湘西自治州禽流感H5、H7亚型的监测与分析

为监测湘西自治州H5亚型禽流感的免疫抗体水平和H7亚型禽流感的感染情况;对32个规模禽场和8个活禽交易市场进行了抽样检测.从整体水平看,采集的810份禽血清样品,有567份样品的H5亚型禽流感免疫抗体合格,合格率为70%.H7亚型禽流感的非免疫抗体水平全为阴性.     

蛋鸡H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫血清抗体与卵黄抗体检测比较分析

为分析蛋鸡免疫后卵黄抗体与血清抗体的相关性,试验采集经H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫的黔东南小香鸡、乌蒙乌骨鸡、威宁鸡血清样本和卵黄样本,采用血凝抑制试验进行相关免疫抗体检测。结果:3个地方品种鸡的血清样本和卵黄样本中均可检测出H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫抗体,且几何平均效价均大于24以上,达到免疫合格标准,不同地方品种鸡群间差异不显著(P>0.05);免疫后30d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,但差异不显著(P>0.05);免疫后60d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,差异显著(P<0.05)。结果表明:卵黄抗体与血清抗体呈正相关性,卵黄抗体几何平均效价均低于血清抗体。在临床上可用卵黄抗体替代血清抗体进行H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫效果的评价,但应选择在免疫后30d以内。     

鄂西北地区规模化鸡场H9亚型禽流感抗体水平监测

本试验旨在了解鄂西北地区规模化鸡场鸡禽流感(H9亚型,下同)免疫水平。2007年8月—2010年5月对鄂西北地区65个鸡场接种H9禽流感疫苗20 d后的鸡随机采集血样2311份,应用ELISA方法对血清的禽流感抗体水平进行监测调查。调查结果表明,所检测的2311份血样中,2007年检测11家鸡场共135份血样,104份阳性,阳性率77.0%,强阳性83份,强阳性率61.5%。其中,免疫合格鸡场4家,占受检鸡场36.4%;2008年检测25家鸡场共985份血样,883份阳性,阳性率89.6%,强阳性732份,强阳性率74.3%。其中,免疫合格鸡场21家,占受检鸡场84.0%;2009年检测16家鸡场共433份血样,348份阳性,阳性率80.4%,强阳性277份,强阳性率64.0%。其中,免疫合格鸡场12家,占受检鸡场75%。2010年检测13家鸡场共758份血样,638份阳性,阳性率84.2%,强阳性575份,强阳性率75.6%。其中,免疫合格鸡场11家,占受检鸡场84.6%。2007年禽流感的血清抗体水平较低,相比较,2008—2010年有了明显增加。受检的规模化鸡场仅部分能达到保护水平,且各鸡场的免疫合格鸡比例方面存在较大差异。     

禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法的建立

将禽流感病毒H7亚型标准抗原作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合。通过血凝抑制试验,筛选得到12株杂交瘤细胞上清具有HI效价,且与禽流感病毒H7亚型阳性血清间具有较好的竞争效果。将竞争效果最好的1H11细胞扩大培养后制备腹水,获得的单克隆抗体具有效价高、特异性好等特点。使用H7标准抗原包被ELISA板,将HRP标记的单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测方法。利用该方法对待检血清进行测试,与HI试验有99.3%的符合率,说明试制的禽流感病毒H7亚型竞争ELISA抗体检测试剂盒可以用来检测禽流感病毒H7亚型抗体,且操作简便快捷,可批量操作,大样本检测鸡群抗体水平。     

H5亚型禽流感免疫抗体监测报告

为检测已免疫禽H5亚型禽流感免疫抗体水平,检查免疫的质量,2005年12月我们对新疆克拉玛依市12个规模化养禽场的家禽和农户散养禽进行了抽样检查,共计抽检血样405份,应用血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验进行了H5亚型禽流感血清抗体检测,报告如下:一材料与方法1材料(1)禽流感H5亚型HI     

泰兴市规模禽场H5亚型禽流感免疫抗体监测与分析

利用疫苗免疫接种是我国防控高致病性禽流感的主要措施之一,从2003年起H5亚型禽流感(AIH5)疫苗在我市全面推广应用,并在每年春秋开展免疫抗体抽检。2005年面对国内外高致病性禽流感疫情的严峻形势,为了摸清我市AIH5疫苗的实际免疫效果,我们对全市24个乡镇200羽以上养禽专业户全     

2009-2013年山东省H5亚型禽流感抗体检测

本研究自2009年起至2013年底对山东省17地市家禽血清抗体进行了监测。共采集家禽血清样品26678份,采用HI试验进行了H5亚型禽流感Re-4株抗体和Re-5株抗体检测,分别检测有25959、25825份样品合格,免疫合格率97.3%和96.8%,2010年秋季之后,家禽血清抗体检测合格率达到了100%。种禽场的免疫合格率明显高于商品化规模场,商品化规模场高于散养户。     

禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR检测方法的建立

为了简便、快速、准确的检测禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)H5、H7、H9亚型(lumpy skin disease virus,LSDV),本研究通过对禽流感病毒HA2基因保守区域的分析,设计、合成特异性引物和探针,结合Taq man-MGB探针技术,建立禽流感病毒H5、H7、H9亚型...     

胶体金方法检测H3和H7亚型禽流感病毒

用微波法制备金溶胶,对禽流感病毒(AIV)H3和H7亚型单克隆抗体(H3-1D6和H7-1F7)用亲和层析法进行纯化,优化单抗与金溶胶的最佳结合条件后,喷涂于玻璃纤维上制成金标垫.将纯化的马抗H3和H7亚型AIV多克隆抗体和山羊抗鼠二抗分别包被于硝酸纤维素(NC)膜上作为检测线和质控线,制备胶体金检测试纸条.用制备的试纸条对H3和H7亚型AIV标准抗原、毕赤酵母真核表达蛋白和已知样品进行检测,结果与血凝试验、血凝抑制试验、AC-ELISA和RT-PCR方法相符.同时用该方法对H5和H9亚型AIV标准抗原、病料以及传染性支气管炎、新城疫等抗原进行检测,结果均为阴性.该方法操作简单,肉眼于10 min内可判定结果,且达到了血凝试验和血凝抑制试验的敏感性.     

禽流感病毒H5、H7和H9亚型一步法多重RT-PCR检测方法的建立

为了建立能同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的方法,参考GenBank中H5、H7和H9亚型AIV的HA基因序列的保守区域,利用Primer 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特异性引物,预期特异扩增H5AIV片段大小为380bp、H7AIV为501bp、H9AIV为732bp。经过反应条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的一步法多重RT-PCR方法。该方法特异性强,对其他亚型AIV和禽呼吸道病原体检测结果为阴性;敏感性高,H5、H7和H9亚型AIV RNA的最低检出量分别为10-4、10-4、10-2拷贝/μL。初步建立了快速、敏感、特异地鉴别检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的分子生物学诊断方法。     

免疫程序与母源抗体对H5禽流感疫苗免疫鸭和鹅HI抗体水平的影响

对不同日龄与母源抗体水平的鸭和鹅，用H5亚型禽流感疫苗免疫后，其HI抗体消长情况进行了比较和观察，结果，初生水禽3日龄首免即可对禽流感疫苗（H5亚型）产生良好的免疫应答；雏鹅母源抗体几乎以每4d下降1个HI抗体效价单位的速度消退；母源抗体对H5禽流感疫苗免疫后的HI抗体水平存在一定的干扰作用；加强免疫鸭和鹅所产生的H5 HI抗体水平及其维持时间与仅免疫一次的鸭和鹅所产生的抗体水平之间存在显著差异；鸭和鹅免疫H5禽流感疫苗后第25～30d H5 HI抗体水平达到高峰。     

H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备

禽流感病毒基于其表面囊膜蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）表面抗原的不同，可分为不同的亚型，各亚型之间变异较大，其中H5亚型为强毒之一，也是引发2004年世界禽流感暴发的主要血清亚型。我国现阶段具有检测禽流感病毒的一系列较成熟的诊断方法，包括病毒检测和抗体检测，其中病毒的检测对于禽流感的确诊具有十分重要的价值。在病毒检测的方法中，病毒分离需要的实验周期较长，难以达到对高致病性禽流感快速诊断的需要；RT—PCR方法常由于多种客观因素的干扰而出现假阳性或假阴性结果，且检测成本较高；     

禽流感病毒H5、H9亚型的多重RT-PCR鉴别诊断

根据禽流感病毒H5、H9亚型的HA基因序列,设计了两对RT-PCR引物,同时对H5、H9亚型进行了多重RT-PCR扩增,得到了两条清晰的目的带.将目的带回收并进行测序,同源性比较结果证明其为禽流感H5、H9亚型的HA基因序列,作者对多重RT-PCR进行反应条件优化以及敏感性与特异性测定,证明该方法的敏感性和特异性都比较好.初步应用于30份临床病料,其检测结果与病毒的分离培养一致,比电镜和琼扩的检出率高,与其他NDV、IBV的病料无交叉反应,可用于禽流感病毒H5、H9亚型的鉴别诊断.     

商品肉雏鸡H5亚型禽流感母源抗体变化规律

通过血凝抑制(HI)试验,对市售商品肉雏鸡血清H5亚型禽流感母源抗体进行调查,结果显示,该批商品肉雏鸡H5禽流感母源抗体仅持续13d,峰值出现在3～5日龄,达到6.4～6.6(log2)。从6日龄起母源抗体水平开始下降,13日龄后下降到临界值4(log2),从20日龄开始几乎检不出母源抗体。     

禽流感H5亚型(re-4/re-5)毒株免疫抗体水平检测

为了掌握甘肃省2012年禽流感发病情况和免疫情况,通过在兰州、白银、武威等市选择102个养殖场,采集1 621份鸡血清,用血凝抑制实验检测其H5亚型(re-4株/re-5株)的抗体水平,结果有68个养殖场合格率在70％以上,免疫效果较好,近期对禽流感有一定抵抗力,其余养殖场抗体效价较低,对禽流感抵抗力较弱.     

鸭免疫重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5+ Re-4)后抗体水平分析

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类传染病。根据致病性的不同将禽流感分为高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,我国     

新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测

新城疫以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。目前出现的鸡新城疫发病率一般在10%～25%,死亡率在15%～35%,产蛋鸡产蛋率下降30%左右,是危害养禽业的一种主要传染病。禽流感(AI)则是由A型流感病毒引起的一种禽类急性、热性、败血性、高度接触性传染病,不仅给     

H5、H7和H9亚型禽流感病毒多重反转录聚合酶链式反应检测方法的建立

参考GenBank登录的H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,利用DNAStar软件分析其同源性,利用Primer Premier5.0软件设计3对分别针对AIVH5、H7和H9亚型的特异性引物。3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228、830bp。结果显示,利用3对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术。该方法对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228、830bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原不存在交叉反应。该方法对H5、H7和H9亚型AIVcDNA的最低检出量分别为10-4、10-2和10-4。结果表明,本试验建立了可同时检测鉴别H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术。     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2亚型毒株接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活后与优质矿物油佐荆混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批，接种28日龄非免疫鸡100羽，4天后检测抗体，以后每隔1周或2周采血检测H5亚型HI抗体，并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明，免疫后4天即能检测出抗体，之后逐渐上升，至第5周抗体水平达到高峰且较稳定，然后缓慢下降，110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明，能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

费县养鸡场新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测

本次检测费县某蛋鸡场血样30份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测。结果表明,该鸡场新城疫HI抗体效价≥5log2的占87%,新城疫免疫合格;而禽流感抗体效价≥5log2的占67%,禽流感H5亚型免疫失败,鸡场必须补免或重免禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。