玉树地区独一味ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为了建立玉树地区独一味的简单重复序列区间聚合酶链式反应(ISSR-PCR)体系并筛选出引物,采用M2+、DNA Taq酶、dNTP、模板DNA和引物进行5因素4水平正交实验,对独一味ISSR-PCR反应体系进行筛选.结果表明:最佳反应体系(25μL)为:10×PCR Buffer,75 ng模板DNA,0.75 μmol/L引物,0.5 UTaq DNA聚合酶,1.25 mmol/L MgCl2,0.05 mmol/LdNTP.然后确定了引物的最佳退火温度,并筛选出811、818、825、826、834、835、836、840这8条丰富多态稳定扩增的引物.该研究建立的玉树地区独一味ISSR反应体系具有稳定、清晰以及重复性好等特点,可为该区独一味的繁育系统和遗传多样性的进一步研究提供参考.     

金线莲ISSR-PCR反应体系建立

利用正交设计L16(45)对金线莲ISSR-PCR反应体系的5因素(模板DNA、Taq酶、引物、Mg2+和dNTP)在4个水平上进行优化试验,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。结果表明:最终建立的金线莲ISSR-PCR的最佳反应体系为,在25μL的反应体系中,DNA模板为40ng、Taq酶为1.60U、引物浓度为0.80mmol/L、dNTP浓度为0.96mmol/L、Mg2+浓度为2.40mmol/L。该反应体系的建立为金线莲种质资源分类、遗传多样性分析提供了更客观可靠的方法。     

云南松ISSR-PCR反应体系建立及优化

为建立和优化云南松ISSR-PCR反应体系,运用正交实验分析了模板DNA、TagDNA聚合酶、引物、Mg~(2+)和dNTPs 5个因子对云南松ISSR-PCR反应的影响。结果表明:云南松ISSR-PCR 25μL反应体系中5个因子最佳水平为:DNA模板为3.6 ng、TagDNA聚合酶为2.0 U、引物浓度为0.8 mmol/L、dNTPs浓度为0.20 mmol/L、Mg~(2+)浓度为2.0 mmol/L。     

铁线莲园艺品种ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选

以铁线莲的园艺品种Clematis‘Gravetye Beauty’为试材,采用改良CTAB法提取其基因组DNA为模板,采用单因子试验设计,研究模板DNA含量、引物浓度、Master Mix对ISSR-PCR反应的影响,以期构建基于ISSR分子标记技术的铁线莲园艺品种遗传图谱。结果表明:25μL C.‘Gravetye Beauty’ISSR-PCR最佳反应体系的模板DNA用量5ng、引物浓度0.8μmol/L、Master Mix 12μL;利用该体系从38条ISSR引物中筛选出扩增条带清晰、多态性好的11条引物。     

鸭梨Hc ISSR-PCR反应体系的优化

应用正交设计的方法对影响鸭梨Hc ISSR-PCR反应的4个因素(模板DNA、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶)进行5个水平的优化试验,以DPS 7.55软件分析。结果表明:鸭梨HcISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为:模板DNA 60 ng、引物浓度0.4μmol/L、dNTPs浓度0.1mmol/L、TaqDNA聚合酶2 U。     

国兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用正交设计与单因素结合法,对国兰ISSR-PCR反应体系中的4个因素(dNTPs、引物浓度、Mg2+、Taq DNA聚合酶)进行优化试验,结果用DPS软件进行分析.结果表明:各因素对PCR结果均有显著影响,其中Taq DNA聚合酶对反应的影响最大;筛选出了各反应因素的最佳水平,建立国兰ISSR-PCR的最佳反应体系(25μL)为:dNTPs 0.2mmol/L、引物1.0 μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、Taq DNA聚合酶1U.     

锦带花ISSR-PCR反应体系的建立与优化

以锦带花幼叶为试材,提取锦带花基因组的DNA,并对其纯度、浓度进行检测,建立适合锦带花的ISSR-RCR反应体系.结果表明:DNA扩增效果良好,完全能满足进一步试验的需要.同时对锦带花ISSR-PCR反应体系中各个影响因素进行优化,建立了适合锦带花ISSR分子标记的最佳反应体系,即在20μL的反应体系中,含稀释浓度为3倍的DNA模板,0.20 mmol/LdNTP,稀释10倍体积高保真PCR缓冲液含(Mg2+)3.0 μL;1.00 μmol/L引物,1.25 U Taq酶.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,52.0℃退火45 s,72℃延伸1.50 min,45个循环;最后72℃延伸5 min,4℃保存.应用该ISSR体系对3份锦带花种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.     

芫花ISSR-PCR扩增反应体系的优化

以芫花(Daphne genkwa)DNA为模版,利用单因素试验,分析DNA模版、Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶和引物对ISSR-PCR反应的影响,适合芫花的ISSR-PCR的反应体系:20μl反应体系中含2.5mmol/L Mg2+,0.2mmol/L dNTPs,1.0u TaqDNA聚合酶,0.8μmol/L引物,40ng模板DNA。     

鸭梨ISSR-PCR反应体系的初步建立

以沧州泊头市鸭梨为试验材料,对鸭梨ISSR-PCR反应体系中的模板DNA用量、dNTPs浓度、引物浓度以及Taq酶浓度进行了探索,初步建立适合鸭梨ISSR-PCR反应体系为:在20μL反应体系中,含1×TaqPCRBuffer[1.5 mmol/L Mg2+]、0.15 mmol/L dNTPs、0.40 μmol/L...     

正交设计优化莲藕ISSR-PCR反应体系研究

利用正交实验设计的方法,对莲藕ISSR-PCR反应的四因素(TaqDNA聚合酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度)三水平进行优化分析,并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测。结果表明:20μL的ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度为:10×PCRbuffer 2.0μL、dNTP150μmol/L、引物1.2μmol/L、Mg2+2.0 mmol/L和TaqDNA聚合酶4 U,最佳模板DNA浓度为40～60 ng,引物U826的最佳退火温度为48.7℃。     

石榴ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

现利用正交设计L16(45)探讨DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶对石榴ISSR-PCR反应体系的影响,首次应用加权平均法及百分制对正交实验结果进行评分,并应用DPS数据处理系统进行数据分析;同时对石榴ISSR-PCR最佳反应体系进行退火温度梯度试验。结果表明:适合石榴的ISSR-PCR最优反应体系(25μL)为:Mg2+1.75 mmol/L、dNTPs0.15 mmol/L、TaqDNA聚合酶1 U、引物0.8 mmol/L、DNA模板20 ng;引物UBC 811的最适退火温度为51.2℃,且最适退火温度因引物而异。     

正交设计优化大白菜ISSR-PCR反应体系

以大白菜为试材,采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取大白菜基因组DNA,采用正交实验设计方法,对dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶、引物、及模板DNA五因素四水平进行优化,筛选并建立了适合大白菜的ISSR-PCR反应体系。结果表明:25μL的反应体系中含有1.5mmol/L Mg2+、200μmol/L dNTP、0.5UTaq DNA聚合酶、0.7μmol/L引物、30ng模板DNA。在此基础上探讨了最佳循环次数,应用该优化反应体系,用3个不同循环数对资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系适宜的循环次数是30。     

正交试验设计在建立杜鹃花RAPD-PCR反应体系中的应用

利用正交试验对影响RAPD-PCR反应体系的各种因素进行研究,从而建立适合杜鹃花RAPD反应的最佳反应体系,最终选择杜鹃基因组RAPD-PCR的最佳扩增反应体系,即模板DNA 80ng、随机引物0.5μmol/L、dNTPs 1.1mmol/L、MgCl2 2.5mmol/L,1.2μmol/LTag-DNA聚合酶,buffer 2μL,总反应体系20μL.试验设计的6个因子、5个水平中,Mg2 、dNTPs和引物的浓度是主要因子,其中Mg2 的浓度对试验的影响最大,dNTPs和引物浓度在较低的水平就可满足需要,高浓度并没有显著提高试验效果.     

桦褐孔菌ISSR-PCR反应体系优化与建立

采用改良CTAB法提取了桦褐孔菌总DNA,确定ISSR最适25 μL反应体系为模板DNA浓度15 ng·μL-1,dNTPs 浓度150 μmol· L-1,引物浓度25 μmol·L-1,Taq DNA聚合酶浓度2.0 U,Mg2+浓度1.4 mmol· L-1,10×buffer 2.5 μL,其余用ddH2O补足;确定ISSR扩增程序为:94℃预变性5 min,35个循环:94℃变性1 min、45℃～51℃退火1 min(退火温度因不同引物而定)、72℃延伸1 min,最后72℃延伸5 min,4℃保存.筛选出16条ISSR引物,并成功应用引物UBC842完成了21株桦褐孔菌的ISSR-PCR反应.     

杜鹃组织培养技术研究进展

杜鹃是世界著名观赏植物,也是我国十大传统名花之一,为杜鹃花科杜鹃花属常绿或落叶灌木,仅我国云南有少数种类为乔木.全世界杜鹃花属约有900余种,分布于亚洲、北美洲和欧洲,亚洲最多,约850种,其中我国约530种,占世界种类的59%,是杜鹃花的重要发源地和分布中心[1].     

杜鹃组培苗的练苗技术研究

以映山红杜鹃的叶片通过无菌培养获得的组培苗为材料,研究了不同育苗基质、不同覆盖措施、施用不同肥料对其练苗效果的影响,以期筛选最适宜的练苗条件。结果表明:练苗基质最适配比是腐殖土∶锯末∶珍珠岩=3∶1∶1;最适覆盖方式为透光率25%遮阳网直接覆盖;采用0.1尿素+0.1%KH2PO4效果最佳,苗木成活率最高。     

修剪对野生杜鹃开花的影响

研究了不同修剪方法对野生杜鹃小年开花和枝条生长之间的影响.结果表明:花芽数量和开花数量,短截、摘花和轻回缩与对照存在极显著差异;枝条生长量,摘花、短截、轻回缩、中回缩和重回缩与对照存在极显著差异;摘花和短截既有利于野生杜鹃枝条生长量的增加,还能有效促进花芽分化和开花,花芽数量分别达64.6个/m2和72.8个/m2,开花数量分别达60.8朵/m2和68.5朵/m2.