兽用中药制剂温毒清浸膏的解热作用研究

目的：观察温毒清浸膏的解热效果。方法：采用大肠杆菌内毒素致热模型和蛋白胨致热模型两种实验性发热模型。结果：温毒清浸膏对两种发热模型均具有缓慢而持久的抑制作用。结论：温毒清浸膏有良好的解热作用。     

温毒清浸膏抗炎作用实验研究

目的:观察温毒清浸膏对慢性增殖性炎症和急性渗出性炎症的作用。方法:采用大鼠棉球肉芽肿和小鼠醋酸腹腔注射两种方法,分别观察其对大鼠棉球肉芽肿增生的影响和对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响。结果:温毒清浸膏对大鼠棉球肉芽肿增生和醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增强均具有明显的抑制作用,与空白对照相比差异显著。结论:温毒清浸膏具有良好的抗炎作用。     

清瘟败毒浸膏对NDV人工感染鸡的疗效试验

选用不同浓度清瘟败毒浸膏（饮水中添加0.5、1.0和1.5g/只）对鸡新城疫病毒（NDV）攻毒鸡只进行治疗,观察试验鸡的发病率、痊愈率、死亡率和体内抗体效价测定。结果发现清瘟败毒浸膏各组的发病率、死亡率、痊愈率和抗体效价均极显著差异于阳性对照组（P〈0.01）,其中中、高剂量组优于低剂量组金刚烷胺对照组。结果表明清瘟败毒浸膏对鸡新城疫有明显的治疗作用,且以1.0g/只清瘟败毒浸膏给药效果最佳。     

HPLC法测定温毒清浸膏中栀子苷的含量

采用HPLC方法测定温毒清浸膏中栀子苷的含量。流动相:乙腈-水(15∶85);流速:1 mL/min;检测波长:238 nm;色谱柱:Diamonsi L C18(5μm,200 mm×4.6 mm);柱温:25℃;理论塔板数不低于1 500。结果显示,栀子苷进样量在0.060-0.600μg范围内有良好的线性关系,平均回收率99.32%,RSD为1.26%。表明该方法准确可靠,重现性好,可作为温毒清浸膏的质量控制方法。     

正交试验法优选温毒清浸膏的提取工艺

温毒清浸膏以2005年版《中国兽药典》收载“清瘟败毒散”为基础，进行加减化裁而得，其主要由金银花、黄芩、连翘、黄连、石膏等药组成，具有清热解毒、泻火除烦、凉血止痢、扶正祛邪之功效；用于治疗畜禽因各种病毒和细菌感染的混合型温热病。为了使该方更好的发挥药物疗效。最大限度的保留有效成分，现对其提取工艺进行研究，为该制剂最佳制备工艺的确立提供实验依据。     

伪狂犬病活疫苗免疫猪血清抗体消长规律的研究

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)与中和试验(SN)方法,对伪狂犬病活疫苗免疫猪血清抗体水平进行监测,并对免疫猪和补充及对照猪进行伪狂犬病野毒抗体检测。结果表明伪狂犬病活疫苗免疫健康敏感猪7 d后抗体水平开始上升,35 d后达到高峰,高水平的免疫抗体维持时间长达2个月以上,之后逐步下降,直至试验结束(365 d)PRV-Ab仍呈阳性;而非实验对照猪血清自始至终PRV-Ab均为阴性;全部猪血清伪狂犬病野毒抗体皆为阴性。说明通过长时间的同栏饲养未发现伪狂犬病野毒感染。     

新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性

为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。     

猪肺炎支原体与猪支气管败血波氏杆菌在猪体液免疫和生长性能上的协同作用

试验选用10日龄成华×大约克杂交猪36头,随机分成四组(1、2、3、4),每组9头.其中1、2组用猪肺炎支原体全菌抗原免疫后再分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒,3、4组注射生理盐水作为对照,并与前两组同时分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒.采用间接ELISA、组织切片等方法对猪血清中的抗体水平、肺脏的病理变化及生长性能进行测定.试验表明:用猪肺炎支原体全菌抗原接种猪后,在血清中能检测到较高的抗体水平(25).猪肺炎支原体攻毒后2周,免疫猪和对照猪血清中猪肺炎支原体抗体的滴度分别为23.8与22.4(P＜0.05),且免疫猪的生长性能比对照猪好.在猪支气管败血波氏杆菌攻毒组,攻毒2周和4周后免疫猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体水平与对照猪相比分别提高了26.67%和30.00%(P＞0.05),6周后免疫猪和对照猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体分别为21.7和20.3(P＜0.05),且在攻毒后4～6周,免疫猪的生长性能有了显著的改善.组织切片显示,无论是用猪肺炎支原体攻毒还是用猪支气管败血波氏杆菌攻毒,免疫猪的肺脏病变程度都较对照猪轻.     

正交试验法优选清瘟败毒浸膏的提取工艺

清瘟败毒浸膏以2005年版<中国兽药典>收载"清瘟败毒散"为基础,进行加减化裁而得,其主要由金银花、黄芩、连翘、黄连、石膏等药组成,具有清热解毒、泻火除烦、凉血止痢、扶正祛邪之功效;用于治疗畜禽因各种病毒和细菌感染的混合型温热病.为了使该方更好的发挥药物疗效,最大限度的保留有效成分,现对其提取工艺进行研究,为该制剂最佳制备工艺的确立提供试验依据.     

猪瘟免疫血清中和效检方法

应用血清与病毒中和法,可以检出猪瘟免疫猪与非免疫猪的区别。凡血清能中和猪瘟兔化毒(以下简称兔毒)的猪就有免疫能力,血清不能中和兔毒的猪就无免疫力。 1973年冬,我们对猪三联苗免疫猪要作猪瘟免疫期试验,为了摸索那些猪有良好的免疫能力,就采取免疫猪血清与乳兔干苗混     

北京小鸭病毒性肝炎的研究——(四)用对流免疫电泳技术检测母鸭卵清的抗DHV物质

本试验取同一份小鸭病毒性肝炎病毒(DHV)强毒作抗原,通过对流免疫电泳检测免疫母鸭和非免疫母鸭卵清的抗 DHV“阳性率”,发现前者的“阳性率”显著高于后者。对非免疫母鸭卵清出现“阳性反应”的问题进行了讨论。     

肿节风三清颗粒成型工艺与中试生产研究

为了优选肿节风三清颗粒的最佳成型工艺并考察中试生产的合理性,进行颗粒成型工艺和中试工艺放大研究,颗粒成型工艺试验以成型率、溶化率、吸湿率为考察指标,以浸膏粉与辅料的配比、蔗糖与糊精的配比、乙醇浓度为考察因素,采用正交试验优化成型工艺;中试生产以浸膏得率、成品率、有效成分含量为指标,考察中试工艺放大的可行性。结果显示,优选的肿节风三清颗粒最佳成型工艺为蔗糖∶糊精为3∶2、乙醇浓度为65%、浸膏粉∶辅料为1∶6;颗粒临界相对湿度为73.49%。三批肿节风三清浸膏（中间体）的浸膏得率分别为8.58%、8.58%和8.63%,三批肿节风三清颗粒（成品）的成品率分别为93.40%、92.13%和93.53%,中间体和成品中有效成分异嗪皮啶、迷迭香酸的含量均稳定可控。表明肿节风三清颗粒成型工艺合理,中试生产稳定可控,适合批量生产。     

肿节风三清颗粒成型工艺与中试生产研究

为了优选肿节风三清颗粒的最佳成型工艺并考察中试生产的合理性,进行颗粒成型工艺和中试工艺放大研究,颗粒成型工艺试验以成型率、溶化率、吸湿率为考察指标,以浸膏粉与辅料的配比、蔗糖与糊精的配比、乙醇浓度为考察因素,采用正交试验优化成型工艺;中试生产以浸膏得率、成品率、有效成分含量为指标,考察中试工艺放大的可行性。结果显示,优选的肿节风三清颗粒最佳成型工艺为蔗糖∶糊精为3∶2、乙醇浓度为65%、浸膏粉∶辅料为1∶6;颗粒临界相对湿度为73.49%。三批肿节风三清浸膏(中间体)的浸膏得率分别为8.58%、8.58%和8.63%,三批肿节风三清颗粒(成品)的成品率分别为93.40%、92.13%和93.53%,中间体和成品中有效成分异嗪皮啶、迷迭香酸的含量均稳定可控。表明肿节风三清颗粒成型工艺合理,中试生产稳定可控,适合批量生产。     

抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

禽大肠杆菌病免疫保护机理的研究

以禽病原性大肠杆菌O18、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫14日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白型（Outer membrane protein pattern,OMP型）的O18、O78分离株攻毒。结果表明：O78血清相同和不同OMP型分离株间能获得最大保护；O18血清型相同OMP型分离株间获得最大保护，而不同OMP型分离株间不能保护；上述两个血清型的分离株间不论OMP型是否相同，均缺乏保护。以间接ELISA试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌OMPs和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS）的抗体。结果表明：免疫组鸡血清上述两种抗体明显高于攻毒对照组；在免疫组，存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡，但除3个组外，多数组差异不显著。攻毒对照组这一关系不稳定。结果说明：禽大肠杆菌疫苗的免疫保护，主要与O血清型有关，部分与OMP型有关，如O18分离株，免疫保护性抗原含OMPs,LPS等多个抗原表位。     

牛传染性鼻气管炎弱毒疫苗免疫抗体水平与保护效力的关系

利用微量血清中和试验和攻毒试验、牛传染性鼻气管炎弱毒活疫苗检测免疫后牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒的抗体效价及其与保护效力的平衡关系。40头牛其中弱毒活疫苗免疫牛30头,对照牛（抗体阴性牛）10头,采用不同剂量免疫（10^3.5～10^6.5TCID50／mL）,按抗体效价高低将实验动物分,并用IBRV LN01／08强毒株攻击,将攻毒保护结果与攻毒时抗体效价结果平行比较分析,结果显示,当IBRV抗体效价高于1：6时,疫苗免疫可以对牛产生良好的保护效力,保护率在80％以上,低于1：6但高于1：3时,免疫苗抗体阳性牛攻毒后保护率近78％。试验结果显示牛传染性鼻气管炎活疫苗的抗体水平于保护效力之间存在一定的平行关系。     

新城疫病毒HN标记疫苗的构建及免疫效力

将新城疫病毒AI4株的HN蛋白胞外区替换成禽副黏病毒2型T4株HN相应部分,构建获得了一株重组病毒r AI4-T4HNECD,该病毒具有较高繁殖性能,且毒力弱。将该病毒制成灭活疫苗免疫2周龄SPF鸡后,定期采血用于血凝抑制试验(HI),免疫后3周以基因Ⅶd亚型NDV强毒株JS-5-05攻毒,攻毒后定期采血用于HI检测。结果显示:免疫后,该疫苗可有效诱导抗体的产生,并能提供较强的免疫保护。血清学测定数据显示:攻毒前,免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价低于2 log_2,但感染后第5、7天免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价可分别达4.3 log_2和9.4 log_2,而免疫未攻毒组对AI4株的HI效价仍低于2 log_2,根据血清对AI4株HI效价的变化可区分免疫动物和感染动物。因此,重组病毒rAI4-T4HNECD可用于新城疫标记疫苗的开发。     

3株鸡大肠埃希菌地方分离株Ⅰ型菌毛的免疫原性

选择宁夏地区的大肠埃希菌3个优势血清型O15、O78、O18菌株,大规模培养后提取Ⅰ型菌毛,制备天然菌毛亚单位疫苗,免疫接种7日龄雏鸡后通过攻毒试验和抗体水平测定评价疫苗的免疫效果.结果表明,未免疫鸡的死亡率为40％～100％,而免疫鸡用同源菌株攻毒后死亡率为0～10％,用异源菌株攻毒后死亡率为20％～70％,免疫组鸡肝脏、心包和气囊的病变程度均显著轻于未免疫鸡,免疫鸡血清内出现高滴度的ELISA抗体.     

DOT—ELISA检测猪瘟免疫抗体的研究

本文成功地建立了Dot—ELISA(斑点酶联免疫吸附试验)检测猪瘟免疫抗体,经猪丹毒、猪巴氏杆菌高免血清对照及猪瘟强毒攻毒试验证实;Dot—ELISA检测猪瘟免疫抗体是特异的。Dot—ELISA、ELISA和兔体中和三种方法比较,Dot—ELISA法具有简便、快速、敏感性高,特异性强。用Dot—ELISA法检测115头免疫猪血清抗体,免疫抗体在效价1:2—1:128之间,1:32—1:64以上滴度占95％。猪瘟攻毒试验结果:免疫猪的猪瘟免疫抗体保持在1:32以上,均能抗过猪瘟强毒的攻击。     

评价牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力BALB/c鼠模型的建立

为建立评价流产布鲁氏菌疫苗株免疫保护力的小鼠模型,选取6周龄雌性BALB/c小鼠为试验动物,随机分为3组(n=40):A19免疫攻毒组、非免疫攻毒组和PBS对照组。A19免疫组腹腔接种BALB/c鼠A19 5.0×10⁴ CFU,非免疫攻毒组和PBS对照组均接种PBS液0.2 mL。免疫后45 d,A19免疫攻毒组和非免疫攻毒组BALB/c鼠以3.0×10⁴ CFU剂量的2308强毒株攻击,攻毒后15和45 d分别剖杀小鼠,取小鼠脾脏称重、细菌分离、病理组织学检测。结果表明,攻毒后15 d,A19免疫攻毒组与未免疫攻毒组和PBS对照组之间克脾指数差异显著(P<0.05);攻毒后45 d,A19免疫攻毒组与PBS对照组的克脾指数差异不显著(P>0.05),与未免疫攻毒组克脾指数差异显著(P<0.05);免疫攻毒组的小鼠组织病理变化明显轻于未免疫攻毒组。结果表明,用BALB/c鼠为试验动物,以A19为疫苗参考株建立动物实验模型可以应用于牛型布鲁氏菌疫苗免疫保护力评价。