卷须链霉菌木聚糖酶B的纯化

为了进一步研究链霉菌木聚糖酶的酶学性质，探讨了卷须链霉菌一种木聚糖酶的纯化方法。粗酶液经硫酸铵饱和度为20％～50％的分级沉淀和Q-sephrose FF离子交换柱层析2步纯化，得到一种电泳纯的木聚糖酶。定名为XynB；酶蛋白纯化倍数达到10．0倍，酶活力回收率达到24．0％。SDS-PAGE结果表明，该木聚糖酶的分子质量为22．0ku，属于低分子质量的木聚糖酶。     

树莓超氧化物歧化酶的分离纯化和部分性质研究

树莓SOD粗酶液经硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100柱层析,同时对比DEAE-52柱层析和金属螯合亲和柱层析,并对其部分性质做了研究。从树莓中纯化得到3种Mn-SOD同工酶:SODⅠ、SODⅡ、SODⅢ。结果表明经金属螯合亲和柱层析的回收率和纯化倍数远高于DEAE-52柱层析。3种SOD对KCN和H2O2均不敏感,最大紫外吸收峰均为280 nm,SODⅠ和SODⅡ受温度影响较小,SODⅢ受温度影响稍大,pH值在7~9范围内3种SOD的相对酶活力较高。     

猪肺血管紧张素转化酶的提取与纯化

[目的]研究猪肺血管紧张素转化酶（ACE）的提纯方法,为其生产利用提供技术支撑.[方法]以新鲜猪肺组织为试验材料,匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀透析,然后采用离子交换-超滤离心联合法对猪肺ACE粗提物进行纯化,测定ACE的分子量、酶活力、纯化倍数及酶活力回收率.[结果]通过离子交换-超滤离心联合法分离纯化猪肺ACE,可得到相对分子量182 kDa、酶比活力1.2476 U/mg的电泳级纯品ACE,其纯化倍数达357.31倍,酶活力回收率达12.28％.ACE催化反应动力学米氏常数（Km）为0.849 mmol/L,最大反应速率（Vmax）为9.775 nmol/min.[结论]采用离子交换-超滤离心联合法纯化猪肺ACE能够极大缩短分离与纯化时间,且获得较高的纯化倍数和酶活力回收率,是猪肺ACE的高效纯化方法.     

稻田Dactylosporangium aurantiacum菌种脲酶的纯化与性质研究

经磷缓液提取，乙醇沉淀，超滤去杂，然后经CM-纤维素柱层析，DEAE-SephadexA-50柱层析纯化了Dactylosporangium aurantiacum菌脲酶，纯化倍数达50.01，活力回收率为17.81%，经SDS-PAGE垂直平板电泳测得其分子量为42000。经氨基酸组成分析，该酶含271个氨基酸残基，该酶的紫外吸收峰为275nm。     

枯草芽孢杆菌S6抗棉花枯萎病菌拮抗蛋白的分离纯化与抑菌活性研究

为了探寻枯草芽孢杆菌S6菌中对棉花枯萎病菌有拮抗作用的蛋白,将S6菌进行液体发酵培养,初步提取得到了粗蛋白提取液。粗提液经硫酸铵沉淀、Sephadex G-50脱盐、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE-52纤维素离子交换层析,得到了对棉花枯萎病菌有高效拮抗作用的蛋白质,纯化倍数达17。形成分离纯化S6菌株的棉花枯萎病菌拮抗蛋白的可靠技术路线,为研究和生产防治棉花枯萎病菌的生物制剂提供了理论基础。     

纯化黑加仑种子中超氧化物歧化酶(SOD)的研究

采用有机溶剂分级沉淀法、纤维素离子交换层析法及葡聚糖凝胶过滤法从黑加仑种子中提取SOD。实验证明 :粗酶液经上述方法纯化后SOD酶活性达692.95U,蛋白含量为0.72mg,比活达964540U·g-1,纯化倍数达253.16 ,回收率为31.41%。黑加仑种子中的SOD是Cu.Zn-SOD     

稻田Dactylosporangium aurantiacum菌中脲酶的纯化与性质研究

经磷缓液提取 ,乙醇沉淀 ,超滤去杂 ,然后经CM -纤维素柱层析 ,DEAE -SephadexA -5 0柱层析纯化了Dactylosporangiumaurantiacum菌脲酶 ,纯化倍数达 5 0 .0 1 ,活力回收率为 1 7.81 %。经SDS -PAGE垂直平板电泳测得其分子量为 42 0 0 0。经氨基酸组成分析 ,该酶含 2 71个氨基酸残基 ,该酶的紫外吸收峰为2 75nm。     

DFRKN-1碱性磷酸酶的纯化研究

以根结线虫天敌1号分离物为提取碱性磷酸酶的材料,菌体经液氮研磨破碎后,用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀分离,透析获得酶的粗提取液.再经过DEAE-52离子交换和SephadexG-150分子筛两步层析得到纯化倍数为27.17、比活力达10 514U/mg的碱性磷酸酶.     

女贞果实过氧化物酶的纯化及热稳定性研究

为探讨过氧化物酶在女贞果实发育中的作用,经过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100、DEAE-纤维素离子交换层析分离,从女贞果实中分离提纯过氧化物酶(POD),纯化倍数为48倍,回收率为13.3%。该酶的比活力为1 167.15 U/mg蛋白,最适pH为6.5,对H2O2的Km值为3.85 mmol/L,对愈创木酚的Km值为6.2 mmol/L,最适温度为40℃,热稳定性较好,55℃以下不易失活。其活性受到MnSO4明显抑制。     

蜗牛酶中纤维素酶的分级分离

[目的]探索用分级沉淀方法去除蜗牛酶中非纤维素酶的效果。[方法]向粗酶液中加入硫酸铵,使溶液中的硫酸铵从10％饱和度以10％为梯度逐渐递增到100％的饱和度,用考马斯亮蓝法测定蛋白含量,DNS法测定纤维素酶活力。[结果]硫酸铵饱和度达到40％时原酶液中的大部分非纤维素酶杂蛋白开始沉淀,但此时所得沉淀的比活力最低;在50％饱和度下分离出的沉淀中纤维素酶的活力最高,在50％及之后的几个饱和度时,分离出了较多的纤维素酶蛋白,表明硫酸铵分级沉淀蜗牛酶可以显著提高其中纤维素酶的活力。[结论]用50％的饱和度分级沉淀蜗牛酶中的纤维素酶最合理。     

高产木聚糖酶的紫色红曲霉菌株筛选及酶学性质研究

[目的]筛选紫色红曲霉木聚糖酶,并研究其酶学性质。[方法]采用平板筛选和固体培养方法获得了产木聚糖酶较高的紫红曲霉（Monascus pupureus）533。采用50%~70%硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶层析、DEAE Sepharose fast flow阴离子交换层析和SephacrylS-200凝胶层析进行纯化。最后,研究温度、pH、金属离子和化学物质对酶活性的影响。[结果]经分离纯化后得到相对分子质量约为46.0 kD的木聚糖酶。木聚糖酶最适反应温度为47℃;最适反应pH为5.5,pH稳定范围为4.5~5.5;Ca2＋、Fe2＋、Na＋和Tween 80对酶活力有激活作用;Mn2＋、Tris、EDTA、尿素和SDS对酶活力有抑制作用;Cu2＋和K＋对酶活力影响不大。[结论]该研究筛选到1株高产木聚糖酶的紫色红曲菌株,扩大了产木聚糖酶的菌株范围。     

乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化

用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。     

乌贼墨中多酚氧化酶的分离及纯化

用pH7.2磷酸提取缓冲液从乌贼墨汁澡提取多酚氧化酶，提取的粗酶液经30%-80%饱和度硫酸铵分级沉淀、透析、DEAE-SepharoseCL-6B柱层析和SephadexG-150柱层析后，得到纯化的多酚氧化酶，纯化们数为10.78，纯化后的酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别采用银染色和多酚氧化酶活性染色均显示一条电泳带。     

重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的纯化及部分酶学性质研究

[目的]研究重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的性质。[方法]由重组大肠杆菌制备重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶发酵液,经乙醇分级沉淀和DEAE-650M离子交换层析分离纯化后进行SDS-PAGE纯度鉴定,最后分析纯化后重组酶的酶学性质。[结果]SDS-PAGE分析表明纯化后得到了较纯的重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶,比活力达13 437 U/mg,纯化倍数为19.85倍,回收率为20.60%,分子量约30 kDa。纯化后重组酶的最适pH值为6.0,pH值4.5~6.0较稳定;最适温度为50℃,40~50℃较稳定;Cu2+和Fe2+对其活力有显著的抑制作用,Mg2+、Zn2+和Mn2+对其活力有抑制作用,比较适合在啤酒酿造上使用。[结论]该研究为重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的工业化应用奠定了基础。     

芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

以芽孢杆菌作为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化β-葡萄糖苷酶,并测定了其部分酶学性质。结果表明:该酶以水杨酸苷为底物时,最适pH值为7.0,最适温度为50℃,是一种中性酶,具有较好的热稳定性。金属离子对酶活性影响较大,其中Fe2+对酶的激活作用最为明显,而K+对酶有明显的抑制作用。     

黑曲霉产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

［目的］分离纯化黑曲霉固态发酵产生的β-甘露聚糖酶,研究β-甘露聚糖酶酶学性质。［方法］黑曲霉经固态发酵制备粗酶液,分别采用硫酸铵分段沉淀法、丙酮沉淀法和Sephadex凝胶层析法对β-甘露聚糖酶进行分离纯化,用PAGE检验其纯度。同时测定纯化后的β-甘露聚糖酶酶学性质。［结果］β-甘露聚糖酶经40%～90%饱和度硫酸铵沉淀法纯化后比活力可提高到1 180.9 U/mg 经1.0 ∶1.0～1.6∶1.0（V/V）丙酮沉淀法纯化后的比活力可提高到1 847.0 U/mg;最后经凝胶层析法纯化后的比活力可提高到7 950.4 U/mg,纯化倍数为8.67,在PAGE凝胶电泳图谱上得到单一条带,即纯化后的β-甘露聚糖酶。［结论］纯化后β甘露聚糖酶的酶学性质为：最适pH值4.2,最适反应温度60 ℃,米氏常数Km 2.67 mg/ml。     

片烟黑曲霉菌株产纤维素酶的条件优化及酶的分离纯化

为降低烟叶燃吸的刺激味、改善口感、增加香气、提高烟叶品质,从烟叶表面筛选到一株产纤维素酶活性较高的黑曲霉,应用Plackett Burman试验确定4种显著因子,RSM法对4种显著因子进行了优化和分析,并对酶蛋白的分离纯化作了初步研究。结果显示：发酵产酶的最适碳源为玉米芯,氮源为NH4NO3,当玉米芯用量为13.4%,NH4NO3为0.4%,温度为30.4℃,pH为5.6时产酶比活力最高,可达40.02 U·mL-1。纤维素酶酶蛋白的硫酸铵盐析最佳饱和度为60%,经Sephadex G100凝胶柱层析纯化后的比活力提高了3.5倍,回收率为32.6%,达到较高水平。