桑蚕转基因技术研究进展

人工授精、细胞融合、核移植、注射外源核酸及重组ＤＮＡ技术，均有可能将外源基因导入桑蚕，其中ＤＮＡ重组导入法可以有针对性地导入目的基因。利用ＹＡＣ载体及天蚕丝腺染色质作介导，已将天蚕丝蛋白基因导入桑蚕并获得表达。桑蚕转基因的最佳受体是产后３－８小时的发生初期卵，利用微量注射法及基因枪喷射法均可将外源基因导入卵内，但导入卵内的外源基因一般只在短时间内表达，大部分在３天后分解消失。今后应重点在基因转移载     

中国春Ph1基因的RAPD标记鉴定

用２６０个１０ｂｐ随机引物对中国春（ＣＳ）、ｐｈ１ｂ突变体及其Ｆ２分离群体基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,筛选出两个特异的ＲＡＰＤ标记ＯＰＲ７９３６和ＯＰＲ１７５２４。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析,并结合减数分裂Ｍ１染色体配对分析,认为这两个ＲＡＰＤ标记位于５ＢＬ染色体ｐｈ１ｂ基因缺失区中,可以作为ｐｈ１ｂ基因的分子标记。     

苏云金芽胞杆菌转座子整合载体的构建

利用苏云金芽胞杆菌转座子Ｔｎ４４３０的转座机制构建了可用于将外源基因整合到染色体的整合载体系列。将Ｔｎ４４３０的解离酶基因（ｔｎｐＩ）和转座酶基因（ｔｎｐＡ）移至两个倒转重复的反向重复序列之外,并用多克隆位点取代;将这种转移结构置入不稳定的穿梭载体ｐＢＭＢ６２２Ｎ中,获得ｐＢＭＢ－Ｆ７和ｐＢＭＢ－Ｒ１４。当红霉素抗性基因插入其中的多克隆位点后,在ＢＭＢ１７１ ｔｎｐＡ基因会随着质粒的消除而消失。     

水稻农垦58与农垦58s的RAPD和ISSR分析

以光敏核不育水稻农垦５８ｓ及其原始株农垦５８核ＤＮＡ为模板,进行了ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ多态性分析,结果表明：在可扩增的１５４个ＲＡＰＤ引物和７８个ＩＳＳＲ引物中,８个ＲＡＰＤ引物和７个ＩＳＳＲ引物的扩增产物表现出ＤＮＡ多态性,ＲＡＰＤ－ＰＣＲ产物的多态性标记分别出现在农垦５８ｓ,农垦５８或二者同时出现,而ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物的多态性标记只出现在农垦５８或农垦５８ｓ中。获得多态性ＲＡＰＤ标记及ＩＳ     

枣RAPD技术体系建立与几个品种亲缘关系的研究

本研究建立了适合枣种质ＲＡＰＤ分析的技术体系,进而用于几个枣品种的亲缘演化绵探讨。结果表明：模板ＤＮＡ纯度,Ｔａｑ酶、Ｍｇ＾２,ｄＮＴＰ、随 物浓度在ＲＡＰＤ分析中有重要作用,而模板ＤＮＡ浓度有一个很大的适合范围,ＲＮＡ的存在对扩增结果无影响。     

肉鸡IFN-alpha基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达

干扰素（ＩＦＮ）是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等活性的细胞因子。本研究通过ＰＣＲ从ＡＡ肉鸡基因组ＤＮＡ中克隆了ＩＦＮ－α（ＣｈＩＦＮ－α）基因,测序分析,并将该基因与表达载体ｐＱＥ３０相连,构建重组表达质粒ｐＱＥ３０／ＣｈＩＦＮ－α,以ＩＰＴＧ诱导在Ｍ１５中进行表达。测序结果表明ＣｈＩＦＮ－α的开放阅读框（ＯＲＦ）是由４８６个核苷酸编码的,成熟蛋白为１６２个氨基酸,有４个糖基化位点,推测     

核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

利用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物连接进线状克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ后获阳性重组质粒。用ＥｃｏＲＩ及ＳｍａＩ双酶切阳性重组质粒ＤＮＡ,回收４６３ｂｐ的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对４头鼻内人工感染ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的     

慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的脯氨酸脱氢酶基因(putA)的分子克隆

根据已报道的脯氨酸脱氢酶基因（ｐｕｔＡ）序列,通过ＰＣＲ方法,从慢生型大豆根瘤菌菌株ＧＸ２０１的总ＤＮＡ中扩增到—ＰＣＲ产物。序列分析表明,该ＰＣＲ产物的长度为４１８ｂｐ,与已报道的ｐｕｔＡ基因具有９３．５％的同源性。以广谱寄主范围质粒ｐＬＡＦＲ３为载体,在大肠杆菌ＤＨ５α中构建了ＧＸ２０１的基因文库,并以该ＰＣＲ产物为探针,从基因文库中筛选到一重组质粒ｐＧＸＮ３００。     

甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的序列分析

用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ     

小麦M染色体组的RELP标记

利用２９个小麦ＲＦＬＰ探针与６种限制性酶切的Ｍ染色体组ＤＮＡ进行分子杂交，获得了５５个Ｍ染色体组的ＲＦＬＰ标记，其中１５个与小麦ＡＢＤ染色体组相同，４０个染Ｍ染色体组的特殊标记，在顶荒山羊草和小麦－顶芒山羊草双二倍体以及小麦顶芒山羊草异代换系中稳定遗传