玉米幼芽提取物对小鼠皮肤成纤维细胞体外抗氧化能力的影响

分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,将传代细胞均匀分成4组:Ⅰ组为空白对照组;Ⅱ组在培养体系中加入终浓度为200μm o l/L的H2O2作用2 h,复制氧化损伤模型;Ⅲ组和Ⅳ组分别用含20 m g/L的0501和0502号玉米幼芽提取物培养液培养24 h,然后再用Ⅱ组的处理方法对细胞进行氧化损伤,研究玉米幼芽提取物对皮肤成纤维细胞体外抗氧化效应的影响。结果表明,Ⅲ组和Ⅳ组细胞凋亡率极显著低于Ⅱ组(P<0.01);扫描电镜下Ⅱ组细胞的细胞膜出现皱缩穿孔等现象,Ⅲ组和Ⅳ组细胞完整性较好,细胞联系紧密;透射电镜观察,Ⅱ组细胞粗面内质网扩张,染色质边集,细胞内出现大量空泡,Ⅲ组和Ⅳ组细胞结构清晰,出现轻度的粗面内质网扩张。表明富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物对体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞具有抗凋亡保护作用,在细胞氧化损伤过程中,对细胞膜蛋白和结构性蛋白有保护作用。     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤UVA照射损伤的保护作用

研究了玉米幼芽提取物(extract of maize plumule,EMP)对长波紫外线(UVA)损伤的小鼠皮肤超微结构、抗氧化酶活性及脂质过氧化作用的影响。结果表明,UVA模型小鼠真皮细胞内出现空泡变性,线粒体肿胀、嵴减少,粗面内质网和核周间隙扩张;表皮细胞微绒毛减少,细胞固缩,细胞核染色质边集。EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度明显减轻,结构基本正常。EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性(P<0.01)及CAT活性(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),与VC的抗氧化作用一致。表明EMP能够抵抗UVA对皮肤组织的氧化损伤。     

玉米幼芽提取物对大鼠乳腺增生的影响

【目的】探讨玉米幼芽提取物对乳腺增生SD大鼠乳腺组织和血清激素的影响,及其抗乳腺增生的作用机理。【方法】以苯甲酸雌二醇联合黄体酮皮下注射方法,制作乳腺增生大鼠模型56只,随机平均分成7组。将玉米幼芽提取物按剂量0,1.25,2.5,5,10,20,40 mg/(kg.d)分别给药,连续20 d,用药结束后测定大鼠血清激素水平;显微镜下观察大鼠乳腺组织。【结果】玉米幼芽提取物中,高剂量组明显改善了病变组织的形态,并且可显著降低模型大鼠的卵泡生成素(FSH)、血清雌二醇(E2)和睾酮(T)水平,同时提高了模型大鼠催乳素(PRL)和血清黄体生成素(LH)水平,对血清孕酮(P)变化的影响不大。【结论】2.5~40 mg/(kg.d)的富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物,可有效防止和治疗大鼠的乳腺增生。     

急性心肌梗死患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽及Ⅲ型前胶原氨基端肽的变化及意义

目的 :探讨急性心肌梗死 (AMI)患者发病后 1个月内心肌纤维化指标的变化规律及其临床意义。方法 :采用放射免疫分析法测定 42例急性心肌梗死发病后第 2、7、14、2 8天血清Ⅰ型前胶原羧基端肽 (PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽 (PⅢNP)含量。结果 :AMI发病后第 7、14、2 8天的血清PⅠCP和PⅢNP水平与对照组比较均明显升高 (P >0 .0 0 1) ,发病后第 7、14、2 8天的血清PⅠCP及PⅢNP维持在较高水平 ,互相比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 :AMI患者血清PⅠCP和PⅢNP含量明显升高并持续 1个月以上 ,反映AMI后心肌间质胶原的合成增加 ,致心肌过度纤维化     

紫杉醇对人皮肤瘢痕成纤维细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的；研究紫杉醇对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。方法：用MTT法及RT—PCR法分别检测紫杉醇对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果：紫杉醇能明显抑制人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达，并呈剂量依赖性。结论：紫杉醇可通过抑制人病理性瘢痕成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA的表达而起到抑制病理性瘢痕增生的作用。     

急性心肌梗死患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽及Ⅲ型前胶原氨基端肽的变化及意义

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者发病后1个月内心肌纤维化指标的变化规律及其临床意义.方法采用放射免疫分析法测定42例急性心肌梗死发病后第2、7、14、28天血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)含量.结果AMI发病后第7、14、28天的血清PⅠCP和PⅢNP水平与对照组比较均明显升高(P>0.001),发病后第7、14、28天的血清PⅠCP及PⅢNP维持在较高水平,互相比较差异无显著性(P>0.05).结论〖HT5"F〗AMI患者血清PⅠCP和PⅢNP含量明显升高并持续1个月以上,反映AMI后心肌间质胶原的合成增加,致心肌过度纤维化.     

玉米幼芽提取物凝胶对家兔皮肤烧伤的抗氧化损伤作用

制备1,1.5和2 mg/g的玉米幼芽提取物(Extract of maize plumule,EMP)凝胶,用2 mol/L的NaOH复制家兔皮肤烧伤模型,并分别用上述EMP凝胶进行治疗,同时设立EMP盐酸溶液阴性对照组、烧伤止痛膏阳性对照组和生理盐水空白对照组,各组均连续处理14 d。于烧伤后第1,7,14和21天取各组家兔烧伤部位皮肤,制成100 mg/g组织匀浆液,检测超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,并进行组织病理学和透射电镜观察,探讨EMP凝胶对家兔皮肤烧伤脂质过氧化损伤和炎症反应的影响。结果表明,与空白对照组相比,EMP凝胶治疗组SOD和CAT活性极显著提高(P<0.01),MDA含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低(除7 d时1 mg/g EMP凝胶治疗组外);与阴性对照组相比,EMP凝胶治疗组SOD和CAT活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)提高、MDA含量显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)降低(除7 d时1 mg/g EMP凝胶治疗组外);EMP凝胶可促进组织细胞生长,减轻皮肤局部组织炎症反应,与阳性对照组结果一致。表明EMP凝胶在皮肤烧伤治疗中具有较强的抗脂质过氧化损伤、抑制炎症及促进愈合的作用。     

shRNA抑制病理性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原的研究

目的 探讨RNA干扰阻断人Ⅰ型胶原α 1链(COL1α1)基因表达对病理性瘢痕的影响.方法 设计并合成针对COL1α1基因的短发夹状RNA(shRNA),构建shRNA达质粒.转染病理性瘢痕成纤维细胞后,分别用RT-PCR、比色法检测COL1α1 mRNA达、Ⅰ型胶原含量.结果 转染特异性shRNA质粒后.成纤维细胞中...     

shRNA抑制病理性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原的研究

目的 探讨RNA干扰阻断人Ⅰ型胶原α 1链(COL1α1)基因表达对病理性瘢痕的影响.方法 设计并合成针对COL1α1基因的短发夹状RNA(shRNA),构建shRNA达质粒.转染病理性瘢痕成纤维细胞后,分别用RT-PCR、比色法检测COL1α1 mRNA达、Ⅰ型胶原含量.结果 转染特异性shRNA质粒后.成纤维细胞中COL1α1 mRNA表达下降,Ⅰ型胶原合成减少.结论 shRNA表达质粒可下调病理性瘢痕成纤维细胞COL1α1基因表达,抑制了Ⅰ型胶原合成.     

玉米幼芽提取物对衰老小鼠心肌自由基代谢和超微结构的影响

小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖生理盐水溶液(125 mg/(kg.d))诱导其衰老,同时分别灌胃10,20和40 mg/(kg.d)玉米幼芽提取物(Extract of maize plumule,EMP),每日1次,连续处理42 d后,测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量,并用透射电镜观察心肌细胞超微结构,研究EMP对D-半乳糖致衰老小鼠心肌自由基代谢和超微结构的影响。结果表明,与对照组相比,D-半乳糖能明显的降低小鼠心肌组织中的SOD、CAT和GSH-Px活性,提高MDA、NO含量;与衰老模型组比较,20 mg/kg EMP处理组小鼠心肌组织的SOD、CAT和GSH-Px活性均极显著升高,MDA和NO含量均极显著降低;与对照组相比,衰老模型组小鼠的心肌Z线变宽、模糊,肌原纤维断裂、溶解、凝集,线粒体肿胀、空泡化、嵴消失;20 mg/kg EMP处理组的以上病变均有明显的改善。这表明20 mg/kg的EMP具有增强衰老小鼠心肌抗氧化酶活性,改善心肌自由基代谢,保护心肌细胞超微结构的作用。     

波长585 nm脉冲染料激光对成纤维细胞增殖以及其前胶原基因mRNA表达的影响

以不同能量密度的脉冲染料激光照射体外培养的正常皮肤的成纤维细胞,照射后继续培养24h,分别以MTT法检测其增殖功能,以定量PCR(LightCycler)法检测其细胞内不同类型的前胶原基因及SMADs mRNA的表达.结果显示能量密度为5 J/cm2和7 J/cm2的脉冲染料激光能抑制体外培养的正常皮肤的成纤维细胞的增殖功能(P＜0.05),在能量密度为5 J/cm2时能显著抑制Ⅰ型前胶原基因α1(P＜0.01)以及SMAD 2,3,4,7 mRNA的表达(P＜0.05或P＜0.01),下调Ⅰ型前胶原基因α1与Ⅲ型前胶原基因mRNA的比率.在能量密度为6,7 J/cm2时能抑制Ⅲ型前胶原基因α1mRNA的表达(P＜0.05),而对Ⅰ型前胶原基因α1,α2的表达与对照无显著性差异.提示波长585 nm脉冲染料激光对成纤维细胞的增殖及其胶原产生的某些相关基因的表达具有直接的作用,且与能量密度有关.     

玉米幼芽提取物对垂体后叶素致家兔心肌缺血的保护作用

采用耳缘静脉注射垂体后叶素(pituitrin, Pit)诱发家兔急性心肌缺血,观察Ⅱ导联心电图心率、S-T段位移及T波波幅;心肌酶(谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶);心肌组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量的变化.结果显示,玉米幼芽提取物可减轻垂体后叶素诱发的家兔心电图缺血性改变(心率变缓、S-T段抬高、T波高耸),抑制血清中AST、LDH、CK活性的升高,并可增加缺血心肌组织中GSH-Px和SOD活性,抑制MDA含量升高.结果表明,玉米幼芽提取物对垂体后叶素致家兔心肌缺血有一定的保护作用.     

CaM对小鼠胎儿成纤维细胞Hsp70表达的影响

[目的]证实小鼠胎儿成纤维细胞中钙调蛋白 (calmodulin,CaM) 基因参与热应激诱导型热休克蛋白70(Hsp70)的基因表达并明确其作用条件.[方法]取12.5 d孕鼠胚胎制备成纤维细胞(MEF),上述细胞随机分为对照组和热应激组:对照组在37℃条件下培养,热应激组包括I组(39℃、0.5 h),Ⅱ组(39℃,1 h),Ⅲ组(39℃,1.5 h),Ⅳ组(41℃、0.5 h),V组(41℃、1 h),Ⅵ组(41℃、1.5 h);每组3个重复.将选择的热应激组和对照组细胞分别加入不同浓度(25、50及100 mm=ol·L<'-1>)钙调蛋白拮抗剂W7,运用RT-PCR检测Hsp70、CaM mRNA表达量.[结果] 39℃和41℃热应激组Hsp70 mRNA表达量显著高于常温对照组(P<0.05):39℃应激1h的Hsp70 mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);39"C应激0.5 h和1 h CaM mRNA表达量极显著高于其它各组(P<0.01);41℃热应激组的CaM mRNA表达量与常温对照组比较差异不显著(P>0.05).在培养液中加100 mmol·L<'-1> W7、分别于37℃和39℃处理1 h后,其成纤维细胞的Hsp70 mRNA表达量极显著低于相应对照组 (P<0.01).[结论]中度热应激条件下,Hsp70和CaM基因表达量呈正相关,且39℃应激1 h可以显著诱导Hsp70和CaM基因表达;CaM通过某种途径参与了Hsp70基因表达.     

五种甘肃道地中药对衰老模型小鼠皮肤的抗衰老作用研究

【目的】研究5种甘肃道地中药抗皮肤衰老作用的差异.【方法】用D-半乳糖处理体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞,分别用纹党、红芪、当归、大黄和半夏的水煎液干预后,试剂盒法检测皮肤成纤维细胞脂褐素(lipofuscin,LF)、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western-blot检测Bax蛋白的表达情况.【结果】与正常组相比,模型组小鼠皮肤成纤维细胞LF、MDA、Ⅲ型胶原蛋白含量、细胞凋亡及Bax蛋白表达显著增加,Ⅰ型胶原蛋白和HYP含量、细胞增殖能力及SOD、GSH-Px活性均显著降低.与模型组比较,各中药组小鼠皮肤成纤维细胞LF、MDA、Ⅲ型胶原蛋白含量、细胞凋亡及Bax蛋白表达呈降低趋势,Ⅰ型胶原蛋白和HYP含量、细胞增殖能力及SOD、GSH-Px活性均呈增高趋势,其中纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.【结论】纹党、红芪、当归、大黄和半夏的水煎液可通过促进皮肤成纤维细胞增殖、提高抗氧化能力和抑制皮肤细胞凋亡发挥抗皮肤衰老的作用,纹党和红芪对皮肤的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

慢性缺氧对小鼠成纤维细胞氨基酸代谢通路基因表达的影响

目的 观察低氧诱导小鼠成纤维细胞L929中氨基酸代谢相关基因mRNA表达变化.方法 L929细胞分别在20％ O2和1％ O2环境中培养24 h,提取总RNA,Agilent mRNA芯片检测基因表达,分析与氨基酸代谢相关的差异表达基因及其信号通路.结果 低氧诱导24 h后,17个氨基酸代谢相关基因出现2.18～6.34倍差异表达(Ddc、Ogdh、Wars2、Il4i1、Haao、Ogdhl、Ehhadh、Cyp1a1、Gls2、Adc、Nos2、Nos3、Dao、Gls、P4ha1、P4ha2、Pycr1),其中14个表达上调,3个表达下降.富集分析表明差异基因聚集在色氨酸(P=0.0 195)、精氨酸和脯氨酸代谢通路(P=0.0297).结论 低氧可诱导小鼠L929细胞发生氨基酸代谢相关基因差异表达,其中色氨酸、精氨酸和脯氨酸代谢通路基因变化最显著.     

扶正活血解毒方干预ANE诱导口腔黏膜成纤维细胞I型胶原表达的实验研究

目的 观察槟榔提取液（areca nut extract,ANE）对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原分泌的诱导作用及扶正活血解毒方的干预作用。方法 体外培养口腔黏膜成纤维细胞,ANE为诱导剂,扶正活血解毒中药药物血清（低、中、高）为干预物;用免疫细胞化学法检测细胞内I型胶原的表达,用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测培养上清I型胶原的含量。结果 ANE对口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的合成有促进作用（P<0.01）,扶正活血解毒方含药血清（中、高）对ANE刺激下的FB胶原合成有抑制作用（P<0.05）。结论 扶正活血解毒中药可下调ANE诱导的口腔黏膜成纤维细胞I型胶原的表达。     

IGF-1、bFGF、ITS、2-ME2对牛耳皮肤成纤维细胞细胞周期的影响

为探讨2-甲氧雌二醇（2-Methoxyestradiol,2-ME2）、胰岛素样生长因子-1（Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1）、碱性成纤维生长因子 （basic Fibroblast Growth Factor,bFGF）、胰岛素-转铁蛋白-硒（Insulin-Transferrin-Selenium,ITS）对体细胞细胞周期的影响,以牛（Bos taurus）耳皮肤成纤维细胞为研究对象,进行流式细胞分析和细胞计数。结果显示,1 μmol/L 2-ME2可显著提高细胞周期中G0/G1期细胞及G1早期（early G1,eG1）细胞所占比例,20 ng/mL IGF-1、10 ng/mL bFGF、ITS及4种细胞因子联合处理对细胞周期中G0/G1期细胞和G1早期细胞所占比例无显著影响,表明2-ME2能够显著影响牛耳皮肤成纤维细胞的细胞周期,研究结果对体细胞核移植技术在短时间内获得更多G0/G1期和eG1期的供体细胞具有重要意义。     

不同冷冻保护剂对黑熊成纤维细胞冷冻效果的影响

选用含有不同浓度的3种冷冻保护剂:二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甘油(GC),对黑熊耳皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,筛选出最佳冷冻保护剂和最佳浓度.用台盼蓝对解冻复苏的细胞进行染色,分析细胞活力,以细胞活率和24 h贴壁率评价冻存效果.结果表明:二甲基哑砜添加浓度7.5%和10%差异不显著,与其他组差异显著;甘油添加浓度10%和15%差异不显著,与其他组差异显著;乙二醇添加浓度15%显著高于其他组.研究结果显示,二甲基亚砜浓度为7.5%对黑熊耳部成纤维细胞冷冻效果最好.     

麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养与核型分析

为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3～4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麇鹿染色体数目为2n=68,核型式为2（M）＋64（A）,XY（A,M）;含10％NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87．78％的贴壁率。     

地鳖肽提取物对小鼠体内抗氧化酶活性和mRNA表达的影响

[目的]探明地鳖肽对小鼠体内抗氧化能力及其作用机制的影响.[方法]小鼠灌服地鳖肽提取物(0、40、80、160mg/kg)连续20 d,采用分光光度法检测小鼠肝肾组织及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量,荧光实时定量PCR分析抗氧化酶mRNA表达.[结果]与对照组相比,地鳖肽组小鼠肝脏、肾脏及血清中抗氧化酶活力明显升高;地鳖肽组小鼠组织中MDA含量显著降低;肝脏中SOD1、SOD2及CAT的mRNA表达量均显著高于对照组,肾脏中SOD1、SOD2、CAT及GSH-Px的mRNA表达量与对照组相比显著提高.[结论]地鳖肽提取物抑制小鼠体内组织中脂质过氧化物生成,提高抗氧化酶活力和上调抗氧化酶基因表达,可能是通过调节抗氧化酶基因的表达从而发挥抗氧化作用.