综述,并对其趋势进行了展望。     

Novozyme435催化的对映体选择性转酯化(R,S)-3-n-丁基苯酞的研究

[目的]研究在正己烷中脂肪酶Novozyme 435对映体选择性转酯化（R,S）-3-n-丁基苯酞的可行性。[方法]通过Novozyme 435酶法反应试验和液相色谱分析反应后丁基苯酞的转化量,研究某些关键因素如水活度、加酶量、乙酸乙烯酯与丁基苯酞摩尔比和转化时间等对对映体转酯化反应的影响。[结果]在此反应中,合适的水活度0.62,Novozyme 435添加量8 mg/ml,乙酸乙烯酯与丁基苯酞摩尔比8∶1,转化时间40 h。在此条件下,丁基苯酞的eeS为96.5%,产物的eeP〉98%,丁基苯酞转化率为49.2%。[结论]脂肪酶Novozyme435对催化丁基苯酞的转酯化具有高对映体选择性。 更多还原     

手性三唑类农药环境行为研究进展

手性农药对映体选择性环境行为的研究是当前环境化学的一个热点,作为一类重要的杀菌剂和植物生长调节剂,三唑类农药大多是手性的,然而当施用到农田后,其在环境中的对映体选择性行为具有特殊的归宿.总结了近年来有关手性农药的一些研究成果和发展状况,综述了三唑类农药对映体选择性环境行为差异的研究进展,并对其应用前景进行了展望.     

六大茶类抑制α–淀粉酶和胰蛋白酶的效果比较

以碧香早的一芽二叶为原料,分别加工成绿茶、黄茶、白茶、乌龙茶、黑茶、红茶六大茶类,以蒸青固样制成固定样(对照),通过单因素试验筛选α–淀粉酶和胰蛋白酶的最优反应体系,在最优酶促反应下比较各大茶类对α–淀粉酶和胰蛋白酶的抑制效果。结果表明:通过单因素试验筛选,α–淀粉酶的最适反应浓度为18μg/m L,最适反应时间为20 min,底物、酶、抑制剂的最适添加顺序为先将α–淀粉酶与茶汤置于试管中,在37℃的水浴锅中预热5 min,再加入可溶性淀粉反应;胰蛋白酶的最适反应浓度为0.252 mg/m L,最适反应时间为15 min,底物、酶、抑制剂的最适添加顺序为先将胰蛋白酶与茶汤置于试管中,在40℃的水浴锅中预热5 min,再加入干酪素反应;不同茶类在相同茶汤质量浓度下的抑制效果不同,且在一定范围内均随茶汤质量浓度的增加,对α–淀粉酶、胰蛋白酶的抑制效果增强;在最优酶促反应条件下,对照、绿茶、黄茶、白茶、乌龙茶、黑茶、红茶对α–淀粉酶的抑制率依次为74.1%、74.5%、71.4%、70.4%、70.3%、64.1%、57.3%,其中,绿茶对α–淀粉酶的抑制效果最好,固定样与绿茶、白茶与乌龙茶之间差异不明显,白茶与黄茶、黄茶与乌龙茶之间差异显著(P0.05),其他茶类之间差异极显著(P0.01);对照、绿茶、黄茶、白茶、乌龙茶、黑茶、红茶对胰蛋白酶的抑制率分别为86.12%、85.35%、73.11%、68.76%、82.41%、64.76%、56.13%,其中,固定样与绿茶抑制效果较好,两处理的差异不明显,其他茶类之间差异达极显著水平(P0.01)。     

手性农药毒性评价进展

长期以来,手性农药都被当作单一化合物进行环境行为和生态毒性研究,但是由于手性农药对映体与生物大分子相互作用的立体选择性,手性农药对动物及人类的毒性作用可能具有对映体选择性.本文介绍了有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、苯基吡唑等手性农药对内分泌、神经、免疫、生殖、发育等毒性作用的对映体选择性,分析了对映体选择性产生的机制,在此基础上提出了未来的研究方向.     

园林植物在生物催化合成手性芳醇中的应用研究

研究不同园林植物材料作为生物催化剂,将前手性芳香酮催化为相应手性醇.所用植物材料主要包括园林绿化树木修剪产生的园林废弃物、室内肉质观赏植物及实验室培养的植物组织,用于反应的底物为潜手性的芳香酮类.研究结果显示,这些生物催化反应得到的产物有较好的收率(50％～75％)和对映体过量值(75.0％ ～ 95.5％),说明多种园林观赏植物组织材料在不对称合成中具有广泛的底物适用性和较高的立体选择性;研究同时发现,底物苯环上存在的取代基团对反应有影响,苯环的间对位上存在吸电子基团有利于反应的进行.     

胰蛋白酶酶解鹿血条件的优化

研究了胰蛋白酶对鹿血的酶解作用,以酶解产物对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除能力为指标,分析了酶浓度(酶∶蛋白)、底物浓度(鹿血∶水)、pH值、酶解时间和酶解温度等因素对酶解反应的影响.结果表明,最佳酶解条件是酶浓度为8%,底物浓度(鹿血∶水)为1∶3,pH值为7.5,酶解时间为3 h,酶解温度为55℃.在此条件下酶解产物对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除率分别可达91.63%和94.32%.     

壳聚糖复合物固定化脂肪酶用于催化合成手性化合物

以天然高分子聚合物壳聚糖(CS)负载在(MCM-41)介孔分子筛表面得到有机-无机复合物(CS-MCM-41),用于制备固定化假单胞脂肪酶,研究了磷酸盐缓冲溶液的pH值、酶量、固定化时间和温度等条件对固定化脂肪酶(PSL/CS-MCM-41)催化活性的影响,得到适宜的固定化条件:缓冲溶液pH=6.5,酶与载体质量比为1:10,固定化时间和温度分别为1 h和30℃.固定化脂肪酶用于苯乙酮一锅法还原转酯化拆分反应中,外消旋苯乙醇转化率为7.1%,(R)-乙酸苯乙酯的ee值为99%,(S)-1-苯乙醇的ee值为7.6%,对映选择性参数E=214.     

双醛氧化纤维素固定胰蛋白酶性质研究

研究固定化酶载体-氧化型纤维素条件优化,并用此载体固定胰蛋白酶。结果表明,当氧化剂高碘酸钠浓度为0.5 mol.L-1,氧化环境pH 2,氧化时间为3.5 h,反应温度为35℃时,氧化纤维素醛基质量分数可到达74.06%。以此为载体固定胰蛋白酶,可得到固定化胰蛋白酶最适温度为60℃,最适pH 9.0,固定化酶比自由酶热稳定性提高。在最适条件下,固定酶可重复使用5次以上,之后活性才有所下降,将固定化酶置于4℃冷藏保存,5 d后活性保持在90%,固定化酶表现出较高使用和贮藏稳定性,为胰蛋白酶广泛应用奠定基础。     

双酶直接酶解米糠制备短肽的工艺优化

 【目的】建立在中低温度下直接酶解米糠制备短肽的优化工艺。【方法】采用二次回归正交旋转组合设计优化直接酶解米糠制备短肽的工艺条件,其中总糖含量测定采用蒽酮比色法,水解度（degree of hydrolysis,DH）采用pH-stat法,蛋白质回收率采用凯氏定氮法。【结果】确定直接酶解米糠制备短肽最佳工艺条件为：米糠先经糖酶（viscozyme）反应2 h去除糖类杂质,然后用碱性蛋白酶（alcalase）和胰蛋白酶双酶水解,最适pH 8.2,温度45℃,alcalase与胰蛋白酶酶活比59﹕41,总酶活5 750 U/g底物,水解时间3 h。在此条件下,DH为23.04%,蛋白质回收率为84.33%,酸溶性多肽（TCA-SN）为68.40%,短肽分子量主要集中在1 000 D以下。【结论】在中低温和偏中性（pH 8.2）条件下,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶直接酶解米糠制备短肽,与先提取蛋白后酶解制备短肽的方法相比,具有操作步骤简单、蛋白质利用率高等特点,是一种制备米糠肽的新途径。     

复合酶法水解大麦虫蛋白制备酸性多肽及其抗氧化活性

采用复合蛋白酶(胰蛋白酶、碱性蛋白酶)对大麦虫蛋白进行控制酶解,研究酶解时间、酶活比、底物浓度、酶解温度、pH与加酶量等对酶解反应的影响;采用中心组合试验设计,优化酶解工艺;并对大麦虫酸性多肽清除自由基能力进行了测定评价.结果表明,酶解最佳条件为底物浓度5%,时间120 min,胰蛋白酶∶碱性蛋白酶1∶1,pH 8.71,温度48℃,加酶量16.91 mg/g.该酸性多肽对(O)_2~(-·))、DPPH·自由基有很好的清除作用,具有很强还原力.利用优化工艺制得酸性肽得率为79.05%.     

响应面法优化不同蛋白酶制备麦麸膳食纤维

以麦麸为原料,采用3种蛋白酶（碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶）对麦麸蛋白进行水解,制备麦麸膳食纤维。根据单因素实验结果,利用响应面对加酶量、反应时间、反应pH值、反应温度进行优化,确定各酶水解麦麸蛋白的最佳工艺条件。研究结果表明,碱性蛋白酶纯化麦麸膳食纤维的效果优于胰蛋白酶和风味蛋白酶纯化的效果,其最佳工艺条件为加酶量1 136 U.mg-1蛋白,pH值8.91,酶解温度59.94℃,酶解时间2.19 h,此时水解度达24.13%,膳食纤维纯度93.28%。     

栓皮栎AFLP反应体系的建立

以栓皮栎叶片为材料,研究了AFLP反应体系中酶切-连接反应的方法与时间、预扩增反应和选择性扩增反应等几个关键因素。建立一套适于栓皮栎基因组的AFLP反应体系:基因组DNA的提取宜采用改良的CTAB法;酶切-连接反应体系采用一步法,其中DNA模板用量为200ng,酶切-连接反应4h;酶切-连接产物用于预扩增反应的最佳稀释倍数为20倍;预扩增产物不需要进行稀释直接用作选择性扩增反应。对各环节的效果检测与引物筛选验证表明该体系适合栓皮栎的AFLP分析。     

胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的制备工艺研究

[目的]确定胰蛋白酶水解凤凰衣蛋白的最佳水解条件。[方法]通过交联葡聚糖凝胶柱对标准品谷胱甘肽(M307)与细胞色素C(M12300)混合物的过柱情况,通过扫描,确定过柱液在波长230 nm处有最大吸收,在波长230 nm处测吸光度绘制标准曲线,确定分子量为307~12 300的分子多肽分布。以其为依据,以目的肽段得率作为指标,分别考察了酶与底物比例、酶解时间、pH、温度对胰蛋白酶酶解凤凰衣反应的影响,通过正交试验确定了胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件。[结果]通过试验确定酶解反应的最佳水解条件,在此条件下,可得到最大的目的肽得率。[结论]胰蛋白酶酶解凤凰衣蛋白的最佳工艺条件:酶与底物比例为3%,pH值为8.0,水解温度为55℃,反应时间为3.0 h。此时目的肽段得率为最高值1.845%。