福建省致病疫霉交配型、甲霜灵敏感性及生理小种组成分析

为明确福建省致病疫霉的群体结构及其变化特点,对2001—2007年分离自11个市(县)的番茄和马铃薯产区的致病疫霉菌株进行交配型、甲霜灵敏感性及生理小种测定。交配型测定的187个菌株中,181株为A1交配型,1株为A2交配型,1株为A1,A2交配型,1株为自育交配型,其余3株交配型未知。对187个菌株的甲霜灵敏感性测定结果表明,高抗、中抗和敏感菌株分别占97.3%、2.1%、0.5%。生理小种测定结果表明,供试的11个抗性基因均可被克服,其毒性频率在3.3%～100%之间,51个菌株存在30个生理小种,其中小种3.7出现频率最高,为13.7%,是福建省优势生理小种类型;其次为小种3.4.7,发生频率为9.8%。     

2009年黑龙江和吉林省马铃薯晚疫病菌表型结构研究

为明确2009年黑龙江和吉林两省马铃薯主产区晚疫病菌的表型特征,本研究对所采晚疫病菌的交配型、甲霜灵抗性及生理小种分别进行了测定.结果表明:被测黑龙江(46株)和吉林(48株)两省的菌株均为 A1 交配型.黑龙江省被测菌株甲霜灵高抗、敏感菌株各占50％;吉林省被测菌株中高抗、敏感菌株分别占70.8％、29.2％;两省均未发现中抗菌株.其中采自吉林敦化菌株均为高抗菌株,采自吉林榆树的菌株均为敏感菌株,甲霜灵抗/感比例地区间差异明显.在被测33个黑龙江菌株中发现24个生理小种,而吉林49个菌株中发现19个生理小种,其中9个生理小种两省共有.另外,两省被测菌株中还发现了18株“超级毒力小种”.因此,建议加强种薯监测,防止 A2交配型传入;在生产上使用甲霜灵类药剂防治马铃薯晚疫病应该以菌株的抗性监测数据为依据;进一步加强生理小种监测,合理布局抗病品种.     

辽宁省辣椒疫霉菌生理小种的生物学特性及生物制剂对辣椒疫病的防效

为了明确辽宁省辣椒疫霉菌Phytophthora capsici优势小种的生物学特性及生物制剂对辣椒疫病的影响,于2013—2014年在辽宁省辣椒种植区采集样品,采用组织分离法获得33个分离物,对分离物进行单孢子囊纯化鉴定,采用单基因鉴别寄主技术鉴定生理小种,研究了不同培养条件对优势小种生长发育的影响,并测定了生物制剂对辣椒疫病的防效。结果表明,菌株Pc-2、Pc-5和Pc-6等23株菌株为3号生理小种,占分离物总数的69.7%;菌株Pc-2在9种供试培养基上均可生长,菌丝生长最适培养基为燕麦片培养基,最适pH为9,温度为28℃;番茄培养基、pH为10和光暗交替有利于其形成孢子囊;pH为7、温度为5℃以及全光照处理是游动孢子释放的最佳条件;游动孢子萌发受酸碱度和光照的影响均不明显,28℃是其萌发的最适温度;在先灌药后接种处理中肃克对辽椒12号疫病的防效为78.2%。研究表明,3号生理小种为辽宁省辣椒疫霉菌的优势小种,低温促进游动孢子的释放,肃克防效优于其它生物制剂。     

“霜霉威(Propamocarb)”“甲霜灵(Metalaxyl)”对我国辣椒疫霉菌作用方式比较及交互抗性的研究

 通过霜霉威(Propamocarb商品名普力克)、甲霜灵(Metalaxyl商品名瑞毒霉)对辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)6个菌株作用方式的体外测定结果表明,霜霉威浓度在2000ppm时对P. capsici孢子囊和卵孢子的形成,游动孢子的释放、游动及休止孢萌发、菌丝体的生长没有明显的抑制作用。而甲霜灵对P. capsici的各种孢子的产生及菌丝体的生长有较强的抑制作用,对菌丝体生长抑制的Ec₅₀和Ec₉₅分别为0.5596ppm和2.1511ppm;对孢子囊形成抑制的Ec₅₀和Ec₉₅分别为0.1520ppm和15.0032ppm。0.1ppm的甲霜灵可显著抑制卵孢子的生成。但500ppm的甲霜灵对于游动孢子的释放和休止孢萌发没有明显的抑制作用。对霜霉威和甲霜灵的体内活性试验结果表明,800ppm的霜霉威对辣椒疫霉菌的内吸保护防效达94%,1.0ppm的甲霜灵对该病的防效达100%。室内初步试验结果表明,甲霜灵与霜霉威对P. capsici没有交互抗性。     

云南辣椒疫病的分子诊断及其病原菌群体特征研究

 对2005~2007年分离自云南省辣椒疫病的病原菌进行分子生物学鉴定,并对病原菌的群体特征进行研究。PCR特异性扩增表明,引起云南辣椒疫病的病原菌是辣椒疫霉。交配型测定显示,234个云南辣椒疫霉菌株由A1、A2和A1A2(自育型)3种交配型组成,以A2和A1A2交配型为主。其中,A2占45.3%,A1A2占43.2%,A1仅占11.5%。大部分产区3种交配型共存,在田间进行有性生殖的可能性很大。甲霜灵敏感性测定的200个菌株中,甲霜灵敏感菌株是主要菌系,占测定菌株的95.5%,中抗和抗性菌株比例较低,分别为2.0%和2.5%。抗药性菌株的出现与甲霜灵的选择压力有关。云南辣椒疫霉群体组成较为复杂,A1A2交配型可能在云南辣椒疫霉的有性生殖中起到了重要的作用,成为影响群体结构的一个重要途径。     

抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的生物学特性

为了明确抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的适生性,以田间自然产生及室内诱变获得的抗甲霜灵辣椒疫霉菌株为材料,测定了抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的主要生物学性状。各菌株的游动孢子囊产生量为9.6×103～13.0×103个/mL,孢子囊释放率为61.3%～68.4%,游动孢子萌发率为35.3%～42.1%,适温条件下的菌丝平均生长速率约为10.28～11.55 mm/天;各菌株在含100μg/mL孔雀石绿的CA培养基上均不能生长,淀粉水解指数为0.18～0.95;接种辣椒、番茄、南瓜、西葫芦和茄子等果实所致病斑平均直径分别为34.11、18.47、30.19、37.78和32.73 mm。经方差分析,抗甲霜灵辣椒疫霉菌株的生物学性状与敏感菌株无显著差异,表明甲霜灵并未改变其生物学性状,辣椒疫霉对甲霜灵具有较高的抗性风险。     

大豆疫霉菌对甲霜灵(Metalaxyl)的敏感性及变异性

大豆疫霉菌(Phytophthora megasperma f.sp.glycinea)对甲霜灵的敏感性及变异性研究结果表明,17个中国大豆疫霉菌侏菌丝生长对甲霜灵较敏感,Ec50值平均为0.0098ppm,Ec95值平均为2.6295ppm。但不同菌株对甲霜灵的敏感性不同,Ec50值范围在0.0042～0.0297ppm之间,相差7倍左右。Ec95值范围在0.7688～6.1682ppm之间,相差8倍左右。3个美国菌株菌丝体生长对甲霜灵有一定耐药性,Ec50值范围在0.3725～0.4813ppm之间,Ec95值范同在125.97～280.59ppm之间,分别比中国大豆疫霉菌株Ec50值和Ec95值平均高43倍和77倍。单孢分离物菌丝体生长对甲霜灵敏感性变异较大,B1菌株单孢分离物Ec50值范围在0.0058～0.2537ppm之间,S367菌株的单孢分离物的Ec50值范围在0.0069～0.1735ppm之间,分别相差43倍和25倍。有的单孢分离物对甲霜灵的耐药性增高。各菌株孢子囊和卵孢子产生对甲霜灵敏感性有一定差异,但1.0ppm的甲霜灵对其抑制率均为100％。活体测定结果表明,1.0ppm的甲霜灵对该病的防效达94～100％。     

云南省德宏州冬作马铃薯晚疫病菌表型特征研究

 2003~2005年,从云南省德宏州新兴冬作马铃薯主产区采集的马铃薯晚疫病病样中分离纯化到86株致病疫霉菌,对其代表性菌株的表型特征进行了较系统的研究。交配型实验结果表明:所测定的62个菌株都属于A1交配型,未发现A2交配型或自育型菌株。毒性基因鉴定、监测及生理小种组成分析显示:德宏州存在所有已知可鉴定的毒性基因,而且生理小种组成非常复杂;所测定的66个菌株可区分出36个生理小种,其中,出现频率最高的小种为1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,占被测菌株的18.18%,在主产区潞西县和盈江县均有分布。对60个菌株的甲霜灵抗性测定结果表明:56.67%的菌株表现为敏感,25.00%的菌株中抗,18.33%的菌株对甲霜灵有抗性。本文对此实验研究结果作了初步的分析和讨论。     

14种药剂对辣椒疫霉菌防效的测试初报

使用化学农药是辣椒疫病综防的重要措施之一。为筛选高效防病药剂,1990年10月进行了不同药剂防治辣椒疫霉菌效果的平皿测定试验。     

安徽省辣椒疫霉交配型的分布及在无性后代的遗传

 测定了采自安徽省岳西、潜山、和县、合肥、寿县、淮南、阜南、亳州等不同地区的64 株辣椒疫霉菌株的交配型,并用10 μg / mL 的甲霜灵处理A1 交配型的菌株HN8 和A2 交配型的菌株HN3,分别获得抗性突变菌株HN8-Mrt和HN3-Mrt,进一步测定交配型在HN8、HN3 及其抗性突变株游动孢子后代中的遗传稳定性。结果发现,供试菌株中A2 交配型58 株(占90． 6% );A1 交配型6 株(占9. 4% ),未发现A0 、A1 A2 和A1 ,A2 交配型;A2 交配型全省各地均有分布,A1 交配型只出现在和县、淮南和阜南3 地;HN8-Mrt与HN8、HN3-Mrt与HN3 的交配型分别相同,各菌株单游动孢子后代的交配型均与其亲本分别相同。结果说明,辣椒疫霉交配型在安徽的分布呈不均等的态势,其中以A2 型占绝对优势;用甲霜灵处理不会诱导辣椒疫霉交配型的变异,交配型在辣椒疫霉的游动孢子后代中能稳定遗传。     

江西省辣椒疫霉生理小种构成及其对烯酰吗啉的敏感性分析

为了明确江西省辣椒疫霉对烯酰吗啉的抗药性风险,采用灌根法鉴定了108个江西辣椒疫霉菌株的生理小种,并采用菌丝生长速率法测定了江西省辣椒疫霉对烯酰吗啉的敏感性.结果表明,菌株LP20、LP38和LP48属于生理小种3,占测定菌株总数的2.8％,其余菌株属于生理小种2,占测定菌株总数的97.2％,为优势生理小种,且未发现生理小种1.烯酰吗啉抑制辣椒疫霉菌丝生长的EC50值范围为0.1149～0.2868 μg/mL,最不敏感菌株的EC50值为最敏感菌株的2.49倍.不同地区的菌株对烯酰吗啉的敏感性差异不大,崇义的菌株平均EC50值最低,为0.1367 μg/mL,分布范围为0.1213 ～0.1462 μg/mL;吉水的菌株平均EC50值最高,为0.2185 μg/mL,分布范围为0.1805 ～0.2835 μg/mL.     

四种熏蒸剂对辣椒疫霉和南方根结线虫的毒力

为明确不同熏蒸剂对土传病原菌辣椒疫霉Phytophthora capsici和南方根结线虫Meloidogyne incognita的毒力,采用密闭熏蒸法测定了4种土壤熏蒸剂氯化苦、棉隆、威百亩、1,3-二氯丙烯的毒力及1,3-二氯丙烯和氯化苦复配的联合毒力。结果表明:氯化苦、棉隆、威百亩、1,3-二氯丙烯对辣椒疫霉的EC₅₀分别为0.12、2.44、8.30、8.45 mg/L; 对南方根结线虫的EC₅₀ 分别为1.23、0.22、0.30、0.18 mg/L。1,3-二氯丙烯和氯化苦以2:1、1:1、1:2比例复配时对辣椒疫霉的EC₅₀ 分别为1.13、0.24、0.14 mg/L;对南方根结线虫的EC₅₀分别为0.19、0.32、0.61 mg/L。结合经济效益和多种病害兼治的原则,推荐使用1,3-二氯丙烯与氯化苦1:1配比,可兼治辣椒疫病和根结线虫病。     

Antifungal activity of oligochitosan against Phytophthora capsici and other plant pathogenic fungi in vitro

Antifungal activity of oligochitosan against nine phytopathogens was investigated in vitro. Oligochitosan was more effective than chitosan in inhibiting mycelial growth of Phytophthora capsici and its inhibition on different stages in life cycle of P. capsici was observed. Rupture of released zoospores induced by oligochitosan was reduced by addition of 100 mM glucose. The effects of oligochitosan on mycelial growth and zoospore release, but not zoospore rupture, were reduced largely when pH value was above 7. The ultrastructural study showed that oligochitosan caused distortion and disruption of most vacuoles, thickening of plasmalemma, and appearance of unique tubular materials. Plasmalemmasomes in hyphal tip cells were not found in the presence of oligochitosan. These results suggest polycationic nature of oligochitosan contributes only partly to its antifungal activity and multiple modes of action of oligochitosan exist including the disruption of endomembrane system.     

安徽省辣椒疫霉对甲霜灵的抗药性监测

为了明确安徽地区辣椒疫霉对甲霜灵的抗药性水平及抗性菌株的地理分布,2005-2006年从安徽省16个市、县采集辣椒疫病病株,经分离纯化鉴定,获得125株辣椒疫霉菌株,分别采用生长速率法和叶盘漂浮法测定其对甲霜灵的敏感性.结果表明,按照Parra & Ristaino(2001)标准,供试菌株中有79株对甲霜灵敏感,38株对甲霜灵敏感性处于中间状态,8株抗甲霜灵,即敏感菌株、中间菌株和抗性菌株分别占总体的63.2%、30.4%和6.4%.采自不同地区的菌株对甲霜灵的敏感性差异较大,其中以寿县的菌株最为敏感,EC50值最低为0.10μg/mL,平均为0.81±0.20μg/mL;而砀山、和县地区的菌株表现出一定的抗药性,平均EC50为8.32±0.19 μg/mL,最高达25.47μg/mL.抗性菌株的最高抗性倍数约为90倍.     

Oligochitosan inhibits Phytophthora capsici by penetrating the cell membrane and putative binding to intracellular targets

The mechanism of action of oligochitosan, which has shown great antifungal activity against Phytophthora capsiciin vitro, was studied using 2-aminoacridone-labeled oligochitosan (2-AMAC-oligochitosan) and a gel-retardation experiment. Internalization of 2-AMAC-oligochitosan in cysts, germtubes and sporangia of P. capsici was confirmed by confocal laser scan microscopy (CLSM), and the degree of uptake depended on the incubation concentration. 2-AMAC-oligochitosan localized mainly in the cytoplasm and showed no binding to both cell wall and cell membrane. Mannose, an inhibitor for oligochitosan uptake by macrophages, could not inhibit the internalization of oligochitosan in P. capsici. The gel-retardation experiment showed that oligochitosan bound strongly to DNA and RNA of P. capsici. These results indicate that oligochitosan exerts its antifungal activity by penetrating the cell membrane and putative binding to intracellular targets such as DNA and RNA.     

辣椒疫霉对双炔酰菌胺敏感性及对其它杀菌剂的交互抗性

采用菌丝生长速率法测定了不同地区115个辣椒疫霉菌株对双炔酰菌胺的敏感性,同时测定了紫外诱导和药剂驯化的10个抗性突变体及其4个亲本菌株对双炔酰菌胺、烯酰吗啉、甲霜灵、嘧菌酯和霜脲氰的敏感性。山东青州、寿光和河北定兴、藁城4地辣椒疫霉菌株均对双炔酰菌胺较敏感,且敏感性差异不显著。不同抗性水平菌株对5种药剂的敏感性测定和相关性分析结果显示,双炔酰菌胺与其它几类药剂之间均不存在交互抗性。10个抗性突变体继代培养11代后,8个抗性突变体抗药性不能稳定遗传;2个抗性突变体抗药性不仅能够稳定遗传,且EC₅₀值维持在很高水平,分别为1 429.524 μg/mL和6 872.476 μg/mL,因此,双炔酰菌胺的连续使用有利于抗药群体的发展。