核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

利用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物连接进线状克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ后获阳性重组质粒。用ＥｃｏＲＩ及ＳｍａＩ双酶切阳性重组质粒ＤＮＡ,回收４６３ｂｐ的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对４头鼻内人工感染ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的     

用DNA-RNA杂交检测新城疫病毒的研究

用光敏生物素标记鸡新城疫病毒ｃＤＮＡ，制备核酸探针，经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后，探针同该ｃＤＮＡ的ＰＣＲ产物、ＰＣＲ产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应，与ＩＢＶ、ＩＬＴＶ、ＭＧ和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应，田间病料的杂交试验也表明，该ｃＤＮＡ探针是敏感且特异的检测方法     

固氮粪产碱菌基因文库的构建及ntrC的克隆

采用广泛寄主范围的粘粒载体ｐＬＡ２９１７构建粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ的基因文库。以巴西固氮螺科菌Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｎｔｒＣ ＤＮＡ为探针，经菌落杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选获得含ｎｔｒＣ－ｌｉｋｅ基因的阳性克隆ｐＬＡＦ５８，建立了含ｎｔｒＣ同源序列的９．５ｋｂ ＳａｃＩ片段的物理图谱，采用巴西固氮螺菌ｎｔｒＢ ＤＮＡ探针杂交证明粪产碱菌ｎｔｒ     

玉米转座因子Ac在转基因烟草及其后代中的转座行为

用带嵌合基因３５Ｓ－Ａｃ－ＧＵＳ的农杆菌双元载体转化普通烟草品种Ｎｃ８９,对转基因植株及其回交后代,进行ＧＵＳ组织化学分析,检测到转座因子Ａｃ在部分Ｔ０代和ＢＣＦ１代植株中转座。用Ａｃ作探针,与上述Ｔ０代和ＢＣＦ１代植株的基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,结果表明,Ａｃ从原来所在的Ｔ－ＤＮＡ解离,并整合到烟草基因组的其它位点。     

苜蓿中华根瘤菌042B与公共结瘤基因nodABC有关的大片段物？…

将苜蓿中华根瘤菌０４２Ｂ总ＤＮＡ提取,用Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切后回收２０－３０ｋｂ长的片段,以ｐＬＡＦＲ３为载体,构建基因文库。用苜蓿中华根瘤菌ｎｏｄＡＢＣ作探针,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交获得了三个阳性克隆Ａ,Ｂ和Ｃ,将这３个阳性克隆所携带的质粒分别命名为ｐＸＣＡ,ｐＸＣＢ,ｐＸＣＣ。在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的帮助下,将这３个质粒分别转入ｎｏｄＣ＾－突变株ＡＫ１６５７后接种苜蓿,携带ｐＸＣＢ质粒的接合     

猪繁殖与呼吸综合症病毒分离毒株基因型的鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株ＯＲＦ７及部分３‘端非编码区基因序列,设计合成了一对美洲型毒株特异性引物,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地从６株ＰＲＲＳＶ国内分离株ＢＪ１－６株中扩增出与预期大小相同的基因片段,大小约５７１ｂｐ,与美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株扩增产物大小相似,扩增产物经限制性内切酶ｐｖｕⅡ酶切作ＲＦＬＰ分析证实ＲＴ－     

普通小麦与无融合生殖披碱草属间杂种F1的产生及其分子鉴定

本研究以普遍小麦品种Ｆｕｋｕｈｏｋｏｍｕｇｉ为母本，以无融合生殖披碱草Ａ．Ｌｏｖｅ ｅｔ Ｃｏｎｎｏｒ；２ｎ＝６ｘ＝４２）品系１０５０为父本进行杂交，利用胚拯救技术，对杂种幼胚进行愈伤组织诱导、植株再生、获得了生长正常的属间杂种Ｆ１。对所获杂种在幼苗期用ＲＡＰＤ标记进行鉴定，结果表明，有２１个引物的扩增产物Ｆ１呈现共显性，占扩增引物总数的２０．５９％，有６１个引物的扩增产物Ｆ１偏向父本，占扩增引和     

南瓜属三个种的亲缘关系与品种的分子鉴定研究

用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,对南瓜属三个主要栽培种即美洲南瓜、中国南瓜（Ｃ。ｍｏｓｃｈａｔａＤ．）和印度南瓜（Ｃ．ｍａｘｉｍａＤ．）的２３个品种（系）及种间杂交后代进行亲缘关系与品种（系）的分子鉴定研究。从２００个随机引物（１０ｂｐ）筛选出１７个引物,对２３个南瓜品种（系）的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,共产生８０条扩增带,其中７７条在南瓜属三个种间表现出差异,可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标     

番茄中反义ACC合成酶基因的导入与乙烯生物合成的控制

利用农杆菌ＬＢＡ４４０４携带反义ＡＣＣ合成酶基因和卡那霉素抗性基因，采用叶盘法转化番茄栽培品种“丽春”子叶，通过组织培养获得了能在卡那霉素培养基上生长的再生植株并进一步培养获得了延缓成熟和衰老的番茄果实。经过ＤＮＡ杂交和ＲＮＡ杂交检测，证明反义ＡＣＣ合成酶基因已插入番茄基因组中，并顺利地表达。     

马铃薯32 kD抗菌蛋白的cDNA分子克隆研究

以马铃薯抗青枯病品种为试验材料,采用ｍＲＮＡ微量制备和ｃＤＮＡ快速合成系统,以噬菌体λｇｔ１１为载体,构建ｃＤＮＡ表达文库。以３２ｋＤ抗菌蛋白ＡＰＩ抗体为探针,采用免疫杂交技术筛选得到了阳性克隆。     

从棉花组织中提取棉花曲叶病毒基因组DNA之方法

本研究比较了５种方法从棉花叶中提取棉花曲叶病毒基因组ＤＮＡ的提取效果。对不同的ＣＬＣｕＶ分离物的ＰＣＲ扩增表明，通常用于双生病毒基因组ＤＮＡ提取的ＮａＯＨ法和ＣＴＡＢ提取的ＤＮＡ无法用于ＰＣＲ检测，但ＣＴＡＢ法提取的ＤＮＡ可用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交。有３种方法可有效地提取ＣＬＣｕＶ ＤＮＡ，供ＰＣＲ扩增使用，这３种方法的共同点是去除了棉花组织中的干扰物质。     

通过AFLP-DNA指纹的计算机分析进行水稻种子鉴定

本研究用１２对引物组合对杂交水稻生产中广泛应用的优良杂交组合及其亲本（共１５个材料）进行了ＡＦＬＰ分析。通过优选,筛选出３对引物,即Ｅ－ＡＣＴ／Ｍ－ＣＡＣ,Ｅ－ＡＡＣ／Ｍ－ＣＡＡ及Ｅ－ＡＡＧ／Ｍ－ＣＡＡ,它们是本研究中用来区分所研究的１５个材料所需的最少引物组合。然后根据所选用的１６个多态性ＤＮＡ条带的有无,把每个材料的ＤＮＡ指纹转换成由１和０组成的指纹数据。在此基因上,开发一套应用软件,在实际应     

苏云金芽胞杆菌新菌株S184 cry1Ab基因的克隆

通过对ＧｅｎＢａｎｋ中ｃｒｙ１类基因序列的保守区进行分析,设计一对针对其保守区的引物Ｙ５－１（ＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＴＴＡＣＡＧＧＡＧＧ）和Ｙ３－１（ＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣ ＧＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＣＣＡＣ）,对苏云金芽胞杆菌（Ｂａｘｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）新菌株Ｓ１８４质粒ＤＮＡ进行扩增,得到一大小为１．５ｋｂ的ＤＮＡ片段,序列分析显示该片段与ｃｒｙ１因基因高度同源。以此片段为     

cDNA芯片制备条件的优化

应用SpotBotTM芯片点样仪对4种不同的芯片点样液(3×SSC、50%DMSO、3×SSC+1.5 mol/L甜菜碱和MSP)和5个不同公司生产的7种芯片片基(UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine、SuperAmine Barcoded、Baio氨基载玻片、PL-100C多聚-L-赖氨酸片基和POLY-PREPTM片基)进行了比较分析,发现UltraGAPSTM、GAPSⅡ、SuperAmine和SuperAmine Barcoded片基用3×SSC+1.5 mol/L甜菜碱能得到最佳的点样和杂交结果.同时对克隆PCR产物的扩增和纯化方法、用于点样的DNA样品的浓度、点样环境条件(温度、相对湿度等)、点样后芯片的处理方法、探针的标记方法、芯片的杂交及杂交后的处理等进行了比较、分析和优化.应用优化后的条件成功地在每张芯片上点制27 648个点,并杂交、扫描得到高质量的芯片结果.     

固氮粪产碱菌中nif,ntr和gln基因鉴定及nifA克隆

本工作采用＾３２Ｐ标记的与固氮（ｎｉｆ）和一般氮代谢（ｎｔｒ和ｇｌｎ）系统有关的基因探讨，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤＫ、ｎｔｒＡ，ｎｔｒＣ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＤ同源的ＤＮＡ序列。以Ａｚｏｓｐｉｒｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｎｉｆＡ ＤＮＡ为探针，经三轮杂交筛选。     

水稻农垦58与农垦58s的RAPD和ISSR分析

以光敏核不育水稻农垦５８ｓ及其原始株农垦５８核ＤＮＡ为模板,进行了ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ多态性分析,结果表明：在可扩增的１５４个ＲＡＰＤ引物和７８个ＩＳＳＲ引物中,８个ＲＡＰＤ引物和７个ＩＳＳＲ引物的扩增产物表现出ＤＮＡ多态性,ＲＡＰＤ－ＰＣＲ产物的多态性标记分别出现在农垦５８ｓ,农垦５８或二者同时出现,而ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物的多态性标记只出现在农垦５８或农垦５８ｓ中。获得多态性ＲＡＰＤ标记及ＩＳ     

水稻几丁质酶基因的克隆及序列分析

采用ＰＣＲ技术从水稻基因组ＤＮＡ中扩增出２个编码几丁质酶基因片段ＲＣＨ１０和ＲＣＨ８,片段大小分别为１０２３ｂｐ和９７６ｂｐ。将ＰＣＲ产物直接做ＮＤＡ序列分析,证明扩增出的２个片段具有编码Ⅰ类几丁质酶的基本结构,即（１）Ｎ－端信号肽区;（２）ｈｅｖｅｉｎ ｄｏｍａｉｎ结构区;（３）可变间隙区;（４）催化结构区。其中ＲＣＨ１０的核苷酸序列与文献报道相比同源性为９７％,氨基酸序列同源性为９３％;ＲＣＨ     

利用RAPD技术检测转绿型白化突变系W25基因组的变化

转绿型白化突变系Ｗ２５系γ射线辐照籼型温敏核不育水稻２１７７ｓ获得的一个叶色突变体。在整个生育阶段，其叶色呈现白色－转绿－返白－复绿规律变化。ＲＡＰＤ分析结果表明，７０个随机引物中有３个引物不能扩增出多态性ＤＮＡ，共扩增出４９３条ＤＮＡ条带，平均每个引物７．４条，其中引物Ｈ０５能扩增出Ｗ２５和２１７７ｓ多态性产物，２１７７ｓ表现出缺失２条特异性ＤＮＡ条带。     

结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片

基因芯片(gene chip)是依据核酸杂交原理发展的一种生物新技术,在生命科学研究领域具有重要的应用价值.本研究将不对称PCR和基因芯片两种技术相结合,构建了同步检测鸡(Gallus gallus)传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的共检基因芯片.分别选取ILTV的胸苷激酶(thymidine kinase,TK)和糖蛋白B(glycoproteins B,gB)基因、NDV的融合蛋白(fusion,F)和血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemagglutinin-neuraminidase,HN)基因以及IBV的膜蛋白(membrane,M)和核衣壳(nucleocapsid,N)基因设计引物,从重组质粒菌中扩增制备探针基因,用乙醇沉淀法纯化后点制于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;靶基因用cy3标记引物,进行不对称PCR扩增,扩增的荧光标记单链产物与芯片杂交.不对称PCR结果显示,当限制性引物与非限制性引物浓度比例在1:10时ILTV-TK、NDV-HN和IBV-N的单链产物增加最多,当浓度比在1:20时,ILTV-gB、NDV-F和IBV-M的单链产物增加最多;相应的标记样品与3种病毒检测芯片杂交后,均出现较强的杂交信号,而阴性对照检测不到荧光信号,灵敏性实验表明,当DNA浓度为1.8x 104拷贝时杂交仍为阳性.本研究构建的诊断基因芯片对12份临床样品进行初步应用检测,与PCR检测技术检出率基本一致.本实验所建立的联合检测基因芯片能够快速、准确、高通量的诊断NDV-IBV-ILTV,可以应用于集约化养殖业中对多种鸡疫病病毒的检测.     

固氮粪产碱菌nifH基因的亚克隆及其启动子的核苷酸序列分析

采用＾３２Ｐ标记的巴西固氮螺菌Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｎｉｆＨ ＤＮＡ探针，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ Ａ１５０１总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ同源的ＤＮＡ序列。在不同ＮＨ４＾＋浓度下测定ｎｉｆＨ－ｌａｃＺ融合基因在粪产碱菌结合子中的β－半乳糖苷酶活性，结果证明该融合基因的表达受