中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的纯化及部分性质研究

以中华蜜蜂的工蜂成体为提酶材料,经正丁醇提取、硫酸铵分级沉淀,0.1 5%NaCl溶液透析,得粗酶液.用Sephadex G-150葡聚糖层析柱纯化粗酶,获得提纯的碱性磷酸酶,提纯倍数为16.79,比活力达到135.85 U/mg.以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为底物,测定提纯后的碱性磷酸酶的理化性质.结果表明:该酶的最适温度为45℃,最适pH值为8.6,米氏常数(Km值)为0.97×10-3mol/L.甲醛、甲醇、乙醇和乙二醇对碱性磷酸酶均有抑制作用.     

饲用α-半乳糖苷酶稳定性及酶学特性的研究

本试验系统研究了通过固态发酵法生产的饲用α-半乳糖苷酶粗酶的稳定性及其酶学特性。结果显示,该酶具有较强的耐酸性能,稳定pH范围在3.5～6.5。酶的最适温度在50～60℃,在70℃以下时基本稳定,酶在干热条件下稳定性比湿热高。α-半乳糖苷酶经过猪胃肠液处理活力下降,但仍能保持活力70%以上。较高浓度(1×10-3mol/L)的各种金属离子均抑制酶活,在低离子浓度(1×10-4mol/L)时,Co2+和Mn2+对酶活力有促进作用,两种浓度的Ag+和Hg2+均强烈抑制酶活。粗酶制剂在常温储存6个月时仍保留原始活力的90.30%,到9个月时有80.58%,可见酶制品在储存条件下稳定。     

乳牛胎盘硷性磷酸酶的提纯和性质

通过正丁醇抽提、硫酸铵沉淀、DE-52离子交换层析和Con.A—Sepharose4B亲和层析,从乳牛胎盘中提取出硷性磷酸酶(ALP)。提纯倍数为109倍,比活为87金氏单位/mg蛋白。乳牛胎盘提取液经薄层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳只出现1条酶带,pI值4.5;提取的ALP分子量为168000;对热稳定性差,于56℃下作用10min,其活性丧失84％;对磷酸苯二钠的km值为2.1mmol/L;L—苯丙氨酸和L—色氨酸对该酶有抑制作用,10mmol/L—苯丙氨酸使酶活性抑制27％,10mmol/L L—色氨酸使酶活性抑制49％;尿素对该酶的抑制作用随着尿素浓度的增加而逐渐加强,2mol/L尿素可使酶活性抑制87％;左旋咪唑对该酶有较强的抑制作用,10~(-4)mol/L左旋咪唑使酶活性抑制79％;该酶在pH<7的条件下不稳定,在pH7～11范围内较为稳定;最适pH为10.4;妊娠乳牛血清中不含有胎盘来源的ALP同工酶。     

苦马豆素抑制α-甘露糖苷酶的剂量效应关系

根据苦马豆素(Sw)抑制α-甘露糖苷酶(AMA)的特点,建立了SW抑制AMA的剂量效应关系曲线和酶法测定SW溶液浓度的方法.SW溶液浓度范围在5×10-8mol/L～5×10-6mol/L时,SW溶液浓度的负对数与其抑制AMA活性百分比呈线性关系,线性方程Y=0.026X+5.167 4,R2=0.994 7.建立了酶...     

莆田黑猪精液中NAGase酶学特性研究

试验对以莆田黑猪精液为材料分离纯化得到的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)进行了理化特性研究。经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G100分子筛层析获得PAGE电泳纯化的NAGase酶制剂。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-GlcNAc)为底物,研究酶催化水解的相关性质。分离纯化获得的酶制剂比活力为1561.42 U/mg,分子质量为58 ku,只有1个亚基,等电点pI为9.13。酶的最适pH为5.6,最适温度为45 ℃,酶在pH 3.6～7.8之间稳定,当pH>8时迅速失活,在50 ℃以下处理30 min酶活力保存稳定,高于50 ℃时,酶活力迅速降低。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,米氏常数K_m为0.82 mmol/L,最大反应速度V_m为39.23 μmol/(L·min)。催化pNP-GlcNAc反应的活化能为27.30 kJ/mol。金属离子中Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Ca²⁺对酶活力无明显影响,Zn²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺对酶有抑制作用。     

家蚕丝素固定化葡萄糖异构酶的制备方法及其理化性质

脱胶蚕丝用稀碱溶液处理后制成多孔的碱化丝素 ,分别经物理吸附和戊二醛交联方法制得固定化酶Ⅰ和Ⅱ。每克固定化酶Ⅰ的总活力为 791 0 4U ,活力回收率为 5 2 0 6 % ,活力表现率为 72 2 7% ;每克固定化酶Ⅱ的总活力为 811 39U ,活力回收率为 5 3 6 7% ,活力表现率为 72 97%。蚕丝经高浓度氯化钙溶液溶解、脱盐等处理后制成丝素粉末 ,经吸附后用戊二醛交联固定了葡萄糖异构酶 ,制成固定化酶Ⅲ。每克固定化酶Ⅲ的总活力为 84 4U ,活力回收率为 5 5 2 7% ,活力表现率为 72 4 2 %。经对固定化酶性质的研究表明 :碱化丝素和丝素粉末均能较好地固定葡萄糖异构酶 ;最适温度比游离酶升高了 15℃ ;最适pH没有变化 ,有较强的抗蛋白质变性剂 (8mol/L尿素溶液中的活力在 80 %以上 )能力 ;各固定化酶的Km值在 4× 10 -2 ～ 5× 10 -2 mol/L范围内。实验还发现Co2 + 和Mg2 +离子为固定化酶的激活剂 ,Fe3 + 和Ca2 + 离子为抑制剂。     

单核细胞增生李斯特菌ActA单克隆抗体的制备

原核表达单核细胞增生李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,以Lm全菌为免疫原、以纯化的表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类,2B4为IgM亚类;检测腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64 000,2B9为1∶32 000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107L/mol、5.67×107L/mol和7.15×106L/mol;3G6、2B4和4E10为Lm ActA特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗为Lm检测方法的建立奠定了基础。     

糖对长白猪精液NAGaseⅡ的抑制机理

以长白猪精液为材料,采用经典的纯化方法获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC 3.3.1.52,NAGase）的2种同工酶,命名为：NAGaseⅠ和NAGaseⅡ。其中NAGaseⅡ的比活力为358.21U/mg,纯化倍数为6.37倍。以海藻糖、D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖为效应物,研究其对该酶活性的影响。结果表明：在特定浓度范围内,海藻糖对酶活力基本没有影响;D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖对该酶均有一定的抑制作用;D-甘露糖对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI为11.94mmo/L;蔗糖对酶的抑制作用表现为竞争型,抑制常数KI为0.56mmol/L;葡萄糖对酶的抑制作用表现为混合型,抑制常数KI和KIS分别为0.35mol/L和64.29mmol/L。     

绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数值

本试验旨在研究绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的米氏常数(Km)值,为解释绵羊瘤胃细菌、原虫蛋白质分解代谢特征提供酶学依据。选用6只1岁左右安装永久性瘤胃瘘管的中国美利奴(新疆型)绵羊[平均体重为(32.00±1.36)kg],饲喂精粗比为30∶70的饲粮,依次采集饲喂前(0 h)和饲喂后1.5、3.0、6.0、9.0、12.0 h 6个时间点的瘤胃液,重复采集3次。分离和制备细菌、原虫破碎液,分别测定相关酶活力及谷氨酸脱氢酶体系的Km值。结果显示:1)绵羊瘤胃细菌、原虫破碎液中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力随饲喂时间的延长均呈现先升高后降低的动态变化规律,总体在饲喂后1.5 h达到峰值;谷氨酸和氨含量也呈现相似的变化规律。原虫破碎液中参与蛋白质分解代谢的这4种酶的活力在各时间点均极显著高于细菌(P0.01)。2)原虫破碎液谷氨酸含量极显著高于细菌(P0.01);原虫破碎液氨含量在1.5、6.0、9.0和12.0 h显著或极显著高于细菌(P0.05或P0.01)。3)绵羊瘤胃细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的Km值分别为2.60×10~(-7)、1.48×10~(-7)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对谷氨酸的Km值分别为8.41×10~(-6)、4.91×10~(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的Km值分别为3.80×10~(-8)、2.70×10~(-8)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对α-酮戊二酸的Km值分别为1.16×10~(-6)、2.07×10~(-6)mol/L;细菌、原虫谷氨酸脱氢酶对氨的Km值分别为2.97×10~(-5)、1.40×10~(-5)mol/L。结果提示,总体上,绵羊瘤胃细菌、原虫中蛋白酶、谷氨酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶的活力在饲喂后1.5 h达到峰值,之后逐渐降低;绵羊瘤胃原虫中蛋白酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和谷氨酸脱氢酶的活力均极显著高于细菌,原虫中蛋白质分解代谢更旺盛;瘤胃原虫中不仅存在谷氨酸转氨机制,还可能存在利用氨重新合成氨基酸的机制。     

Fenton法反应机理及色度去除影响因素优化

为了进一步了解p H值、Fe2+与H2O2投加量、反应时间与反应温度等因素对Fenton体系的影响机理,试验采用Fenton法,以养猪场与屠宰场废水为处理对象,进行了色度去除影响因素优化试验。结果表明:处理100 m L废水,养猪场废水色度去除最佳p H值、Fe2+与H2O2投加量、反应时间与反应温度分别为3,2.8×10-4mol Fe SO4/(倍·L)与1.4×10-1mol H2O2/(倍·L)、90 min、25℃,屠宰场为5,9.0×10-6mol Fe SO4/(倍·L)与6.0×10-3mol H2O2/(倍·L)、90 min、20℃,此时两种废水最佳色度去除率分别为77%与98%。     

PIC瘦肉型猪应用研究

将ＰＩＣ良种猪引进沙县，通过风土驯化，品系杂交和科学饲养，使杂交母猪经产窝均数达１３．０头，二代初产１２．０头，４５日龄断奶头数１１．９头，窝重９５．６ｋｇ，肥育猪日增重７７９．１克，料肉比２．８８：１，均高于纯种瘦肉型猪。     

部分金属离子及EDTA对瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶活性与荧光光谱的影响

研究了K+、Mg2+、Ni2+、Zn2+、Mn2+、Fe2+、Cd2+、Ca2+、Cu2+9种金属离子及EDTA对瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶(ACPase)活力的影响,发现K+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Mn2+对ACPase有不同程度的激活作用。Cu2+、Cd2+、Fe2+、Zn2+对ACPase有不同程度的抑制作用。同一浓度范围内的金属离子对ACPase的激活作用强弱依次为Mg2+>Ni2+>Mn2+>K+>Ca2+,对ACPase的抑制作用强弱依次为Cu2+>Cd2+>Fe2+>Zn2+。利用双倒数作图法研究了Cu2+、Cd2+对酶的作用,结果表明这2种抑制剂对酶的抑制作用为非竞争性抑制,用Dixon作图法求得其抑制常数Ki值分别为0.58×103mol/L、9.44×103mol/L。研究了Mg2+、Ca2+、Cd2+、Cu2+对酶荧光光谱的影响,结果表明:Mg2+、Ca2+、Cd2+、Cu2+引起酶荧光发射光谱强度降低,最大发射波长不变,说明这些金属离子对酶的构象有不同程度的影响。     

基于PIC单片机的挤奶机脉动控制器的设计

本文介绍了基于PIC单片机的挤奶机脉动控制器原理及其实现。该系统以PIC单片机、奶流量传感器、电磁阀驱动为核心,实现了对奶流量的采集、控制、报警。在奶流量采集中,采用适当的设计,有效地提高了采样精度。同时采用了并入串出的74HC165芯片,实现了多种工作参数可调且节约硬件资源。整个系统设计精炼,成本较低,有广阔应用前景。     

Effects of increased vertebral number on carcass weight in PIC pigs

Variation of the vertebral number is associated with carcass traits in pigs. However, results from different populations do not match well with others, especially for carcass weight. Therefore, effects of increased vertebral number on carcass weight were investigated by analyzing the relationship between two loci multi‐vertebra causal loci (NR6A1 g.748 C > T and VRTN g.20311_20312ins291) and carcass weight in PIC pigs. Results from the association study between vertebral number and carcass weight showed that increased thoracic number had negative effects on carcass weight, but the results were not statistically significant. Further, VRTN Ins/Ins genotype increased more than one thoracic than that of Wt/Wt genotype on average in this PIC population. Meanwhile, there was a significant negative effect of VRTN Ins on carcass weight (P < 0.05). Thus, our results suggested negative effect of increased thoracic number on carcass weight in PIC pigs.     

长大、PIC、混血母猪繁殖性状研究

对红河州某猪场长大母猪311窝、PIC母猪138窝及当地农村饲养混血母猪753窝的繁殖性状进行测定,探讨品种、胎次和分娩季节对母猪繁殖性状的影响。结果表明,品种因素对母猪产仔性能有显著影响,长大母猪和混血母猪的总产仔数、产活仔数、初生窝重、28 d校正断奶窝重均极显著高于PIC母猪（P〈0.01）,长大母猪和混血母猪间除初生窝重、初生个体重和28 d校正断奶成活率有极显著差异（P〈0.01）外,其它指标差异均不显著（P〉0.05）。胎次因素对母猪产仔性能产生显著影响,经产母猪显著高于初产母猪（P〈0.05）,长大、PIC母猪2~8胎、混血母猪3胎以上产仔性能较好,其中长大、PIC母猪以第4胎最佳。分娩季节对PIC、混血母猪的繁殖性状无显著影响（P〉0.05）,而对长大母猪的产活仔数有显著影响（P〈0.05）。     

陕西省榆林市PIC种猪饲养现状及发展前景探析

陕西省榆林市是现代特色农业的重要基地,PIC种猪具有较大的品种优势.从PIC种猪的生产优势以及榆林市当地经济发展需求等方面进行分析,阐述了PIC种猪在榆林市的发展前景.     

豆粕和蚕蛹替代部分鱼粉对PIC商品猪生长性能的研讨

用蚕蛹和豆粕替代PIC商品猪配合饲料中的部分鱼粉,进行为期70d的饲养试验,拟研究不同饲料配方饲料对PIC生长猪生长性能的影响。结果表明:在鱼粉价格比较高时,蚕蛹和豆粕替代部分鱼粉是可行的。     

PIC五系配套猪与杜大长三元杂种猪的饲养试验

为测定PIC猪在中国东部地区的适应性和生产性能,2001年3月～2002年10月,笔者在宁波永青牧业有限公司进行了PIC五系配套猪与杜大长三元杂种猪的饲养试验.现将结果报告如下.     

Immune status of PIC Camborough-15 sows, 25% Meishan sows, and their offspring kept indoors and outdoors

Newer genetic lines of pigs are being used in indoor and outdoor production systems. The objectives of Exp. 1 were to describe the effects of the maternal sow line genotype, environment (indoor vs outdoor), and the genotype x environment interactions on blood hemoglobin (Hb), immunoglobulin G (IgG) concentrations, white blood cell (WBC) numbers, lymphocyte transformation/blastogenesis (LTA), natural killer (NK) cell activity, neutrophil chemotaxis, cortisol concentrations, and leukocyte differentials. Studies were performed using two genotypes: PIC Experimental-94 (Exp-94, an experimental line containing 25% Meishan) and PIC Camborough-15 (C-15). The Exp-94 sows had lower LTA at 0.2 microg/mL mitogen than the C-15 sows, whereas Exp-94 sows had higher NK cytotoxicity than the C-15 sows. When indoors, the two genotypes showed similar neutrophil chemotaxis. When outdoors, the C-15 genotype had higher (P < .01) neutrophil chemotaxis than the Exp-94 sows. The other immune measures were statistically similar for the two genotypes for each environment and for the genotype x environment interaction of sows. Experiment 2 sought to determine the effects of genotype on the immune system of nursery-age offspring of the experimental lines. Each sow line was bred to a common PIC 405 boar line. The Exp-94 x 405 pigs had elevated WBC numbers than C-15 x 405 pigs. The social status of the Exp-94 x 405 or the C-15 x 405 pigs showed no effect on any of the immune measures studied. The other immune measures were statistically similar for the two lines of pigs. The Exp-94 line had marginally increased NK activity but reduced lymphocyte blastogenesis and neutrophil chemotaxis compared with the C-15 line.