油菜单倍体植株叶原生质体培养再生植株

以我校选育的９４５９１、３７３和９５３８６３个油菜品种的花粉植株为材料,切取其无菌试管苗幼嫩叶片,将其切成１－２ｍｍ细条游离原生质体。原生质体培养采用液体浅层培养,双层培养法,培养基为加有不同细胞分裂素,生长素和天然有机成分的ＭＳ液体培养液。     

苹果单倍体原生质体培养再生植株

以富士单倍体试管苗幼叶和幼叶诱导的愈伤组织为材料制备原生质体 ,采用不同培养方法获得原生质体愈伤组织 ,在分化培养基上成功地诱导原生质体来源的愈伤组织再生不定芽。试验结果显示试管苗幼叶诱导的愈伤组织是制备高质量原生质体的良好材料 ,每g愈伤组织可制备原生质体 4 3× 1 0 6个 ;海藻酸钠球培养法是苹果原生质体培养的适宜方法 ,最终植板率达 1 5 % ;在分化培养基中添加精氨酸能有效提高愈伤组织不定芽分化能力 ,原生质体来源的愈伤组织分化频率高达 8 8%。     

沙葱叶基愈伤组织原生质体再生体系的建立

沙葱是一种具有抗旱抗寒、抗病性和适应性强等生理特性的荒漠植物。为开发利用其固有的遗传资源,本研究利用细胞工程技术建立了沙葱（Allium mongolicum Regel）叶基愈伤组织原生质体的分离、培养和植株再生实验体系。研究结果表明,酶法分离原生质体的产率和分裂频率明显取决于用于制备原生质体的愈伤组织的状态。转代培养7-10d的松软愈伤组织可分离出大量有活性的。在附加2.0mg/L2,4-D、0.2mg/L激动素、500mg/L水解乳蛋白、0.4mol/L甘露醇和2%蔗糖的MS培养基中进行液体浅层培养,4~5d后出现第一次原生质体分裂;7~10d出现第二次分裂。结果显示原生质体的分裂频率大约为5%;4周后,可见到小愈伤组织。当将原生质体分裂形成的愈伤组织转移到附加2.0mg/L6-苄氨基嘌呤（或激动素）和0.4mg/L萘乙酸（NAA）的MS固体培养基上,并在低光照条件下培养后,从愈伤组织上分化出了不定芽,进而发展成小植株,并移栽成活。本研究对沙葱抗逆遗传品质用于经济植物遗传改良的研究奠定了可行的实验基础。     

桧状青霉原生质体制备和再生的研究

本文对桧状青霉H16的原生质体制备和再生的相关影响因子进行了初步的研究。结果表明：于30℃,转速为200 r/min的SDYS培养基中培养了16 h的菌丝,经S1溶液洗涤后,在1 mol/L的NaCl为等渗溶液,采用浓度为10 mg/mL的酶液,酶解温度为35℃,转速为100 r/min的条件下处理1.5 h时原生质体量达到最佳,本实验范围内最高达到6×106个/mL;同时,选取含有25 mmol/L Ca2＋的改良的察氏培养基培养经S2洗涤的原生质体时,原生质体可以达到较佳的再生率,本实验范围内最高达到24.3%。该研究为桧状青霉后期的菌株改造和遗传转化体系的建立奠定了基础。     

黑曲霉Ni-5k原生质体的制备和再生

研究不同配比的酶解液、菌丝的菌龄、酶处理的温度和时间、培养方法及其他因素对黑曲霉(A sp erg illus n ig er)N i-5k原生质体的形成量和再生率的影响,结果表明,酶解液浓度1.0%(其中含纤维素酶0.7%,蜗牛酶0.2%,溶菌酶0.1%),菌龄18 h、酶解温度30°C、酶解时间3 h,原生质体的形成量达到106个/mL;采用双层平板法于32°C再生,再生率达39%。     

辣椒子叶培养及植株再生

辣椒的离体培养再生植株,国内外均有成功的报道。以前的研究多着重于激素配比的探索方面,少有对环境因素如光强,暗处理时间的报道。本文在前人工作的基础上,对激素配方和环境因素均做了较为系统的探讨,并在此基础上建立了一套较理想的植株再生体系,为辣椒的遗传转化奠定了基础。     

蜜蜂球囊菌（Ascosphaerapis）原生质体制备及再生

为建立高效稳定的蜜蜂球囊菌似scosphaeraapis）遗传转化体系,构建具有不同表型特征的球囊菌转化子,本实验对影响蜜蜂球囊菌菌株原生质体制备及再生的因子进行了系统的研究,同时对蜜蜂球囊菌原生质体的释放及再生过程进行了显微观察。结果表明,采用液体培养基进行24h培养的蜜蜂球囊菌菌体,在28℃条件下,应用50mg／mL的崩溃酶,经4h酶解所制备的原生质体释放量最大,达到34．00×10^5／mL。在上述条件下,采用0．8mol／L柠檬酸与NaCl的混合液作为稳渗剂,原生质体的再生率也较高,达到53．06％。蜜蜂球囊菌以菌丝断裂方式释放原生质体,原生质体再生时表现为原生质体先是突出,其后延长,并最终发育成为正常菌丝。本实验首次优化了蜜蜂球囊菌原生质体制备实验流程及原生质体再生最佳条件,为深入研究蜜蜂球囊菌的致病机理及寻找蜜蜂球囊菌致病相关基因奠定基础。     

小麦幼穗培养的植株再生及变异

对11个基因型冬小麦护颖分化期的幼穗进行诱导培养,愈伤组织诱导率接近100％。经120余天继代培养后再生植株,再生率达73.7—100％。将SC1代植株移入田间,在219株植株中观察到育性、株高、抽穗期、穗形、芒形、籽粒(大小、形状和颜色)、颖色和腊性等广泛变异。经测定,籽粒α-淀粉酶和醇溶蛋白也出现变异。11个不同基因型的变异频率不等,各性状的变异频率也不相同。