非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)对FecB基因分型方法的研究

为了建立一种基于非探针法高分辨率熔解曲线(HRM)技术对绵羊FecB基因高效分型的方法,试验选用健康、成年绵羊48只,利用HRM和限制性片段长度多态性(PCR-RLFP)对绵羊多胎主效基因FecB基因进行分型效果研究。结果表明:FecB基因具有3种基因型,分别是野生型(AA)37.50%、杂合型(GA)33.33%、纯合突变型(GG)29.17%;通过对基因测序比对、HRM和PCRRLFP结果的准确率比较,HRM的准确率达到了95.83%(46/48),高于RLFP的分型结果,所需试验时间大大缩短。说明非探针法HRM技术是一种高效率、节省人工的FecB基因分型方法。     

绵羊FecB基因研究进展

Booroola merino羊的多胎性能开辟了影响动物繁殖性状主基因研究的新篇章,可为提高羊的繁殖性能从分子水平提供理论指导.作者综述了绵羊FecB基因的最新研究进展.     

绵羊多胎性FecB基因研究新进展

FecB基因是在绵羊上发现的第-个多胎性基因.近年来,关于FecB基因的遗传及生理效应、基因图谱的绘制以及对绵羊卵泡发育和排卵率调控机制的研究取得了很大进展.本文简述了绵羊多胎性FecB基因研究的最新进展情况.     

绵羊FecB基因分离克隆的研究进展

Fec B基因是一个影响绵羊排卵率的基因。本文就该基因的提出、基因型判定、生理效应以及分离克隆等方面作一综述。     

绵羊FecB基因分离克隆的研究进展

FecB基因是一个影响绵羊排卵率的基因，本文就该基因的提出，基因型判定，生理效应以及分离克隆等方面作一综述。     

不同绵羊群体多羔主效基因FecB的检测

为分析FecB基因在不同绵羊群体中的分布情况以及对产羔数的影响,利用TaqMan探针分型技术检测了27 774只不同绵羊群体的FecB基因,结合12 304只个体的前3胎产羔数据,探索多羔主效基因FecB在提高绵羊繁殖力方面的重要作用。分型结果显示,湖羊群体含有最高的B等位基因频率,达0.90以上,且随着群体中湖羊血统含量的增加B等位基因频率也增加。湖羊、皮山红羊、杜湖杂交羊、杜湖（♂）×湖羊（♀）杂交羊以及利用湖羊培育的鲁中肉羊FecB基因的不同基因型产羔数间均存在极显著差异（P <0.01）。这不仅展示了FecB基因对于绵羊产羔数的重要影响,也显示出通过引入本土绵羊FecB基因改良肉用品种繁殖力的可行性和潜力。     

与绵羊多胎性状有关的FecB和FecX基因研究进展

FecB和FecX基因是在研究绵羊多胎性状中发现的2个关键基因,对其深入研究将会对绵羊以及家畜遗传育种发挥积极的推动作用.从FecB和FecX基因的生理效应、基因定位等方面进行综述,以期为相关研究提供参考.     

绵羊FecB基因打靶载体构建

利用peGFP-C1,pRET.IL.PGK-TK和pMD19-T Simple等基本质粒,构建绵羊FecB基因打靶载体。以克隆载体pMD19-T Simple为载体骨架,插入一个正选择标记eGFP基因、一个负选择标记基因HSV-tk基因,并在eGFP基因两侧各添加一个同源长臂和同源短臂,从而构建绵羊FecB基因打靶载体。结果:经多个限制性内切核酸酶酶切鉴定和测序证实,所构建的基因打靶载体符合设计要求,表明成功构建了绵羊FecB基因打靶载体。     

应用Cas9 RNPs进行绵羊FecB基因型检测的可行性研究

为了研究Cas9 RNPs用于绵羊FecB基因分型的可行性,试验以FecB基因BB、B+、++型的绵羊个体为试验动物提取基因组DNA。基于Cas9 RNPs的体外DNA定点内切酶活性,用FecB基因靶位点的特异性引物扩增产物作为底物,利用大肠杆菌共表达纯化获得Cas9 RNPs,对不同FecB基因型目标样本进行酶切检测。结果表明：SDS-PAGE电泳结果显示,在130～180 kD之间有一条与预期大小相符的特异蛋白条带;3种基因型的靶DNA均被切割为185 bp和368 bp两个片段;绵羊FecB++型成纤维细胞Cas9 RNPs电转染的突变检测结果显示,纯化的两个Cas9 RNPs都具有基因组编辑活性。说明本研究获得的Cas9 RNPs在体外和细胞内都具有良好的酶活性,但未能区分绵羊FecB基因型。     

FecB基因对绵羊生产性能影响的研究进展

FecB基因是发现最早的具有促进排卵的多胎基因,自从在澳大利亚布鲁拉美利奴羊(Booroola Merino)上发现该基因以来,人们利用Booroola Merino开展了大量杂交试验,并在各国绵羊品种中相继开展了寻找FecB基因的工作,在基因多态性与母羊繁殖性状关联分析方面做了大量研究。文章从FecB基因的品种分布及对繁殖性能(排卵数、产羔数、繁殖规律)、肉用性能(生长发育、肉品质)和产毛、产奶等生产性能方面的影响进行了系统总结,并对该基因的利用提出了建议和展望。     

FecB基因作为小尾寒羊多胎候选基因的研究

试验采用已知繁殖性能的33只小尾寒羊母羊(山东梁山和泰安)、14只蒙古羊母羊(甘肃武威)的血样,提取DNA.用FecB基因作为小尾寒羊多胎候选基因进行研究,利用Australian Sheep Gene Mapping Web SiteAF298885引物(BMPR-IB基因,forced-PCR引物,即FecB基因引物)进行PCR扩增,对其PCR产物用AvaⅡ酶切进行酶切鉴定基因型.研究结果表明①小尾寒羊基因型由3种基因型-BB、B+、++组成,其基因型频率分别为0.303 0、0.606 1、0.090 9,突变杂合B+和突变纯合BB为优势基因型、野生型++很低;蒙古羊分别为0、0.071 4、0.928 6;只由两种基因型-++、B+组成,不存在BB型,而且B+频率也很低,未突变野生型-++型为优势基因型.小尾寒羊与蒙古羊在基因型组成上差异均极显著(P＜0.01),这两个品种的多胎表型一致.②小尾寒羊B和+基因频率分别为0.606 1和0.393 9,突变基因B(FecB)为主导基因,蒙古羊分别为0.035 7、0.964 2,蒙古羊以未突变+为主导基因.因此,证明FecB基因是小尾寒羊多胎重要的分子标记,但FecB基因是否是小尾寒羊多胎基因需进一步深入系统研究.③小尾寒羊品种内BB和B+基因型均为多胎表型,通过对小尾寒羊3种基因型第1、2胎次平均产羔数统计发现BB型>B+型>++型,但在研究中发现具有多胎表型而基因型是野生型++的3只小尾寒羊,因此有待进一步研究.     

FecB基因在绵羊繁殖性能上的研究进展

绵羊的繁殖性能是一种十分重要的经济性状,绵羊产羔数与每次的排卵数直接相关,绵羊卵子的生长发育受到卵巢内分泌及旁分泌的相互作用。FecB基因是羊上首个被发现的多胎主效基因,携带该基因的绵羊卵巢中BMP信号通路受到损害而活性降低,TGF-β家族部分成员失活,抑制GCs增殖并提高FSH的敏感性,有效提高绵羊的排卵率和产羔率,有利于扩大养殖规模,提高经济效益。本文对FecB基因的发现、作用机制及其对卵泡发育、繁殖能力和后代生长发育的影响,以及育种方面的应用进行综述,以期为绵羊繁殖性能提升的机理研究和育种工作等提供参考和借鉴。     

Booroola羊多胎基因FecB的研究进展

FecB基因位于Booroola羊的常染色体上 ,具有提高排卵率和产羔数等生物学作用。FecB基因已被定位在绵羊 6号染色体 6q2 3～q 3 1的狭窄区域内 ,并且已从分子水平上找到了控制Booroola绵羊排卵数的主效基因。关联分析表明 ,BM PR IB基因的突变与FecB基因的行为完全一致 ,证明BMPR IB基因是控制BooroolaMerino羊高繁特性的主效基因。文章阐述了近年来对FecB基因的研究进展。     

四川的绵羊品种/群体导入FecB的可行性探讨

四川的绵羊品种/群体的繁殖力都比较低,一胎只产1只羔羊,极少产2只,本文详细介绍了 FecB基因与绵羊繁殖力的关系、四川的主要绵羊品种/群体和国内携带FecB基因的绵羊品种/群体,针对四川的绵羊品种/群体,探讨了导入FecB的措施与方法,导入后羊群的饲养管理等,以期通过导入FecB基因来提高四川的绵羊品种/群体的繁殖力...     

Booroola羊FecB基因的遗传标记研究进展

从美利奴绵羊中衍生出来的Booroola羊携带增加排卵数和产羔数的一个常染色体突变基因(FecB).基因效应对排卵数是加性的,对产羔数是部分显性的.该位点已被定位到绵羊6号染色体上微卫星标记OarAE101和BM1329之间一个10cM区间内.正在开展限定紧密的侧翼标记的研究工作.     

用于羊草基因分型的SNP分子标记技术研究

以我国广泛分布的多年生优势禾本科牧草羊草为研究材料,针对羊草目前尚无SNP标记技术的报道,基于实验室已有的转录组数据,挖掘其中的SNP分子标记,建立一种利用高分辨率熔解曲线(high-resolution melting, HRM)进行羊草SNP基因分型的方法。结果表明,从羊草转录组数据中获得41843个SNPs,转换的数量是颠换数量的2倍;建立了基于SNP的HRM基因分型方法,设计了112对SNP引物,其中有98对(87.5%)能扩增出明亮单一条带,扩增条带大小符合预期的有72对(64.29%),适宜进行HRM基因分型的引物有46对,占41.07%;用其中的7对引物可将羊草48份种质区分开,并绘制出指纹图谱。通过对部分HRM基因分型结果进行测序验证,表明测序分析的基因型结果与HRM基因分型结果一致,证明HRM基因分型结果是可靠的。本研究首次建立的基于SNP的HRM基因分型方法,可用于羊草种质资源的指纹图谱绘制、育种亲本的选配、基因关联分析、分子标记辅助育种、功能分子标记开发、新品种的保护等育种工作。     

黄淮杜泊羊繁殖性能和FecB基因多态性研究

为系统评价黄淮杜泊羊的繁殖性能,本实验对2家黄淮杜泊羊核心育种场1年的繁殖数据进行了统计和分析,并随机采集了145只核心群羊只进行FecB基因多态性分析。结果表明:黄淮杜泊羊性成熟为6～7月龄,年繁殖率为252.82%,羔羊断奶成活率为95.79%,每只母羊年提供断奶羔羊数2.39个;黄淮杜泊羊群体FecB基因存在BB、B+和++3种基因型,其中B+型(杂合型)是群体中的优势基因型,基因型频率为0.606 9;基因型与产羔数关联分析表明,BB和B+基因型产羔数极显著高于++基因型。综上,黄淮杜泊羊具有多胎高繁的特性,在繁殖性能方面符合专门化肉用高繁绵羊品种的标准。     

利用FecB多胎基因导入培育哈萨克羊多羔类型的研究

以小尾寒羊和湖羊及寒哈F1羊、湖哈F1羊、横交F2羊共计296只,用FecB基因为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测湖(寒)哈杂交F1及横交F2羊群中存在3种基因型:BB型、B+型、++型。杂交F1代166只含等位基因B频率为0.58,含等位基因+频率为0.42;横交F2代检测64只含等位基因B频率为0.41,含等位基因+频率为0.59。对FecB基因在4个不同类型绵羊中分布差异的卡方独立性检验,结果表明:小尾寒羊、湖羊与湖(寒)哈杂交F1及横交F2两个类型绵羊相互之间分布差异极显著(P0.01),湖羊与小尾寒羊之间分布差异不显著(P0.05)。湖(寒)哈杂交及横交F2羊基因型频率差异不显著(P0.05)。说明含FecB基因羊与哈萨克母羊杂交后,FecB基因显性效果好,遗传性能较为稳定。对F1羊跟踪调查,41只母羊产羔率为159%(64/41),繁殖成活率为146%(60/41),其中BB基因型1只产羔2只,产羔率为200%;B+基因型29只产羔50只,产羔率为172%;++基因型11只产羔12只,产羔率为109%;B+基因型与野生型(++)相比较提高了63个百分点,差异极显著(P0.01)。进一步说明FecB基因是高繁殖率主效基因,可有效提高F1羊产羔数。     

绵羊主效基因FecB的检测与肉用多羔核心群的建立

基于前期本实验室建立的绵羊多羔性状主效基因FecB高通量检测技术(TaqMan探针法),对10个绵羊群体的16 460只绵羊进行了多羔性状主效基因FecB的检测,结果发现小尾寒羊、湖羊以及滩羊的B等位基因频率与前人实验结果一致,有些群体经过长期选择已处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05);本课题组与多个企业经过长期努力已建立了多个肉用多羔绵羊核心群,通过比较发现BB型绵羊产羔数极显著高于B+型,B+型极显著高于++型,且高繁殖力核心群3种FecB基因型小尾寒羊产羔数高于普通小尾寒羊群体。绵羊多羔性状主效基因FecB的检测和肉用多羔绵羊核心群的建立为绵羊群体改良提供了支撑。     

利用FecB基因选育鲁西肉羊多胎品系研究

在杜泊公羊与小尾寒羊杂交后横交固定阶段,选4只理想型公羊(F2、3)分别与60只携带多胎基因(FecB)杂合型(B+)和70只野生型(++)经产母羊(F2、3)配种.分析测定了两组母羊产羔率、后代羔羊出生重、断奶重以及两个发育阶段体高、体长、胸围、管围4项体尺指标.结果两组母羊产羔率分别为208.3%和121.4%,差异极显著(P﹤0.01);野生型(++)和杂合型(B+)母羊所产羔羊出生重分别为3.53 kg和4.74 kg,后者比前者提高1.21 kg(34.27%),差异极显著(P﹤0.01).前者羔羊出生时的体高、体长、胸围、管围4项指标均高于后者,差异显著(P﹤0.05);两种类型母羊所产羔羊3月龄断奶体重分别为33.37 kg 和30.69 kg,差异不显著,日增重及其他体尺指标差异也未达显著水平.说明FecB基因可能是控制鲁西肉羊多羔性状的主效基因,该结果为培育鲁西肉羊多胎品系奠定了理论基础.