高、低温催青诱导家蚕滞育发生中的蛋白质修饰

【目的】研究高、低温诱导家蚕Bombyx mori滞育发生时蚕卵蛋白质修饰的差异,为后续深入探究昆虫滞育诱导的分子机制提供参考。【方法】饲养二化性家蚕品种,筛选出稳定的受高、低温诱导滞育发生的家蚕品系。以此为材料,分别于25和15℃孵化蚕卵,敏感期和点青期取样进行表观遗传学研究,通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测蛋白修饰的差异。【结果】高温(25℃)组蚕卵蛋白的甲基化修饰水平始终高于低温(15℃)组,点青期有显著差异;高、低温处理组之间的乙酰化修饰水平一直差异显著,在点青期高温组显著低于低温组;低温组的泛素化修饰水平始终高于高温组,尤其是发育前期;磷酸化修饰水平整体较高,但高、低温处理组之间差异不显著;丙二酰化在高、低温处理组之间没有明显差异;琥珀酰化的修饰水平始终较低,在发育后期有明显的差异修饰蛋白出现。【结论】蚕卵在25℃催青过程中蛋白质泛素化和乙酰化修饰水平与15℃低温组在全时期都存在显著差异,甲基化修饰水平在点青期存在显著差异,表明甲基化、泛素化和乙酰化修饰在家蚕早期滞育诱导过程中起作用。     

家蚕浸酸活化滞育卵早期胚胎发育的难溶性蛋白质差异表达分析

【目的】用盐酸刺激活化家蚕滞育卵的孵化,是蚕种生产长期沿用的一项人工孵化技术,但盐酸能活化滞育卵的机制却有许多未明之处,为此,从蛋白质组学的角度探讨盐酸对蚕卵滞育解除的作用关系。【方法】用双向电泳技术和电喷雾串联质谱技术,比较分析冷藏45 d的滞育卵浸酸前后的难溶性卵蛋白的差异表达。【结果】根据双向电泳图谱分析,在浸酸前的图谱中共检测到296个蛋白点,浸酸后的检测到302个蛋白点,两者相匹配的蛋白斑点有265个,匹配率为88.6％。特异性的蛋白点,浸酸前有31个,浸酸后有37个。对浸酸前存在、经浸酸处理后消失的2个特异性差异的高丰度蛋白点用电喷雾串联质谱技术作分析,NO.1蛋白序列与浆膜蛋白（chorion protein [Bombyx mori]）有55个氨基酸的肽段相匹配,NO.2蛋白序列与热激蛋白（heat shock protein hsp 19.9 [Bombyx mori]）只有15个氨基酸的肽段相匹配,推测是一种未知蛋白。【结论】滞育性蚕卵经浸酸后,难溶性卵蛋白有差异表达,浸酸前后的一些蛋白种类或分子量发生了变化。     

高浓度氧处理法阻断蚕卵滞育

【目的】比较高浓度氧处理法(高氧法)与传统HCl处理法(HCl法)阻断蚕卵滞育效果的差异,探讨高氧法阻断滞育在家蚕Bombyx mori转基因技术体系上的应用。【方法】采用高氧法和HCl法在产后20 h处理二化性蚕品种‘大造’,比较孵化率、孵化时间,调查高氧法的最佳处理条件;将高氧法应用于一化性蚕品种‘土耳其’和转基因二化性蚕品种‘大造’,调查其对一化性蚕品种蚕卵阻断滞育效果及转基因二化性蚕品种显微注射后蚕卵阻断滞育效果。【结果】高氧法对二化性蚕卵在孵化率、孵化时间上都与HCl法有相近的阻断滞育的效果,其最佳条件为产卵后20 h用体积分数为70%的O2处理40 h;该方法也能成功阻断一化性蚕品种,孵化率达(71±20)%;高氧法处理的显微注射转基因家蚕卵孵化率达到了(49±9)%,而对照组的孵化率为0。【结论】高氧法为今后生产上替代HCl法,采用安全环保的蚕卵阻断滞育技术,解决转基因蚕卵阻断滞育和提高转基因家蚕育种进度的关键问题提供了可行的新方法。     

家蚕BmHsp19.5基因的鉴定及在滞育卵中的表达分析

基于前期转录组学研究结果,从家蚕滞育卵和发育蚕卵中筛选出差异表达基因家蚕BmHsp19.5.为了进一步了解该基因的序列信息、表达特征以及在家蚕卵滞育过程中的功能,本文采用基因克隆、生物信息学方法以及qPCR检测等技术手段对该基因进行分析.结果表明:家蚕BmHsp19.5基因的ORF(open reading frame)框全长504 bp,共编码167个氨基酸,其蛋白的理论相对分子质量为1.95×10⁴.该蛋白65-157位氨基酸为Hsp20功能结构域,符合小热激蛋白家族结构特征.该基因在滞育卵和非滞育卵中表达量存在显著差异,在滞育卵中呈上调表达,且在第3 d达到最大值,推测该基因与滞育过程有关,可能在家蚕滞育进入时发挥了重要作用.     

蚕卵经盐酸浸渍后的卵壳蛋白变化分析

对932品种在卵期发育和幼虫期饲养阶段实施温湿环境调控,让其产下滞育卵和非滞育卵。滞育卵经即时浸酸处理后,用扫描电镜观察卵壳的变化,可见卵壳表面比对照出现较多的裂痕。通过SDS-PAGE电泳技术,比较滞育卵、滞育卵经即时浸酸处理、非滞育卵的卵蛋白变化,发现滞育卵经浸酸处理后,20 ku以下的小分子量蛋白明显减少。利用shotgun技术对此类小分子量蛋白组分进行鉴定分析,发现在滞育卵和非滞育卵中都存在Er B.1、Er B.2、Er B.3、Hc-A和Hc-B卵壳蛋白,在经即时浸酸处理过的滞育卵中却未发现,由此推测蚕卵经浸酸处理后会引起这5种卵壳蛋白的降解。     

家蚕己糖激酶基因进化分析及其多转录本在胚胎早期发育过程中的表达特性

【目的】明确家蚕（Bombyx mori）二化性品系胚胎早期发育过程中己糖激酶基因（BmHK）不同转录本的表达特性,为深入探究BmHK基因各转录本的生物学功能及揭示其在家蚕胚胎早期发育中的作用机制提供理论依据。【方法】从NCBI检索并下载家蚕等12种昆虫的HK氨基酸序列,采用MEGA 7.0的邻接法（NJ）构建基于HK氨基酸序列相似性的系统发育进化树。以家蚕二化性品系秋丰活化越年蚕卵（丙2胚胎）为材料,分别制备非滞育命运卵（ND）、滞育命运卵（DD）和即时浸酸卵（IA）,采用实时荧光定量PCR检测BmHK基因各转录本在家蚕二化性品系胚胎早期发育过程中的表达特性。【结果】BmHK基因属于HSP70-actin家族,存在4个不同的转录本,其长度分别为4610、4608、2818和1520 bp,依次命名为BmHK-a、BmHK-b、BmHK-c和BmHK-d。BmHK-a在3种蚕卵胚胎早期发育过程中整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,IA蚕卵中的BmHK-a相对表达量于发育2 h达峰值,在ND蚕卵和DD蚕卵中于发育48 h达峰值,此后其表达快速下调,至发育96 h均处于较低水平;BmHK-b在3种蚕卵中的表达水平整体上表现为IA蚕卵>ND蚕卵>DD蚕卵,3种蚕卵中的BmHK-b相对表达量变化趋势基本一致,均随发育时间推移呈逐渐上升趋势;BmHK-c在3种蚕卵中的表达差异明显,初产蚕卵中已有较高的表达水平,受精后迅速升高,至发育72 h后BmHK-c在3种蚕卵中的相对表达量再次升高;BmHK-d在3种蚕卵中的相对表达量整体上呈先升高后降低的变化趋势,且各时间点均表现为ND蚕卵>IA蚕卵>DD蚕卵,但IA蚕卵中BmHK-d表达峰值出现的时间早于DD蚕卵和ND蚕卵。【结论】BmHK-a和BmHK-d主要在家蚕胚胎早期发育（产卵或浸酸后3 d）过程中发挥重要作用;BmHK-b虽然也参与家蚕胚胎早期发育过程,但不是主要的糖代谢相关酶;BmHK-c与家蚕胚胎早期发育关系密切,通过糖酵解为胚胎发育提供能量。     

家蚕滞育人工解除及其机理研究进展

家蚕是卵滞育的昆虫,其滞育与滞育解除对蚕业生产密切相关.综述分析了近年国内外有关家蚕滞育人工解除的研究方法,包括低温处理、浸酸处理和H2O2处理等,并对滞育解除的机理进行了探讨.     

绿盲蝽滞育与非滞育卵的形态学观察

在河南省新乡市采集绿盲蝽成虫的非滞育种群和自然越冬种群置于室内饲养,收集其所产的卵进行观察,并将越冬卵放入4℃冰箱经过低温处理后重新进行孵化.结果表明,越冬卵在温度26℃,相对湿度80%±10%,光照L:D=16:8的试验条件下不能像非滞育卵一样正常孵化,经低温处理60 d后能够正常孵化,说明了绿盲蝽以卵的滞育进行越冬的特性.非滞育卵在相同条件下孵化5 d以后出现红色复眼,随后卵变为黄绿色;而滞育卵同样条件下进行孵化并不出现红色复眼且颜色为黄色.     

不同库外保护时间和冷藏时间对滞育卵冷藏浸酸种孵化率的影响

[目的]验证库外保护时间和冷藏时间对滞育卵冷藏浸酸种孵化率的影响程度,为今后做好蚕种保护冷藏浸酸工作提供理论依据.[方法]以“两广二号”正、反交一代杂交种为研究对象,将不同库外保护时间(5~60d,25℃)和不同内库冷藏时间(100~175 d,3~5℃)的滞育卵,在同一时间以标准浸酸处理后统计其实用孵化率和孵化整齐度.[结果]蚕种冷藏时间100~175 d、库外保护时间10~60 d时,蚕种实用孵化率为90 33%~97.33%,符合蚕种质量标准规定的实用孵化率在90.00%以上的要求.冷藏时间100~175 d、库外保护时间5~60d的蚕种孵化并不在同一日内完成,其中,库外保护5~10 d的蚕种孵化比库外护时间更长( 15~60 d)的蚕种孵化时间相对早且集中,即库外保护时间越长,孵化时间相差程度越明显.[结论]库外保护时间长短对滞育卵冷藏浸酸种实用孵化率影响不明显,但对蚕种的孵化整齐度有影响,尤其是库外保护时间在10 d以内的蚕种表现更为明显.     

细胞周期蛋白家族基因在家蚕胚胎期的表达分析

【目的】研究家蚕细胞周期蛋白家族基因(CyclinA、CyclinB、CyclinB3、CyclinE、CyclinL1)在滞育卵与即时浸酸处理的滞育卵发育过程中的转录活性,为家蚕胚胎发育及细胞周期调控机制研究提供参考。【方法】以家蚕品种大造为试材,取产后1~8d的滞育卵及产后20h即时浸酸的非滞育卵,提取其RNA反转录成cDNA,采用实时荧光定量PCR方法分析家蚕Cyclin家族基因在胚胎发育过程中的转录水平。【结果】在即时浸酸处理的家蚕非滞育卵中均能检测到Cyclin家族基因的表达,但不同发育阶段Cyclin家族基因表达量差异很大,在发育开始的1~3d,Cyclin家族基因变化显著,说明此期细胞分裂频繁,正处于组织和器官活跃形成时期。在胚胎发育晚期,除CyclinL1外的其他基因表达量都很低,表明此时幼虫器官发育几近完成,因此细胞分裂迟缓。而滞育卵从蛾体产下经过3d后,细胞分化停滞于G2期,Cyclin家族基因也进入沉默状态。【结论】Cyclin家族基因在家蚕胚胎发育过程中具有重要的调控作用。     

家蚕化性研究

1.地区气温年周期性变化规律,是家蚕化性类型形成的主要原因,湿度、光照等为辅助条件。 2.有休眠期各类化性的家蚕,发育生长和休眠现象是在气温年周期性变化规律中一定程度的高温和低温交替的生存条件下形成的。 3.“一化性”家蛋的化性遗传性,为一年一个世代,但依品种不同,化性遗传保守性有强弱之分,一般说,生活在冬季愈冷地区的“一化性”种,其化性遗传保守性愈强,以其感受低温程度深,容易得到休眠的相对高温。 4.高温感光催青法,符合“二化性”家蚕化性遗传规律第二世代的温度条件和光照程度的要求,是为人工移用其第二世代的环境条件,故产生越年性卵。 5.温带的“二化性家蚕”,若长年累代的人工移用其第二世代环境条件(指主要的高温感光催青法)即易形成第二世代产越年性卵的化性遗传保守性,在春季将其越冬卵用15℃低温避光催青,仍产生多数越年性卵(瀛文是二化性遗传保守性强的品种,故产越年性卵率小)。如欲同复其一年两个世代的化性遗传性,可实行低温催青选育之。 6.“二化性”家蚕种,如用20℃所谓“中间温度”催青的,其化性动摇于第一与第二世代之间,故混生越年性卵及不越年性卵。 7.广东家蚕“有休眠期多化性”种,在广东地区越年性卵感受低温程度,是介乎热带和温带地区的“中间温度”,其化性遗传也表现了中间类型,有混生越年性卵及不越年性卵的现象,是化性遗传动摇的家蛋品种。 8.广东家蚕“有休眠期多化性”种引进温带地区,越年性卵感受各季严寒的低温后,可以减少年内世代回数。 9.广东家蚕“有休眠期多化性”种,夏秋各世代混生越年性卵及不越年性卵,秋末,春初各世代几全部产不越年性卵,若在年内每月均有桑叶供应的环境里,可利用其不越年性卵通过各世代轮转全年。 10.广东家蚕“有休眠期多化性”种各世代的不越年性卵若用高温催青低温饲育则越年性卵出现多,高温催青更高温度饲育反之;低温催青低温饲育全部产不越年性卵,低温催青,高温饲育亦然。 11.越南家蚕“无休眠期多化性”种,因越南地区气温年周期性变化规律中缺少15℃以下的低温条件,故其世代绵延,发育、生长、繁殖不已。 12.用温度、湿度、光线影响家蚕化性的现象,是化性遗传性的表现,若用“抑制质”;“化性决定”;“抗接触酶之质量,二重因素关系说”,都未能得到全面的解释。     

不同冷藏温度对家蚕卵磷脂量的影响

家蚕滞育卵对低溫的抵抗性与卵内磷脂的代谢有一定关系。家蚕卵在5℃和1℃冷藏120天后,卵磷脂和脑磷脂的含量分别比冷藏前增加了50％左右。     

广西现行家蚕品种两广二号原种随时孵化技术

[目的]明确保护时间、冷藏时间和浸酸时间3个因素对两广二号原种短期冷藏浸酸及延期冷藏浸酸实用孵化率的影响,为调节蚕种供应期及广西家蚕原种短期冷藏浸酸处理过程中制定不同冷藏时间的蚕种入库和盐酸刺激量标准提供依据,也为改进当前的短期冷藏浸酸技术提供指导.[方法]以两广二号原种4个亲本(芙蓉×932、932×芙蓉、湘晖×7532和7532×湘晖)为试验材料,按入库前保护时间、冷藏时间及浸酸时间3个因素3水平设计正交试验,调查4个亲本各因素不同水平的实用孵化率,筛选提高实用孵化率的最佳组合,并在此基础上选取孵化效果较好的亲本探讨延期冷藏适期.[结果]通过正交试验分析,4个亲本在不同冷藏天数中均可找到各因素条件较好的最高实用孵化率处理组合,其中,芙蓉×932为48 h-30 d-6 min,932×芙蓉为48 h-30 d-5 min,湘晖×7532为48 h-30 d-7 min,7532×湘晖为64 h-40 d-6 min.短期冷藏孵化效果较好的两个亲本(芙蓉×932和湘晖×7532)延期冷藏试验区与对照区的实用孵化差异不显著(F相似文献   

黄脊雷蓖蝗越冬卵的滞育发育特性

黄脊雷蓖蝗Rammeacris kiangsu Tsai是我国竹林的重要害虫,1年发生1代,以卵越冬.为弄清其卵滞育发育特性,调查了卵期温度及低温处理对其卵孵化的影响,检测了恒温条件下胚胎的发育进度及卵粒含水量、过冷却点的变化.结果表明,在不同的卵期温度条件下黄脊雷蓖蝗卵的孵化前期均较长,且孵化不整齐、孵化期间长;低温处理30、60或90 d可显著促进其卵的孵化,低温处理的时间越长效果越明显.说明黄脊雷蓖蝗的卵存在滞育现象,低温能明显降低其卵滞育强度.胚胎头幅、触角长度及体长的测量结果显示,25℃温度条件下的黄脊雷蓖蝗的胚胎发育可划分为3个阶段,即前期的持续发育阶段、中期的发育延迟阶段和后期的发育恢复阶段.产卵后40 d左右卵进入滞育,40-75 d为卵的深度滞育期.黄脊雷蓖蝗的卵粒产下后水分含量较低,在25℃的温度条件下,于产卵后25 d前后有一快速的吸水过程,其后卵粒的含水量增加缓慢,可见其卵粒的吸水发生在进入滞育状态之前.在25℃的条件下,黄脊雷蓖蝗卵粒过冷却点的变化亦包含3个阶段,即胚胎发育初期的较高阶段、中期持续而稳定的较低阶段及后期的提升阶段,可以认为黄脊雷蓖蝗越冬卵耐寒性的提高与其滞育的发生密切相关.     

春制春用蚕种的保护

<正>蚕种的质量不仅取决于饲育期的气象条件和饲育制种技术,而且与蚕种保护阶段的温湿度和技术处理紧密相关。实践证明,成绩优良的蚕种,若蚕种保护、冷藏、浸酸处理不当,易造成死卵增加,孵化率下降,甚至完全失去使用价值。蚕种保护主要指春用种的保护,其实质就是对蚕卵越年性的管理,其要领就是根据蚕卵不同时期的生理特性,给予合理的环境条件保护,从而使蚕种滞育期和解除滞育及其耐冷藏时间相协调,并使各粒卵之     

家蚕小分子热激蛋白BmHsp19.1基因克隆及在蚕卵中的表达特征

小分子热激蛋白(small heat shock proteins, sHsps)是细胞抵御压力首先反应的蛋白,目前家蚕卵滞育相关的sHsps研究较少.为了更好地了解sHsps在滞育过程中的作用,以转录组筛选出的差异表达基因BmHsp19.1为研究对象,通过生物信息学分析、基因克隆、 PCR等方法对其进行克隆鉴定及在滞育卵、非滞育卵等蚕卵中的表达特征进行分析.结果发现：BmHsp19.1基因ORF框全长507 bp,编码168个氨基酸,理论分子量为19.06 kDa,有典型的Hsp20结构域,属于sHsps家族;qRT-PCR结果显示该基因在滞育卵3～7 d表达量上调,而在非滞育卵中仅在第7 d上调表达,且滞育卵中表达量显著高于非滞育卵,暗示BmHsp19.1基因在蚕卵进入滞育时可能发挥作用,起到了保护机体免受损伤的抗逆作用.结果为解析BmHsp19.1基因功能提供了有用的信息,也为其他昆虫的sHsps研究提供了一些有价值的参考.     

中间感温对孵化不齐蚕种发育的影响

针对两广二号蚕种孵化不齐的问题,探索改善其孵化效果的特殊处理方式。该试验调查了两广二号孵化不齐蚕种浸酸前、后采取中间感温不同时限条件下点青整齐度和实用孵化率情况。结果表明:浸酸前后采取中间感温对蚕卵缩小卵龄开差均有明显效果,且在一定范围内,中间感温时限越长,蚕卵点青整齐度和实用孵化率越好。     

催青期中蚕种的卵面消毒

蚕卵产下后,常粘附着一些蛾尿、鳞毛、灰尘以及病原体,当蚕儿孵化时,若食下带有病原体的卵壳,就有可能造成食下传染,感染发病,给生产造成损失.尽管蚕种经过浸酸或浴消等技术处理,能起到对蚕卵消毒的作用,但由于在冷藏、运输、催青过程中,难免不被空气中和用具上存在的病原微生物污染而诱发蚕病.     

越年种的冷藏保护技术要点

蚕种浴消后,冷藏就成为蚕种保护工作的重要措施之一.因越年蚕种入冬后接触一定程度的低温,蚕卵内的胚胎就会逐渐解除滞育成为活性卵,若活性蚕卵感受到10℃以上的温度,胚胎便会逐渐发育以至孵化.如果将越冬后的蚕种在自然温度中保护,而此时正是冬春之交,气温忽高忽低变化较大,最后导致胚胎发育极不整齐,甚至孵化较早,蚁蚕因没有适熟桑叶而遭受损失.为了避免越冬后的蚕种孵化过早,促使蚕卵孵化齐一;同时又能根据生产需要,准确预测催青后的收蚁日期,随时调节养蚕日期,从而能更好地加强生产的计划管理;因此,越冬后的蚕种必须要在适当的时期进行冷藏保护.     

桑蚕卵催青后卵面消毒时期和技术的研究

<正>桑蚕卵浴消时,蚕卵还处于滞育状态,对消毒药的耐受性较高,经过催青桑蚕卵滞育解除、已经发育,出蚕前3天已经成型,对消毒药物的耐受性会发生变化,因此有必要对出蚕前卵面消毒药物、药液适宜浓度和时期进行试验,探讨适宜药物种类,浓度和时期。2013年河南省蚕业科学研究院对桑蚕原种、普通种作催青后的卵面再次消毒试验,对消毒时期和消毒技术进行探讨。现将试验结果汇总如下。一、材料与方法(一)供试材料青松原种、皓月原种、青松X皓月普种(均由河南省蚕业科学研究院