杉木 SRAP-PCR 反应体系优化与建立

采用L16（45）正交实验设计,对杉木SRAP-PCR反应体系中Mg^2＋、 dNTPs、 Taq DNA聚合酶用量、引物浓度及模板DNA用量等5个因素进行了优化,并确立了适宜杉木的最佳SRAP-PCR反应体系。杉木的SRAP-PCR最佳反应体系为：反应体系总体积为25μL,含2.0 mmol／L Mg^2＋、0.3 mmol／L dNTPs 、0.3μmol／L引物,1.0 U Taq DNA聚合酶、50 ng模板DNA及1×PCR buffer。各因素对杉木基因组DNA SRAP-PCR扩增结果的影响程度不同,其中dNTPs浓度影响最大, Mg^2＋浓度的影响最小。运用杉木单株基因组DNA对优化SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明所确立的杉木SRAP-PCR反应体系稳定可靠。     

杂种松SRAP-PCR反应体系的优化

通过单因素试验,对杂种松SRAP-PCR反应体系的各主要影响因子（Mg^2＋浓度、dNTP浓度、引物浓度以及Taq DNA聚合酶用量）进行了优化筛选,最终得出杂种松SRAP-PCR反应的最佳体系为：25μL体系中含有Mg^2＋2.0 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq酶1.0 U,引物0.4μmol/L,模板DNA 30-50 ng以及1%体积的DMSO。采用该优化体系,对两种杂种松（火加松、湿加松）基因组DNA进行SRAP扩增,表明大部分引物对扩增出来的带清晰可辨、背景较少,完全满足分子标记的要求,为杂种松SRAP标记的相关研究奠定了基础。     

白桦SRAP-PCR反应体系的优化

采用单因素试验对白桦SRAP-PCR反应体系中的5个因素(Mg2+、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA)进行优化,结果表明:在25μL反应体系中Mg2+浓度2.0 mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.5 U、d NTPs 0.15 mmol·L-1、引物浓度0.4μmol·L-1、模板DNA 30 ng,该体系能够很好地满足白桦SRAP扩增的要求。优化体系的建立将为今后利用SRAP标记技术对白桦进行分子遗传育种研究奠定基础。     

油茶SRAP-PCR反应体系的优化

Camellia oleifera is one of the important oil tree species in south China, and C. oleifera industry is quickly developed with the support of the national policies in recent years. The disorder of C. oleifera varieties is one of the key issues restricting the development of C. oleifera industry. Because of high polymorphism, good repeatability, less use of DNA and so on, SRAP as a new marker was used in identification of cultivars, analysis of genetic resources and genetic diversity in recent years. In this paper, the orthogonal design was used to optimize SRAP-PCR system for C. oleifera by 5 factors (Mg²⁺, dNTPs, primer, Taq polymerase, DNA template) and 4 levels, respectively. The data were analyzed by software SPSS V13.0. A suitable SRAP-PCR system (20 μL) was established as: 75 ng DNA template, 1.5 mmol·L^-1 Mg²⁺, 0.15 mmol·L^-1 dNTPs, 1U Taq DNA polymerase, 0.4 μmol·L^-1 primer, 1×PCR buffer. The result of optimal SRAP-PCR system will provide a foundation for the identification of C. oleifera cultivars.     

普陀樟SRAP-PCR反应体系的建立

以舟山群岛的普陀樟（Cinnamomum japonicum var.chenii）新鲜叶片为实验材料,采用L16（45）正交试验设计,对影响普陀樟SRAP-PCR反应的Mg2+浓度、dNTPS、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素组合进行了筛选。结果表明：适于普陀樟的SRAP-PCR反应体系（20μL）为2.5 mmol/L Mg2+、0.2 mmol/L dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.4μmol/L引物、10 ng模板DNA、2μL 10×PCR buffer,该体系位点清晰,扩增稳定;利用该反应体系从100对SRAP引物组合中筛选出多态性好的引物24对。     

西伯利亚杏SRAP-PCR反应体系的优化研究

以西伯利亚杏为试验材料,进行基因组DNA的提取、扩增及电泳试验。通过L16(45)正交试验,确定西伯利亚杏SRAP-PCR优化反应体系(反应体系总体积20μL):Mg2+2.0 mmol·L-1、dNTPs0.25 mmol·L-1、引物浓度1.2μmol·L-1、Taq聚合酶1.0 U、DNA模板20 ng。采用SRAP引物组合ME5/EM10,对优化的SRAP-PCR反应体系进行初步验证,24个西伯利亚杏无性系SRAP分子标记试验共扩增出谱带431条,引物扩增出23条谱带,其中338条为多态性谱带,多态百分率为78.42%。     

云南松SSR—PCR反应体系的优化研究

本项研究以云南松实生苗幼嫩针叶为材料,采用单因素试验设计,分析云南松SSR—PCR扩增反应体系中各组分对扩增结果的影响,并进一步采用正交试验设计对SSR—PCR扩增反应程序进行优化。结果表明,在15μL SSR-PCR反应体系中包括,1×TaqPCRBuffer,模板DNA用量30ng,Taq聚合酶用量1．0U,0．2mmol L-1dNTPs,3．0mmol·L-1Mg2＋以及正、反引物各0．2μmol．L-1;扩增反应程序为,94℃预变性4min;94℃变性30s,退火30s,72℃延伸45s,35个循环;最后72％延伸10min,4℃保存。该反应条件的建立为开展云南松种质资源SSR分子标记研究提供了参考依据。     

班克松SRAP-PCR反应体系的优化

以班克松幼叶为试材,采用L16（45）正交设计对SRAP-PCR反应体系进行优化,结果表明：班克松SRAP-PCR最佳反应体系为：1.5 mmol/L Mg2＋、0.1 mmol/L dNTPs、0.2μmol/L引物、1.5 UTaq酶和30 ng模板DNA。运用优化的反应体系对班克松进行验证,电泳结果显示扩增条带清晰,多态性高,证明该体系稳定可靠。这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术,对班克松分子生物学研究提供了技术参考。     

金樱子SRAP-PCR反应体系的建立与优化

以广西南宁产的金樱子叶片为材料,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素进行了优化。结果表明:适用于金樱子SRAP-PCR的最佳反应体系为:反应总体积10μL,包含2.0 mmol/L Mg2+、0.4 mmol/L dNTPs、0.5 UTaqDNA聚合酶、3μmol/L引物、25ng DNA及10×PCR Buffer;各因素对PCR反应影响由大到小依次为:Mg2+、DNA、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶。用7份不同来源的金樱子材料对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得了条带清晰、多态性丰富的扩增图谱,证实了该体系的稳定可靠。     

樟树ISSR-PCR反应体系优化研究

以樟树基因组DNA为材料,分析了影响樟树ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于樟树的ISSR反应体系和扩增条件。结果表明获得清晰、重复性高的樟树ISSR-PCR扩增条件为:20μL PCR反应体积中,1×PCR Buffer(10 mmol.L-1Tris.HCl,pH8.3,50 mmo.lL-1KCl),2.0 mmo.lL-1MgCl2,200μmol.L-1dNTPs,50 ng模板DNA,200 nmo.lL-1引物,0.5 UTaq DNA聚合酶。在扩增过程中,引物的适宜退火温度比其Tm值平均高3℃。这为今后利用ISSR标记技术开展樟树种间遗传多样性分析提供参考。     

遮荫对红松、红皮云杉苗木生长的影响

研究不同年龄红松，红皮云杉在全日照、70％、40％、30％及10％光照条件下的生长情况，结果表明，红松、红皮云杉苗木均在相对照度70％的条件下，树高生长量最大。全日照不利于苗木高生长。地径生长随着光照强度的增大而增大。相对照度70％条件下，红松、红皮云杉（小）平均单株生物量最高。红皮云杉（大）在全日照下平均株生物量最高。随着苗龄的增长对光的需要量增大。     

红松松籽壳色素理化性质研究

红松松籽壳是红松种子的外种皮,在红松松籽壳中含有大量的天然色素,试验以红松松籽壳色素为对象,对其理化性质进行了研究。结果表明：红松松籽壳色素属于黄酮类化合物,耐光性和耐热性强,在pH为6-14范围内稳定。常用食品添加剂葡萄糖、蔗糖、氯化钠的加入对红松松籽壳色素影响较小,氧化剂、还原剂及苯甲酸钠不利于保持色素稳定性。金属离子K＋、Na＋、Ca^2＋、Mg^2＋、Zn^2＋对红松松籽壳色素影响较小,Al^3＋、Cu^2＋和Fe^2＋则对该色素有显著破坏作用。红松松籽壳色素是一种潜在的天然着色剂和理想的食用色素来源。     

红松果林嫁接试验研究初报

采用3年生红松苗和4年生樟子松容器苗做砧木,选用牡丹江东京城17年生红松人工林中生长优异的林木,在树冠上中部的侧枝采取接穗,用髓心形成层贴接法进行嫁接。试验结果表明,嫁接成活率均在70%以上,接穗当年生长量樟子松砧木高于红松砧木。     

红松皆伐迹地更新红松的效果分析

为了探讨红松皆伐迹地更新红松的效果,对红松皆伐迹地更新的红松的生长情况进行了调查研究,结果表明：红松皆伐迹地更新红松效果不良,无论是胸径还是树高,其生长量都比较缓慢,荒山荒地更新的红松,胸径生长量比红松皆伐迹地高32%,树高生长量高62%;红松皆伐迹地的土壤理化性质均不如荒地,针叶N、P、K的含量和叶面积指数皆低于荒地,更新10年后根系的分布,无论是水平分布还是垂直分布,都远不如荒地的更新效果。建议对红松皆伐迹地应该培养人工阔叶林或人工针阔混交林。     

红松扦插技术的研究

研究结果表明，红松扦插最佳季节为4月20日－5月1日、7月10日－7月15日；插穗应采集节间插穗，5a生插穗粗细为0．4－0．6cm，长短为3－5cm为宜。     

红松容器苗造林试验

采用2年生容器苗进行了带状、林下及中孔径下造林试验,结果表明,无论何种方式造林,容器苗造林成活率和高生长量明显高于裸根苗,缓苗率大大低于裸根苗。     

红松播种苗施肥效应研究

本文采用正交设计对红松播种苗进行了施肥效应研究,测定了不同施肥组合条件下苗木的形态指标。结果表明:影响苗木生长的各肥料因子的顺序依次为C(追施尿素)、A(施基肥)、B(追施二铵),促进苗木生长的较佳施肥组合为A3(4)B1C3,即基肥用量为有机肥7 500 g/m2 二铵7g/m2或有机肥7 500 g/m2 二铵7 g/m2 硫酸钾12 g/m2;追肥二铵用量为0;追肥尿素的用量为30 g/m2。     

红松多酚抗氧化实验研究

红松广泛的分布于中国北方的树种,属于裸子植物门,其树皮中的多酚是具有抗氧化活性的重要物质,具有光辉的开发前景。采用了AP-8富集多酚,并对洗脱物做了DPPH,ABTS,结果,红松多酚提取物具有清除羟基自由基,ABTS,DPPH,作用,抑制诱发的肝脏匀浆过氧化作用。结论,红松多酚可以作为一种天然抗氧化剂。     

杨树红松采穗圃的营建技术

采穗圃是提供优质穗条--插穗和接稳的繁殖圃.根据树种的生物学特性不同,分别介绍了杨树、红松采穗圃圃地的选择与规划、营建和管理.