体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

特克赛尔羊JIVET技术研究

探讨特克赛尔羊JIVET(juvenile in vitro embryo technology)技术,为优种绵羊JIVET技术体系完善提供技术支撑。试验对4~8周龄特克赛尔羊超数排卵,采用活体采卵的方法及对卵母细胞的体外成熟—受精—受精卵培养—受精卵移植的方法进行特克赛尔羊JIVET技术研究。结果显示:4只4~8周龄特克赛尔羊获得可用卵母细胞296枚,平均74枚/只;获得2~4细胞期受精卵205枚,卵裂率为69.26%,平均获2~4细胞期受精卵51.25枚/只;将66枚2~4细胞期受精卵移植给11只受体羊,6只羊受孕,生产11只羔羊,受胎率为54.55%。研究表明,本试验方法可作为特克赛尔羊JIVET技术研究的方法。     

不同蔗糖浓度、供体细胞保存温度和融合温度对小鼠体细胞克隆胚胎发育的影响

以昆明小鼠为实验动物,经过超数排卵后得到卵丘卵母细胞复合体(COCs),以卵丘细胞为核供体细胞,卵母细胞为核受体细胞进行核移植,分析比较了不同蔗糖浓度对小鼠卵母细胞去核时间、去核率及重构胚体外发育的影响,并探讨了供体细胞的保存温度和融合温度对重构胚体外发育的影响.结果表明,各蔗糖浓度组的去核率均达到100%,但3%、4...     

绵羊胚胎移植技术在柴达木地区的应用

2006年在青海省海西州德令哈市洋嘉生态农业开发有限公司进行了绵羊胚胎移植试验,试验中同期发情和超数排卵处理青海高原毛肉兼用半细毛羊共86只,同期发情率达88.37%,其中将超排效果好的11只羊做为胚胎移植受体羊,同时处理供体羊特克赛尔羊7只。试验结果:11只受体羊平均超数排卵点2.8个/只,7只供体羊平均超数排卵11.9枚,取卵9.7枚,卵子受精率17.65%,移植12枚胚胎,其中1只受体羊移植双胚,最后观察到移植的11只受体羊中妊娠5只,产羔5只(移双胚的羊产1只羊羔),移植受胎率达45.45%,羔羊成活率达100%。     

小尾寒羊羔羊超数排卵及卵母细胞玻璃化冷冻保存效果研究

以我国地方品种小尾寒羊作为供体,对不同年龄羔羊(6～8周龄和12～14周龄)超数排卵效果以及卵母细胞冷冻保存对体外受精、体外胚胎发育、胚胎移植产羔的影响进行研究。结果表明:6～8周龄组羔羊只均超排处理获卵数和可用卵数(60.8枚和58.2枚)显著高于12～14周龄组(27.3枚和26.0枚)(P<0.05);经玻璃化冷冻—解冻后的卵母细胞体外受精,冷冻组的卵裂率和桑椹胚发育率(67.8%和35.6%)均显著降低于对照组(79.2%和53.8E)(P<0.05);玻璃化冷冻保存体外生产的胚胎,经移植后成功产下4只健康羔羊(4/52)。     

布尔山羊胚胎移植技术的研究与应(简报)

1999年10～11月份,分3批使用阴道栓+FSH超数排卵供体布尔山羊13只.在放入阴道栓的第8～10 d,连续3d递减量肌肉注射FSH(澳大利亚)320 mg.9只供体羊发情、配种、采胚(有效率69.23%).平均采胚数18.11±5.18枚,其中可用胚平均数15.44±6.31枚(可用胚率85.28%).将139枚7日龄可用胚移植受体关中奶山羊89只,妊娠50只,妊娠率56.18%.其中鲜胚移植妊娠率61.11%(44/72),冻胚移植妊娠率41.67%(5/12),二分割胚移妊娠率20%(1/5).50只妊娠受体羊共产羔68只,每只供体羊平均获羔羊7.56只.供体羊采胚后,平均39.9 d发情,配种,全部妊娠产羔,产羔率200%.胚胎移植羔羊性别、初生重、发病率和布尔山羊自繁羔羊无显著差异,P＞O.05.本次布尔山羊移植产生明显的经济效益,技术成熟,可推广应用,逐步产业化.     

波尔山羊胚胎移植试验研究

22只波尔山羊供体用CIDR FSH PG 进行超排处理, 用手术法采胚,共获138枚可用胚, 头均获可用胚为6.27 ( 138/22) 枚,其中超排育成羊6只,只均回收可用胚5.50枚,经产母羊16只,只均回收可用胚6.57枚,经产羊平均回收胚胎总数高于育成羊;手术法移植78只受体羊,妊娠53只,妊娠率68.00%,产羔71只,其中产双胎的有18只受体,占妊娠总数的34.00%.     

乳用绵羊——东弗里生羊胚胎移植效果初报

在国内首次对20只乳用绵羊-东弗里生羊进行超数排卵和胚胎移植,16只超排有效供体羊采胚结果统计,只均黄体数10.8个±4.1个,采胚数10.8枚±3.9枚,可用胚数3.6枚±4.4枚,无精胚0.88枚±1.4 枚,退化胚4.6枚±4.5枚.将58枚可用胚移植移植给45只受体,37只受体妊娠,受体妊娠率82.2%,产羔48只,可用胚移植产羔率82.8%.     

奶牛卵母细胞化学激活与电激活比较研究

目前,体细胞核移植技术已在牛、羊、小鼠、猪等动物上获得成功, 然而该技术还存在许多问题,如核移植成功率普遍比较低、重构胚的发育率低、畸形胚的比率高等.影响这些问题的因素很多,其中就包括受体卵母细胞的体外培养成熟率和成熟质量[1]以及激活率[2]低下,本研究的目的就是探索出一套有效的牛卵母细胞体外成熟和激活的方法,为进一步的胚胎工程技术研究提供实验基础.     

猕猴核移植研究进展及前景

本文回顾了弥猴核移植相关简史，介绍了猕猴核移植的技术路线，对限制猕猴体细胞核移植研究的因素：核供体的筛选、卵母细胞的获得、超数排卵的影响因素、重构胚的激活及体外培养体系等进行了综述，并展望猕猴核移植的应用前景。     

猕猴核移植研究进展及前景(待续)

本文回顾了猕猴核移植相关简史,介绍了猕猴核移植的技术路线,对限制猕猴体细胞核移植研究的因素:核供体的筛选、卵母细胞的获得、超数排卵的影响因素、重构胚的激活及体外培养体系等进行了综述,并展望猕猴核移植的应用前景.     

波尔山羊胚胎移植初报

选择健康、繁殖和营养状况良好的波尔山羊母羊供体和同等条件的本地白山羊受体 ,通过同期发情、超数排卵、胚胎移植等技术处理 ,超排处理波尔山羊 2 3只供体 ,共获可用胚 40 6枚 ,平均每只获可用胚胎 17.7枚 ;移植受体白山羊 2 45只 ,平均双胚率达6 5 .7%。     

兔核移植胚胎的克隆研究

本研究改进了兔受体卵母细胞的去核程序及供体卵裂球的处理方法，并对核移植胚的体外克隆、继代克隆及克隆胚的体内发育进行了试验。结果表明：卵龄对受体卵母细胞的去核具有显著的影响，卵龄为１５～１８ｈ的去核率为１００％（４５／４５），显著高于１３～１４ｈ的４６．６％（７／１５），Ｐ＜０．０１。ＤＮＡ合成抑制剂Ａｐｈｉｄｉｃｏｌｉｎ处理１６－细胞期卵裂球后，重组胚的囊胚发育率５４％（２０／３７）高于未处理组的４５％（１４／３１），Ｐ＜０．０５。从２枚１６－细胞供体胚分别获得来自一个供体胚的９枚和７枚核移植克隆囊胚，囊胚发育率为５１．６（１６／３１）。然而第一次继代核移植胚的囊胚发育率仅为１１．５％（６／５２）。１６－及３２－细胞期卵裂球的重组胚可发育至产仔，共获２窝８只仔兔。其中１只、２只、２只和３只仔兔分别来自４个供体胚。     

季节对杜泊羊体内胚胎生产与移植效果的影响

为了研究季节对杜泊羊体内胚胎生产效率及胚胎移植妊娠率的影响,于2016年选取内蒙古赛诺草原羊业有限公司种羊场经产纯种杜泊母羊作为供体,采用同期发情、超数排卵及腹腔镜人工输精等方法对供体羊进行处理后,利用手术冲胚的方法获得纯种杜泊羊胚胎,同时对受体羊进行同期发情处理和胚胎移植。经统计分析,2016年全年该公司共有放栓供体4 241只,超排处理4 180只,配种供体4 131只,冲胚供体3 987只,供体可用率为94.01%;冲出胚胎总数为23 516枚,可用胚胎18 002枚,胚胎可利用率为76.55%,平均每只供体能获得可用胚胎4.52枚。供体在10月、11月、12月冲胚所获得的平均冲胚数和平均可用胚数明显高于4月、5月、6月(P<0.05),其中10月的平均冲胚数和平均可用胚数最高(P<0.01),分别为7.04枚和5.62枚。将获得的部分胚胎用于胚胎移植,移植单胚怀孕受体数为4 446只,妊娠率为53.67%;移植双胚怀孕受体数805只,妊娠率65.02%。此外,受体在1月、3月、6月、12月受胎率较其他月份高(P<0.05)。该研究可为杜泊种羊超数排卵、胚胎移植和肉羊的产业化生产提供一定的数据参考。     

小鼠-猪种间体细胞克隆试验

用3代~5代小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)作核供体细胞,体外成熟培养44 h~46 h、排出第1极体(PbI)的猪卵母细胞去核后,进行小鼠-猪种间核移植操作。Hoechst 33342染色检查去核效果,去核率为84.2%(27/32)。共培养68枚小鼠-猪种间核移植重构胚,其中48枚发生卵裂,卵裂率为70.6%,13枚胚胎发育至8-细胞,发育率达27.1%(13/48)。     

不同电融合条件对莎能奶山羊转基因(GFP)核移植胚胎发育的影响

以莎能奶山羊（Saanen dairy goat）转基因（GFP）成纤维细胞为核供体细胞，以普通山羊卵母细胞为受体细胞进行了核移植，试验中对转基因核移植胚胎的电融合条件进行了优化，发现对于莎能奶山羊转基因（GFP）重构胚胎的处理，电融合时方案B（1．5kV／cm、3μs／次、间隔1s）电融合参数最适合用于莎能奶羊的转基因（GFP）核移植胚胎，其重构卵电融合率为89．4％，重构胚分裂率为68．0%。     

布尔山羊胚胎移植及B超监测

本实验采用FSH、LH、PMSG、氟孕酮阴道海绵栓等激素，进行超数排卵和同期发情处理；并用加拿大AMI-900型兽用B超进行全程监测。本次共处理供体波尔山羊7只，有超排反应6只，超排反应率85．71％，获卵总数94枚，只均获卵15．67枚，可用胚70枚，胚胎可用率74．47％，只均可用胚11．67枚。用阴道海绵栓处理受体羊83只，48h内同期发情率75．90％。手术法子宫角鲜胚移植受体羊39只，三周后B超检查23只怀孕，移植成功率58．97％。     

幼龄杜泊羊胚胎体外生产技术的研究

为探讨幼龄杜泊羊胚胎体外生产技术(JIVET),给幼龄杜泊羊卵巢卵泡的利用提供技术支撑,试验采用促卵泡素(FSH)和孕马血清(PMSG)对4~8周龄杜泊羊进行诱导、活体采集卵母细胞、卵母细胞体外成熟-受精-受精卵培养及2~4细胞期受精卵移植研究。结果表明:从8只4~8周龄杜泊羊中采集到可用卵母细胞585枚,平均73.13枚/只;获得2~4细胞期受精卵346枚,卵裂率59.15%;将77枚2~4细胞期体外受精卵移植于17只受体母羊的输卵管壶腹部,7只母羊受孕,产羔13只,受胎率41.18%。说明采用4~8周龄杜泊羊胚胎体外生产技术可作为JIVET的有效技术。     

水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育的研究

本研究比较了不同来源的水牛卵母细胞的体外受精及其胚胎发育。对10头摩拉母水牛连续6周进行活体采卵,共采集292枚卵母细胞,头均回收卵母细胞4.87枚,头均A级卵数为3.07枚,从屠宰场收集74头水牛卵巢共采集559枚卵母细胞,头均回收卵母细胞和A级卵母细胞分别为7.55枚和5.20枚,均显著高于活体采集的水牛卵母细胞(P<0.01)。将收集的AB级水牛卵母细胞在相同的条件下进行体外成熟、体外受精和体外培养至囊胚。结果表明,活体采卵组和屠宰水牛卵母细胞组受精分裂率差异不显著,分别为54.81%和57.73%。屠宰水牛卵母细胞组的囊胚率则高于活体采卵组(28.78%vs21.34%,P<0.05)。利用两组的胚胎进行常规法冷冻保存,冻胚解冻后的存活率差异不显著(P>0.05)。     

青海高原地区应用绵羊胚胎移植技术的效果分析

采用同期发情+超排对12只特克塞尔羊、无角陶赛特羊进行处理;同时采用自然发情+超排对12只德国肉用美利奴母羊进行处理。结果表明:采用同期发情+超排处理,每只特克塞尔母羊平均获卵胚8.7枚,获受精卵数7.1枚;陶赛特母羊平均获卵胚数1.8枚,获受精卵数1.8枚(P<0.01)。德国肉用美利奴供体母羊的平均获胚数13.5枚,可用胚8.7枚,可用胚率67.0%(P<0.01)。对85只受体绵羊进行同期发情处理,结果表明,处理后同期发情率达88.2%。将12枚可用胚胎移入11只受体,其中10只受体移入单胚,1只受体移入双胚,移植成功率达83.3%(P<0.01)。对62只自然发情的受体母羊进行胚胎移植,结果表明,移植2枚胚胎受体母羊的受胎率比移植1枚的要高34.0%(P<0.01)。