均匀设计优化喜盐鸢尾ISSR-PCR体系

以新疆野生喜盐鸢尾DNA为模板, 采用U20(54)和U12(34)均匀设计表,通过4因素5水平和4因素3水平两轮均匀优化试验,对影响ISSR-PCR扩增结果的一些因素如Mg2+ 、dNT P、引物以及TaqDNA聚合酶浓度以及循环数和退火温度等进行优化筛选, 建立了适合喜盐鸢尾的最佳ISSR-PCR反应体系:在25 μL反应体系中,包括2.5 μL 10×PCRBuffer ,2.0mmol/L M g2+,250 μmol/L dNTP,0.1 μmol/L 引物,0.5U TaqDNA 聚合酶,40 ng模板DNA.扩增程序为 :94℃预变性3 min;接着进行40个循环:94℃变性45 s,52.1℃退火30 s,72℃延伸1.5 m in;循环结束后,72℃延伸5 min,4℃保存.     

采用正交设计方法优化梨ISSR-PCR反应体系

采用正交设计的方法对梨ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物的浓度)在4水平上进行优化试验,PCR结果用DPS数据处理软件分析,建立的梨ISSR-PCR的最佳反应体系(20μL)为:Taq DNA聚合酶1.0U、M2+的浓度2.0mmol·L-1、模板DNA 10～80 ng、dNTPs 0.10mmol·L-1、引物0.3 μmol·L-1.对梨ISSR-PCR最佳反应体系进行了梯度退火试验,得到的最佳退火温度为55℃.     

利用正交设计优化向日葵ISSR-PCR反应体系

向日葵产业的发展对调整黑龙江省种植业结构、利用中低产田、增加农民收入具有十分重要的作用,为了推广ISSR分子标记技术在向日葵分子育种上的应用,利用正交设计对向日葵ISSR-PCR反应体系中的5个因素(模板DNA、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶用量)在4个水平上进行优化,确立了适合向日葵ISSR-PCR反应的20μL体系:50ng模板DNA、2.0μmol·L-1dNTP、37.5μmol·L-1 Mg2+、8μmol·L-1引物、8UDNA Taq酶。     

铜鱼ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

采用正交设计方法,对影响铜鱼(Coreius heterodon(Bleeker))ISSR-PCR扩增结果的5个因素,如Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA的浓度,在4个水平上进行了比较优化,建立了适合铜鱼的最佳ISSR-PCR反应体系:在25μL反应体系中含有1.5 mmol/L Mg2+,0.16 mmol/L dNTP,0.2μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶和140 ng模板DNA.检验结果表明,采用该反应体系对铜鱼进行ISSR-PCR扩增可获得多态性高,稳定性和重复性好的电泳条带.     

长春花ISSR-PCR 反应体系的正交优化

[目的]筛选最适的长春花ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验方法,对影响长春花ISSR-PCR反应体系的引物浓度、dNTP浓度、Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶浓度和模板DNA浓度5个因素在4个水平上进行正交试验,建立适合长春花ISSR-PCR的反应体系。[结果]长春花ISSR-PCR反应体系的最佳条件：引物浓度0.50μmol/L,dNTP浓度0.10 mmol/L,Mg2＋浓度3.00 mmol/L,Taq酶浓度0.75U/25μl,DNA模板浓度350 ng/25μl。采用该反应体系筛选出12对适合于长春花ISSR-PCR反应的引物。[结论]利用优化系统进行长春花的ISSR-PCR反应,可获得稳定性高、重复性好、背景清晰的电泳结果。     

茶树ISSR-PCR反应体系的正交优化

对茶树ISSR-PCR反应体系中的5因素(Taq酶浓度(U/(20μL))、Mg2+浓度(mmol/L)、模板DNA质量浓度(ng/(20μL))、dNTP浓度(mmol/L)、引物浓度(μmol/L))在4水平上进行正交优化试验,筛选出各因素的最佳水平,建立茶树最佳ISSR-PCR反应体系,即20μL反应体系中,TaqDNA聚合酶为1.0U/(20μL),Mg2+为2.0mmol/L,模板为40ng/(20μL),dNTP为0.20mmol/L,引物为0.25μmol/L.对茶树ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,确定引物ISSR1、UBC881的最适退火温度分别为52.4、59.0℃.     

甘薯ISSR-PCR反应体系的优化

为进一步利用ISSR-PCR标记技术研究甘薯种质资源的遗传多样性,针对影响ISSR-PCR反应体系的5个影响因子(模板、甲酰胺、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶)进行了甘薯ISSR-PCR体系优化的正交试验设计研究.结果表明,处理10为比较好的组合,即在20 μL的反应体系中,含稀释浓度为10倍的DNA模板,0.30 mmol/L dNTP,1.00 μmol/L引物,1.00 UTaq酶,0.5%去离子甲酰胺比较适合甘薯DNA的特异扩增.     

百合ISSR-PCR反应体系的优化

为优化百合ISSR - PCR反应体系,利用正交试验设计,对百合ISSR - PCR反应体系中的5种主要因素进行优化筛选.结果表明:优化的25μL百合ISSR - PCR反应体系为dNTP 0.2 mmol/L、Mg2+ 2.0 mmol/L、引物0.5 μmol/L、模板DNA 60 ng和Taq酶1.0U,最佳退火温度为52.2℃.该体系以38个品种(种)百合进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高,且具有良好重复性.说明优化的百合ISSR - PCR反应体系适用于百合资源的品种(种)鉴定及遗传多样性研究.     

桑树ISSR-PCR反应体系建立及优化

采用正交试验设计L₁₆(4⁵)对桑树ISSR-PCR反应体系中的模板DNA、引物、Mg²⁺、dNTPs和rTaq酶5个因素及反应程序中变性时间、退火时间、延伸时间和循环数进行优化分析。结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响大小依次为DNA模板>rTaq酶>Mg²⁺>引物>dNTPs。最终确立了最佳反应体系,即在10μL反应体系中,含25 ng/μL DNA模板1μL、10×PCR buffer 1μL、20μmol/L引物0.2μL、2.5 mmol/L Mg²⁺ 0.8μL、2.5 mmol/L dNTPs 1μL、5 U/μL rTaq 0.1μL。优化得到的反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性40 s,合适的退火温度退火45 s,72℃延伸90 s,40个循环;72℃延伸10 min,16℃保存。通过梯度PCR,确定引物ID37的退火温度为49.5℃。稳定性检测表明该体系能用于桑树ISSR分析。     

正交设计优化大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系

[目的]优化大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系,为大旗瓣凤仙遗传多样性分析提供技术参考.[方法]利用正交试验设计对大旗瓣凤仙ISSR-PCR反应体系的5个因素(Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA)4水平进行优化分析,并在此基础上对PCR反应过程中的退火温度进行筛选.[结果]建立了大旗瓣凤仙ISSR-PCR的优化反应体系,即在25.0 μL反应体系中含1×PCR Buffer、Mg+ 1.5 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.8 μmol/L、TaqDNA聚合酶0.75~1.00 U、模板DNA 100 ng.通过该体系可以筛选出6条对大旗瓣凤仙种群扩增效果较好的引物.[结论]优化的ISSR-PCR反应体系具有较高的稳定性,可用于大旗瓣凤仙及凤仙属植物种群的ISSR遗传多样性分析.     

文冠果嫁接研究

[目的]研究影响文冠果嫁接成活率的主要因子,提高文冠果的嫁接成活率。[方法]对接穗采集地的温度、接穗保存时间、保存措施及嫁接手法进行了对比试验,[结果]接穗保存措施、嫁接人员操作技术和嫁接手法直接影响文冠果嫁接成活率。在一定时间和温度范围内,接穗保存时间和采集地温度对文冠果嫁接成活率影响不显著。[结论]为文冠果的选优繁优提供技术参考。     

文冠果造林技术研究

结合陕西省富县的生态环境特点,对文冠果造林技术进行了研究,结果表明,黄土高原文冠果造林宜采用＂阳向缓坡造林地＋鱼鳞坑整地＋轻蘸浆埂上栽植＋秋季截杆造林＂技术。该研究对文冠果在西北地区的推广应用具有重要的指导意义。     

文冠果的研究进展

综述了文冠果在繁殖技术、引种选育、生理学以及化学成分等方面的研究进展,提出了目前文冠果研究方面的不足.     

文冠果繁育和造林技术措施

文冠果育苗技术和造林技术项目是省林业局下达的推广项目,本文叙述了文冠果的播种繁育技术和造林技术。     

文冠果种粒性状相关性

在文冠果主要分布区采集文冠果种子,并对种子性状数量指标包括种粒长度、种粒直径、种粒质量、种皮质量、种仁质量、种仁体积、种粒体积、种子出仁率等进行测试,对其各性状之间的相关性分析表明,文冠果种粒各性状指标均有较大的变幅,而这种变幅说明了文冠果种粒个体间存在着较大的变异.从种粒各性状的相关性来看,除了种粒长度与种粒直径的线...     

文冠果细胞悬浮培养技术研究

[目的]建立文冠果体细胞胚胎发生和快速成苗的悬浮培养体系,为文冠果的产业化和规模化发展提供参考。[方法]以文冠果新旧种子为材料,诱导体胚发生,进行文冠果细胞悬浮培养。[结果]适合胚性愈伤诱导的最佳培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L＋3％蔗糖;适合胚性愈伤组织不定芽诱导培养的最佳诱导培养基为MS＋6一BA1．0mg／L．4-NAA1．0mg／L＋3％蔗糖,且萌芽率最高;适合单细胞团再生植株培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L＋3％蔗糖。[结论]NAA和2,4-D混合使用有利于胚性愈伤组织的形成;一定浓度的NAA对文冠果愈伤组织萌芽培养有较大的促进作用。     

碱性蛋白酶水解文冠果蛋白酶的条件研究

[目的]研究碱性蛋白酶水解文冠果蛋白的最佳工艺条件。[方法]选取底物浓度、pH、温度、酶用量和水解时间为影响因素,以文冠果蛋白的水解度作为评价指标,进行单因素分析,并以此为依据采用响应曲面分析法确定碱性蛋白酶的最佳水解条件,然后对最佳条件进行验证试验。[结果]碱性蛋白酶水解文冠果蛋白的最佳工艺条件为底物浓度5%,加酶量4%,pH 9.0;在此优化条件下,水解度为19.75%。[结论]为文冠果蛋白的研究开发提供了技术参数。     

文冠果苗期种源试验

以6个不同种源的文冠果种子和1~2年生苗为试验材料,对其场圃发芽率、物候期、1年生播种苗年生长规律等进行对比分析。结果表明：山东蒙山和陕西淳化县种源场圃发芽率、苗高和地径生长量均优于其他4个种源;内蒙古翁牛特旗、陕西淳化县、甘肃灵台县、青海循化县和新疆巩留县种源萌芽、展叶、开花、结果等物候期会相应提前;山东蒙山、内蒙古翁牛特旗和甘肃灵台县种源为“雨季速生型”,而陕西淳化县、新疆巩留县和青海循化县种源为“雨季缓生型”;不同种源苗高、地径的广义遗传力为0898~0966,苗高的种源方差分量为7536%、8411%,地经的种源方差分量则为72.86%、8805%。山东蒙山、陕西淳化县2个种源,苗高、地径的遗传增益平均为1653%和842%。     

文冠果苗期生长规律研究

对文冠果1年生苗的生长规律进行了研究。结果表明,文冠果1年生播种苗高生长可分为出苗期、幼苗期、速生期和生长后期4个时期,速生期苗高、地径生长量均达到全年最大,分别占全年总生长量的82.3%和47.3%。