乙草胺降解菌Bacillus subtilis L3的土壤修复效果研究

应用微生物技术可以对乙草胺污染土壤进行修复,经前期分离筛选及鉴定,已获得高效乙草胺降解菌株Bacillus subtilus L3,为进一步明确其对乙草胺的实际降解效果及对污染土壤的修复作用,对L3开展盆栽效果研究。试验考察了不同降解菌浓度和施用时间对乙草胺降解率的影响,以及降解菌的施用对土壤中可培养的常见微生物数量、酶活、营养元素及敏感作物小麦生长的影响等。结果表明,终浓度为5×108CFU/g土的菌液对乙草胺的降解率最高,50 d后对乙草胺的降解率为92.65%;施用L3菌液后,污染土壤微生物的数量有较大程度的恢复;蔗糖酶、脲酶、蛋白酶、过氧化氢酶活力分别提高100%、260%、56%与6%;土壤的全氮、速效磷、有效钾、有机质分别提高77%、159%、698%和274%;小麦地上部分较对照组增高117%,总鲜重增重56%,根长增长27%。该结果证实菌株L3具有良好的乙草胺降解效果和土壤修复能力,为该菌株在土壤污染治理及修复中的实际应用奠定了理论基础。     

酵母菌A82-2的分类鉴定及对桃软腐病菌的抑菌效果研究

对1株具有抗桃软腐病菌的酵母菌A82-2进行了系统分类鉴定。通过4种不同的抑菌实验研究该酵母菌对桃软腐病菌(Rhizopus stolonifer)的拮抗作用:平板抑菌实验表明菌株A82-2对R.stolonifer为拮抗阳性;菌株混合培养实验说明菌株A82-2对R.stolonifer抑菌效果明显,且与菌株A82-2菌悬液的含菌量呈正相关;发酵液抑菌实验表明菌株A82-2并没有向胞外分泌抑菌活性物质,说明菌株A82-2不是通过产生抑菌物质对R.stolonifer产生抑制作用,而是通过菌株之间的营养竞争和空间竞争产生拮抗作用;活体研究表明:1×108 cfu/mL菌株A82-2,对接种了1×105孢子/mL桃软腐病菌的桃果实具有显著的抑制作用。采用形态特征观察和生理生化特性分析对该酵母进行了传统分类鉴定,进一步利用分子生物学方法对其26SrDNA序列进行分析,确定该拮抗酵母菌为异常毕赤酵母(Pichia anomala),该菌在果蔬病害的生物防治和防腐保鲜方面具有很高的应用潜力。     

几种外源物质对氧化葡萄糖酸杆菌生长及产2-酮基-L-古龙酸的影响

通过在发酵培养基中添加不同的外源营养物质及巨大芽孢杆菌的培养上清液,研究其对氧化葡萄糖酸杆菌生长及产2-酮基-L-古龙酸(2-KGA)的影响。结果表明,添加适量的谷氨酸单钠(MSG)、腺苷三磷酸(ATP)、含氮碱基、二氢叶酸和巨大芽孢杆菌的培养上清液都能够促进菌体增殖并提高2-KGA产量,而且2-KGA产量与生物量呈正相关。巨大芽孢杆菌的培养上清液促进菌体生长和产2-KGA的作用远大于以上各种外源营养物质。添加培养36 h的巨大芽孢杆菌胞外液后,氧化葡萄糖酸杆菌的菌落数和2-KGA产量分别是对照的13.39倍和8.81倍,而添加外源营养物质中促进作用最大的二氢叶酸后仅为对照的4.12倍和2.97倍。这表明,2-KGA产量的增加主要是通过促进氧化葡萄糖酸杆菌的菌体增殖实现,巨大芽孢杆菌的培养上清液促进氧化葡萄糖酸杆菌生长和产酸的机制不同于其他外源营养物质,可能是通过某种生物活性物质提高氧化葡萄糖酸杆菌菌群密度来实现。     

固态发酵中2种微生物降解玉米秸秆效果的对比研究

为探究哈茨木霉(Trichoderma harzianum)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)这2种菌株在固态发酵条件下降解玉米秸秆的效果,通过25 d的室内发酵培养试验对固态发酵中添加哈茨木霉和枯草芽孢杆菌后玉米秸秆的有机碳、纤维素、木质素、纤维素酶活、木聚糖酶活以及β-葡萄糖苷酶活变化进行对比研究。结果表明:发酵第10~16 d时,哈茨木霉和枯草芽孢杆菌处理的玉米秸秆分解速率、纤维素酶活、木聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活均达到最高,发酵25 d后,2种微生物处理的玉米秸秆分别累积降解了21.79%和20.12%,说明两者的降解效果差异不大;与枯草芽孢杆菌处理相比,哈茨木霉处理的秸秆剩余量、有机碳含量、剩余秸秆有机碳总量分别降低了1.67%、0.26%和1.80%,秸秆纤维素降解率、秸秆木质素降解率、纤维素酶活、木聚糖酶活和β-葡萄糖苷酶活分别升高了6.99%、6.54%、0.7 FPU·m L~(-1)、0.04 IU·m L~(-1)和9.26 IU·m L~(-1),说明添加哈茨木霉和枯草芽孢杆菌均可以降解秸秆,但两者对玉米秸秆的降解效果差异不明显。     

枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2电击转化体系的建立

[目的]建立枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株ZT4-2的高效电击转化体系.[方法]带有荧光蛋白标记的穿梭质粒pGFP78,通过电击转化法将其转入枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2.[结果]菌株培养阶段、感受态细胞浓度、感受态细胞量、质粒体积量、转化电压等条件的不同,会对电击转化效率造成影响.其中试验条件:制备感受态细胞的菌株培养阶段的OD600nm值=1.0,重悬菌体时每100 mL起始菌液加入600 μL的40％PEG6000;电击转化体系中,感受态细胞量200 μL,质粒体积10 μL,转化电压2.5 kV.最高转化效率可达6 823.67 CFU/μg.[结论]建立了枯草芽孢杆菌菌株ZT4-2的电击转化体系,电击转化效率较高.     

Bacillus thuringiensis杀虫基因在花椰菜愈伤组织的整合与表达

 本文利用双元载体系统，通过土壤根癌农杆菌A281和B6S3菌株的介导，将B.t. aizawai 7-29杀虫蛋白基因导入我国栽培花椰菜品种瑞士雪球，得到转基因愈伤组织及其再生植株。Southern分子杂交证明B.t.杀虫蛋白基因已整合到花椰菜基因组中。用组织化学法检测GUS活性，观察到愈伤组织的转化细胞呈蓝色，由于B.t.杀虫蛋白基因与GUS基因翻译融合，GUS基因的表达为杀虫蛋白基因在花椰菜组织中表达提供了证据。     

向日葵黄萎病拮抗细菌Y1-2菌株的鉴定与抑制效果

从向日葵黄萎病病区的健康植株根际分离到l株对向日葵黄萎病病原菌(Verticillium dahliae Kleb.)具有较强拮抗作用的菌株Y1-2.经形态观察、生理生化测定及16S rDNA序列对比分析结果表明,菌株Y1-2鉴定为Bacillus subtilis,其与(CJT14XVY01S)B.subtilis序...     

一株拮抗腐霉病菌的枯草芽孢杆菌的分离鉴定及诱变选育

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可产生多种抗菌蛋白、抗生素及酶类抗菌物质,对多种植物病原真菌有良好的防治效果。通过从土壤中分离抑真菌活性的枯草芽孢杆菌,并进行UV-NaNO2物理化学联合诱变,获得一株对腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)具有较强拮抗作用的菌株。突变菌株的生长速率、耐高温性均较出发菌株有较大提高,盆栽试验表明诱变菌株较出发菌株对腐霉病菌引发的黄瓜腐霉病具有更好的防治作用。     

枯草芽孢杆菌B2-GFP菌株的构建及其在土壤中的定殖

采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率;同时,采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期,在培养11 h后同时进入稳定生长期;B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后,在荧光显微镜下,菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数,且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天,烟株根际土壤活菌数达1.61×10⁷ CFU·g^-1;在自然土壤中接种该菌第42天,烟株根际土壤活菌数达1.46×10⁷ CFU·g^-1;接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.     

枯草芽孢杆菌和甲基硫菌灵对烟草根腐病的防治效果研究

本试验以前期预防、后期控制为主要思路,通过枯草芽孢杆菌和甲基硫菌灵的配施开展试验,探索在常年发生根腐病重病田病害防治的有效措施,为保障烟叶生产提供依据。试验结果表明:施用枯草芽孢杆菌和甲基硫菌灵的处理相较对照发病率和病情指数更低,其中在发病胜期根腐病的发病率和病情指数方面,三次均施用甲基硫菌灵的防治效果较低;在采烤前病死率方面,在移栽后施用1~2次甲基硫菌灵处理较低;在防治成本方面,施用一次甲基硫菌灵处理较施用两次甲基硫菌灵处理低27.5元/亩。综合来看针对病害较重田块,建议在移栽后15d施用一次甲基硫菌灵以获得病害防治和成本控制最优解。     

枯草芽孢杆菌抗菌蛋白的性质及对魔芋软腐病菌的抑制作用

以枯草芽孢杆菌为试验材料,以魔芋软腐病致病菌胡萝卜软腐欧文氏杆菌属胡萝卜软腐菌亚种(Erwinia carotovora var.carotovora,简称软腐菌)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aure,简称金葡菌)作指示菌,采用抑菌圈法,利用不同浓度硫酸铵盐析分离抗菌蛋白.结果表明,30%硫酸铵处理盐析的蛋白对软腐菌的抑菌活性最高;抗菌蛋白对软腐菌的抗菌活性在室温至60℃处理10 min时无明显影响,70℃处理10min,其活性仅下降17.1%;在pH值5.5～10.0的范围内抗菌蛋白活性无明显变化;经过氯仿处理后抗菌蛋白活性保持最好;胃蛋白酶可降解部分抗菌蛋白.     

Free Amino Acid Profiles of Fermented Soybean Products Prepared by Bacillus subtilis and Rhizopus oligosporus

Fermented soybean is one of the traditional foods widely consumed in many Asian countries. Most products(i.e., Natto, Jang, Kinema and Thua nao) are produced mainly by the bacterial activity. This study was performed as a part of the program to improve the soybean fermentation, and a use of the co-culture between the bacterium Bacillus subtilis and the fungus Rhizopus oligosporus was selected. For fermentation, the raw soybeans were washed, sterilized by autoclaving, and inoculated with a mixed microbial starter culture of B. subtilis(102 CFU · g~(-1)) and R. oligosporus(102 conidia · g~(-1)). The Free Amino Acid(FAA) contents were then investigated by using High Performance Liquid Chromatography(HPLC). The results showed that the amounts of FAAs and essential amino acids in the fermented soybean samples were found at significantly higher concentration when compared to those of the cooked, non-fermented soybean samples(p0.05). These data indicated that an involvement of microbial fermentation helped to accelerate an increase of FAA. The food compositional data were useful as a reference(and/or guidance) for the nutritional value, when compared to other fermented soybeans and related products.     

枯草芽孢杆菌B_2发酵工艺及其质量检测方法研究

研究了枯草芽孢杆菌B2从种子发酵液到发酵罐的放大培养,通过正交优化试验筛选枯草芽孢杆菌B2发酵的优化组合、种子罐和发酵罐的发酵时间及发酵液的质量检测方法.结果表明:枯草芽孢杆菌B2的最佳发酵组合为接种量10%,pH 7.5,通气量1 000 L.h-1,转速200 r.min-1;种子罐的发酵时间为20 h;发酵罐最适放罐时间为36 h.发酵液质量检测以活菌量为主要指标,辅助比浊法检测.     

枯草芽孢杆菌防治棉黄萎病研究

用枯草芽孢杆菌7种不同处理方法防治棉黄萎病,结果标明:以棉种量10%的枯草芽孢杆菌种子包衣最简便有效,防效49.4%～56.6%,达极显著水平。     

枯草芽孢杆菌B_1、B_2发酵液生物表面活性剂初探

将枯草芽孢杆菌B1、B2发酵液在50～120℃分别热处理2h,B1、B2表面张力分别为28.34～30.12mN/m、28.34～31.53mN/m;pH在2.0～7.0之间,B1、B2表面张力分别为27.07-28.42mN/m、28.98-30.9mN/m;NaCl浓度在2.0×104～2.0×105mg/L内,B1、B2表面张力分别为27.45～30.88mN/m、29.02-36.97mN/m。表明,B1、B2产生的表面活性剂对热、酸性和盐具有较强的耐性;当B1、B2表面活性剂粗制品浓度为0.03、0.04和0.05g/L时,B1对立枯丝核菌(RhizoctoniasolniaKuhn)抑制率分别为19.29%、28.71%和45.65%,B2分别为20.14%、30.82%、57.18%。说明B1、B2表面活性剂对立枯丝核菌(R.solnia)具有较好的抑制作用;B1、B2发酵液经提取纯化所得的表面活性剂粗制品,通过TLC和IR方法鉴定,初步确定为脂肽类物质。     

青霉素对枯草芽孢杆菌破壁效果研究

[目的]研究枯草芽孢杆菌生长期添加青霉素时的破壁效果。[方法]为使细菌释放出细胞内的有效活性物质,采用青霉素干扰微生物细胞壁形成的方法,研究不同的青霉素添加量对细胞的破壁效果。[结果]通过检测破壁前后菌体光密度变化值得出,在枯草芽孢杆菌的生长期,青霉素添加量对菌体光密度的变化有明显影响,青霉素添加量为25 mg/kg,作用时间4 h,温度30℃时,光密度变化值（ΔOD）最高,达0.695,说明此时破壁效果最佳。[结论]青霉素对细胞具有一定的破壁效果,推测根据需要可以适量添加青霉素,使细菌释放出细胞内的物质。     

添加枯草芽胞杆菌和营养物净化养殖污水的研究

利用室内试验,研究了加入营养物促进枯草芽胞杆菌净化养殖废水的方法。实验表明外源枯草芽胞杆菌比土著细菌对去除废水中溶解有机物和总氨氮有更强的能力,净化过程可以分为2个连续的阶段:溶解有机物的降解和总氨氮的去除。从起始日到第2d,细菌直接溶解有机物为碳源和氮源,48hCOD去除效率达(57.7±5.5)%,与对照组有显著性差异。在第2d到第5d,碳和磷相对于氮的不足限制了细菌增殖和去除总氨氮;葡萄糖和(或)磷酸盐的加入显著影响总氨氮去除效率,而加入复合维生素和(或)微量元素对其没有影响。同时加入葡萄糖和磷酸盐时,总氨氮去除效率大于85%,并形成悬浮的白色菌胶团。净化养殖废水时,水体中C∶N和N∶P质量比建议分别为5.4∶1和5￣7∶1。水中最高的细菌水平没有超过108CFU·mL-1,估计与细菌菌胶团的形成有关。     

枯草芽孢杆菌XM16分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化

以苹果腐烂病菌等22种植物病原真菌为供试菌,研究了枯草芽孢杆菌XM16无菌滤液的抑菌活性,结果表明,该无菌滤液对供试的植物病原菌具有强烈的抑制作用,抑菌谱非常广。无菌滤液经硫酸铵盐析,然后过Sephacryl S-100HR凝胶柱进一步分离纯化,获得2种不同组分的具强抑菌作用的抗菌蛋白。SDS-PAGE电泳显示,2种蛋白的分子量分别为21kD和30kD。     

枯草芽孢杆菌对黄瓜耐盐性的影响

采用基质栽培方式,研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在盐胁迫下对黄瓜植株生长、生理生化代谢、产量及品质的影响。结果表明,在无盐胁迫栽培时,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长具有促进作用;在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌同样促进植株的生长,增加了株高与叶面积,提高了植株SOD、POD和CAT保护酶的活性,降低了MDA的含量,产量比未添加枯草芽孢杆菌处理的增产18%,且一定程度地提高了果实的品质;而在2 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长和产量无促进作用。因此,在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌可一定程度提高黄瓜植株的耐盐性。