木霉菌转化体对番茄灰霉病的防治效果

保护地的特殊条件使番茄灰霉病的发生越来越严重，同时由于生产上仍缺少抗病品种，且灰霉病菌已对多种化学杀菌剂产生了抗药性，严重制约了番茄的安全生产。因此筛选或构建具有高效生防活性的新型生物农药具有重要意义。利用木霉菌防治番茄灰霉病已有一些成功的例子，如Elad等、Eden等和Dik等利用339或Trichoderma harzianum成功防治了灰霉病。然而多数生防木霉菌的防效仍难超过化学农药，因此通过生物技术筛选出对番茄灰霉病具有高效生防活性的木霉菌具有重要意义。     

木霉菌防治番茄灰霉病田间药效试验

番茄灰霉病(Botrytis cinerea)是一种世界性分布、发生严重的病害。20世纪80年代初开始在我国蔓延,近年来,随着我国番茄种植面积的逐年扩大,灰霉病日趋普遍。一般年份,不防治田块,病害损失8%～35%,平均为20%,重病年不防治田块,损失30%～60%,平均达50%以上。     

木霉REMI转化体耐热机理的初步研究

本文利用蛋白质电泳、基因克隆和荧光定量PCR等技术对耐高温木霉REMI转化体的抗逆机理进行了初步研究。结果表明,耐高温木霉REMI转化体的蛋白质谱带明显多于出发菌株T21,且差异主要集中在Rf值大于0.593的区域,该区域主要是小分子的热休克蛋白,说明影响耐高温木霉REMI转化体对温度耐受性的蛋白主要以小分子量蛋白质为主。对其中一种热休克蛋白HSP24的基因进行克隆、测序,结果表明不同木霉REMI转化体和出发菌株T21间该基因序列没有差异,但经荧光定量PCR对HSP24基因转录检测表明,耐高温木霉REMI转化体的热激蛋白HSP24的表达量有所增加,从而表明REMI插入提高了该基因的转录水平。     

链霉菌SS9-1发酵条件优化及其对番茄灰霉病的防治效果研究

本实验室前期从铁棒锤根际土壤样品中分离到一株高加索链霉菌Streptomyces ciscaucasicus SS9-1,抗菌活性试验发现其对番茄灰霉病原菌灰葡萄孢Botrytis cinerea具有较好的抑制作用。为进一步提高其对番茄灰霉病的抑菌效果,采用单因素试验、正交试验对SS9-1进行发酵培养基配方和发酵条件优化,并对其发酵滤液进行了番茄灰霉病的抑菌作用试验及盆栽防治效果试验。结果表明,菌株SS9-1最佳发酵配方为：可溶性淀粉4%、KNO₃ 1%、酵母浸粉0.25%、NaCl 0.2%、MnCl₂·4H₂O 0.002%;最佳发酵条件为：装液量150 mL、接种量3%、初始pH 8.0、发酵温度28℃、发酵时间7 d。平板对峙试验发现,番茄灰霉病菌丝受发酵滤液影响后,出现膨大畸变现象;菌株SS9-1对番茄灰霉菌孢子的萌发也具有很强的抑制作用,处理12、24h后萌发抑制率分别为97.83%和96.07%。盆栽试验中,菌株SS9-1发酵滤液原液防治效果达到了98.43%,明显高于药剂对照40%嘧霉胺SC 500倍稀释...     

绿色木霉对灰霉病菌拮抗机制的初步研究

绿色木霉对灰霉病菌拮抗机制的初步研究赵蕾（山东省科学院生物研究所济南２５００１４）利用木霉菌防治植物病害已有许多成功的先例,其拮抗作用是多机制性的,一般认为有３种：竞争作用、抗生作用及重寄生作用［１～３］。作者将分离到的绿色木霉进行了防治灰霉病的田间...     

3亿CFU/g哈茨市霉菌可湿性粉剂防治番茄灰霉病田间药效评价

明确3亿CFU/g哈茨木霉菌可湿性粉剂对番茄灰霉病的田间防治效果、使用剂量及施药适期,评价该药剂对番茄生长安全性及非靶标有益生物的影响.试验结果采用邓肯新复极差(DMRT)法对试验数据进行统计分析.供试药剂3亿CFU/g哈茨木霉菌可湿性粉剂有效成分2 500、1 875、1 500g/hm2的3个处理施药后7d对番茄叶片灰霉病防效在72.58％～58.33％之间,对番茄果实灰霉病防效在77.04％～35.84％之间.与对照药剂相比3亿CFU/g哈茨木霉菌可湿性粉剂高剂量有效成分2 500g/hm2施药后7d的对番茄叶片灰霉病防效与对照药剂的防效相当,对番茄果实灰霉病防效略高于对照药剂的防效.3亿CFU/g哈茨木霉菌可湿性粉剂对番茄灰霉病有一定的控制作用,在番茄灰霉病始发期使用效果最好,适宜用量以有效成份2 500g/hm2为宜.     

番茄灰霉病菌胁迫下壮观链霉菌SC11对寄主的促生作用及防病机理

 放线菌SC11是一株从土壤中分离的具有广谱抑菌活性的壮观链霉菌。平板对峙试验表明SC11能显著抑制离体灰葡萄孢的生长;盆栽试验表明,SC11对番茄灰霉病的防病效果达到65.3%,高于对照药剂腐霉利(55.8%);对番茄植株内防御酶活性、丙二醛(MDA)和脯氨酸含量的测定表明,SC11处理可诱导植株叶片组织防御酶活性、脯氨酸含量等升高,而MDA含量降低;SC11还能明显促进番茄幼苗的生长,株高、茎粗、叶绿素含量,和对照相比均达显著水平。上述结果表明,壮观链霉菌SC11能有效防治番茄灰霉病,诱导植株防御酶活性的提高,促进番茄幼苗生长。     

生防木霉菌T23及其诱变体的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对生防木霉菌T23及其诱变体进行基因组DNA多态性分析,从38条随机引物中筛选出条带清晰、重复性好的10条引物,共扩增出145条RAPD谱带,多态性标记数为119条,占扩增总带数的82.1%。DNA片段大小范围在564～3 530 bp内,大多数集中在564～2 027 bp。并利用NTSYS统计软件对扩增结果进行统计和聚类。结果表明,生防木霉菌T23诱变前后具有一定的遗传稳定性和遗传多态性;生防木霉菌T23经过尿素、过磷酸钙、多菌灵、甲基硫菌灵、百菌清的长时间诱导能发生遗传变异。     

哈茨木霉菌与5种杀菌剂对番茄灰霉病菌的协同作用

采用对峙法、菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定了哈茨木霉菌Trichoderma harzianum与5种不同作用机制杀菌剂联用对番茄灰霉病菌Botrytis cinerea的抑制作用。结果表明,联用可增强哈茨木霉菌及啶酰菌胺、嘧菌酯、咯菌腈、氟啶胺和啶菌噁唑5种供试药剂对番茄灰霉病菌的抑制作用,即具有协同作用,因此可考虑将杀菌剂与木霉菌联合用于番茄灰霉病的防治。     

拮抗放线菌B1菌株鉴定及其防治番茄灰霉病的初步研究

为明确放线菌B1菌株在植物病害生物防治中的应用潜力,采用平板对峙培养法、离体叶片和果实及温室盆栽苗测定其抑菌作用,通过多相分类法研究其分类地位,并且采用单因子试验与正交试验相结合的方法,筛选出该菌株的液体发酵培养基配方.结果表明:菌株B1对10种植物病原真菌和3种植物病原细菌有抑制作用,其中对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、小麦纹枯病菌、甘蓝黑腐病菌和西瓜果腐病菌的抑制作用较强,对番茄灰霉病菌的生长抑制率达86.25%;菌株B1的代谢产物对番茄灰霉病菌菌丝有致畸作用;菌株B1发酵上清液在离体叶片和活体植株上对番茄灰霉病具有良好的生防作用,其防治效果分别为68.80%和64.03%.根据形态特征、培养性状、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果,将菌株B1初步鉴定为淡紫灰链霉菌Streptomyces lavendulae.通过正交试验筛选出菌株B1的液体发酵培养基组成为:葡萄糖15 g、玉米浆20g、NH4H2PO40.5 g、MgSO41.0 g、自来水1 000mL,pH 7.2～7.4.     

木霉REMI突变株主要生防酶活性改变及其基因部分序列差异的研究

本文探讨了来源于同一出发菌株木霉T21的不同木霉REMI突变株的主要生防酶活性的改变及其基因部分序列的差异,利用生化技术测定了木霉几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶酶活性,并对这两种酶的基因部分序列进行了分析.结果表明,木霉REMI突变株几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性变化较大;相对于出发菌株T21,菌株Ttrm68和Ttrm31酶活性极显著高于出发菌株T21,而Ttrm94则极显著低于T21.采用简并引物克隆几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的部分序列,发现菌株Ttrm68、Ttrm31在几丁质酶基因中插入了GGTATCGATATCGAC片段,菌株Ttrm94在β-1,3-葡聚糖酶基因中插入了GTC片段.     

生防菌株YB-81的鉴定及其对番茄灰霉病的防效

为明确生防菌株YB-81对番茄灰霉病的防病作用及其分类地位,采用平板对峙及含毒介质法测定了其对番茄灰霉病菌的抑菌作用,并测定了该菌株盆栽防病效果及抑菌谱,通过形态学、生理生化特征以及分子鉴定相结合的方法鉴定了YB-81菌株。结果表明:YB-81菌株对番茄灰霉病菌抑菌作用强,抑菌带和抑制率分别为15 mm和80.5%;盆栽防效较好,发酵产物稀释10倍的预防效果达到77.5%,治疗效果不及预防效果;YB-81菌株具有广谱的抑菌活性;根据形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析结果将YB-81菌株鉴定为枯草芽胞杆菌。     

哈茨木霉LTR-2双价基因重组菌株的构建及其防治效果

本文利用限制性内切酶介导法转化哈茨木霉LTR-2,获得具有双价基因(glu14、chi42)的重组生防菌株.试验得到的木霉转化子具有遗传稳定性,于无药PDA平板上连续转接6次后,在Hyg 200 μg/mL的PDA平板上仍可继续生长.PCR扩增及Southern杂交证实目的基因已随机插入木霉基因组DNA上,本试验转化子均为单拷贝插入.转化子的β-1,4-葡聚糖酶和几丁质酶水解活性较出发菌株LTR-2显著提高(P＜0.01),其中转化子L-15的两种水解酶活性均最高.转化子在温室条件下对番茄晚疫病、茄子猝倒病和黄瓜灰霉病均有较好的防治作用,但不同处理间存在显著性差异(P＜0.01),其中转化子L-15最高,对3种病害的防治效果分别达到了91.5％、94.9％和83.8％,较出发菌株LTR-2处理分别提高了53.5％、55.9％和33.5％.结果表明,利用REMI技术,将β-1,4-葡聚糖酶基因glu14和几丁质酶基因chi42重组到木霉染色体DNA上,是获得高效重组菌株的有效手段.     

盾叶薯蓣灰霉病(Botrytis cinerea)的研究

对一种引起盾叶薯蓣叶、茎呈暗绿色至黑褐色水渍状软腐的病害进行了调查 ,并作了鉴定。结果明确其为灰葡萄孢菌 (Botrytis cinerea Pers.ex Fr )引起的一种新病害 ,根据症状和病原鉴定将该病称为盾叶薯蓣灰霉病。该病原菌生长温度 0～30℃ ,最适生长温度 10～ 2 5℃。病害在每年春季、夏初和秋末 ,雨水多的年份发生严重。     

出芽短梗霉对苹果采后灰霉病的防治

通过稀释平板法和离体果实接种法从苹果表面分离筛选到1株对苹果采后灰霉病Botrytis cinerea具有显著防治效果的酵母菌株2SP,该酵母菌孢子悬浮液对苹果灰霉病的防治效果为78.45%,对灰霉菌孢子的萌发抑制率为90.0%,而过滤上清液和离心灭菌上清液对灰霉病菌防治效果较差,表明营养和空间竞争可能是该酵母菌抑制灰霉病发展的主要机制。该酵母菌在苹果伤口接种后置于4℃低温条件下,30 d后仍能存活,且酵母菌的数量高于起始值。通过26S rDNA D1/D2序列分析,将该酵母菌株初步鉴定为出芽短梗霉Aureobasidium pullulans。     

Survival in the phylloplane of an introduced biocontrol agent (Trichoderma harzianum) and populations of the plant pathogenBotrytis cinerea as modified by abiotic conditions

Leaf populations ofTrichoderma were studied on tomato, pepper and geranium plants incubated under various conditions. Treatments involved high (>90%) or lower (75–85%) relative humidity (r.h.), temperatures of 15±3°C or 25±3°C, and soil fertilization with formulations of 2,2,5%, 3,3,8% or 5,3,8% NPK. The size of populations on leaves treated with the fungusTrichoderma harzianum differed according to plant species, leaf age, length of incubation, atmospheric conditions, and plant nutrition.T. harzianum populations were promoted in many cases by high r.h. and by 3,3,8% NPK. Interactions of introduced populations ofBotrytis cinerea with populations ofT. harzianum on tomato leaves under combinations of the above conditions showed that the population ofB. cinerea wasca tenfold lower in the presence ofT. harzianum than in the absence of this fungus.     

Effect of microclimate and nutrients on development of cucumber gray mold (Botrytis cinerea)

Infection of young parthenocarpic cucumber fruits byBotrytis cinerea begins in the petals. Removing petals or washing nutrients from the flower significantly reduced infection. Germination of conidia occurred at relative humidity (r.h.) above 92%, but when water deposition on artificial surfaces was prevented, germination did not occur even at 98% r.h. Germination of conidia on petals is promoted by deposition of an aqueous film not visible on the petal surface by the bare eye (but demonstrable by CoCl₂). Provided there is a film of water on the surface of the host, germination and the infection process occur at a wide range of temperatures up to 25 °C. Pre-exposure of cucumber plants at temperatures as high as 30 °C or as low as 8 °C, prior to their infection and incubation under conditions conducive to gray mold, resulted in greater severity of the disease on young fruits or leaves as compared with plants previously incubated at 10-25 °C. The relevance of these results to cultural control of gray mold is discussed.     

寡雄腐霉分泌物对植物病原真菌的抑制作用及其对番茄灰霉病的防治效果

为了探明寡雄腐霉分泌物中小分子量物质对病原真菌的作用,应用玻璃纸法和生长速率法测定了分子量小于8 kD的寡雄腐霉分泌物对9种植物病原真菌菌丝生长的抑制作用。结果表明,分子量小于8 kD的寡雄腐霉分泌物能强烈抑制森禾腐霉、灰葡萄孢、黄色镰刀菌的菌丝生长,抑菌率分别达到88．9%、86．7%和84．6%;对供试的4种腐霉以及尖孢镰刀菌的4个专化型的抑菌率均达显著性差异。在扫描电镜下可见,经寡雄腐霉分泌物处理的灰葡萄孢菌,菌丝细胞壁破裂、穿孔、干瘪,且菌丝分化出的分生孢子梗少,产孢量明显下降。温室盆栽试验表明,寡雄腐霉滤液对番茄灰霉病具有显著的预防保护作用与治疗作用,其预防保护作用与杀菌剂多菌灵1000倍的防治效果达到同一显著水平。     

杨树溃疡病生防菌株的抑菌机理研究

黄绿木霉YGF9菌株和木贼镰刀菌LX6F2菌株分别为分离自杨树组织和杨树林土壤中的2株生防菌。为了研究黄绿木霉和木贼镰刀菌对杨树溃疡病菌葡萄座腔菌的生防抑菌机制,从生防菌株对病原菌代谢系统和生理生化的影响2个方面研究了生防菌株的抑菌机制。结果表明,两生防菌株发酵液的正丁醇提取物可降低病原菌菌体的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)与辅酶I的活性,使Na~+,K~+-ATP酶、Mg~(2+)-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶的活性急剧下降;两生防菌株可显著提高病原菌菌丝体的电导率和丙二醛(MDA)含量,降低病原菌蛋白质含量。说明两生防菌株可通过影响病原菌的代谢系统和生理过程来发挥其抑菌作用。     

番茄灰霉病生防细菌TD-7的鉴定、发酵条件优化及其防治效果

通过平板稀释分离法,从多年生草本植物薄荷根际土壤中分离到一株对灰葡萄孢Botrytis cinerea抑菌活性良好的细菌TD-7。通过形态特征和16S rDNA、ITS序列分析,鉴定该菌为解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens,并对其发酵滤液抑菌机理、最优发酵条件、最优发酵培养液组分及防治效果进行了研究。研究发现,菌株TD-7发酵滤液对番茄灰霉菌孢子的萌发有强烈的抑制作用,对菌丝生长抑制率在95%以上。皿内酶分泌试验发现,该菌可分泌几丁质酶、纤维素酶和蛋白酶,未检测到β-1,3-葡聚糖酶活性。发酵滤液抑菌活性最强的条件为在250 mL三角瓶中,将种子液按3%的体积比接种到50~75 mL培养液中,初始pH 8.0,温度32~36℃,转速200 r/min,发酵5 d。通过正交优化,得到最佳发酵培养液配方为玉米粉3%、蛋白胨1.5%、KH₂PO₄ 0.05%。经摇床发酵条件及发酵培养液组分优化,菌株TD-7发酵滤液抑菌活性提高了26.39%。该菌的发酵液对温室盆栽及田间大棚中的番茄灰霉病均具有良好的防治效果,分别为80.61%和87.70%。滤液稳定性试验结果表明,菌株TD-7发酵滤液中活性物质具有较广的pH适应范围（pH 4.0~9.0）,在高温和紫外光照射下较稳定,有制成生物制剂应用于番茄灰霉病生物防治的潜力。